Methodenartikel

Die Induktion von ischämischem Schlaganfall und Ischämie-Reperfusion bei Mäusen die Mittel Artery Occlusion Technik und Visualisierung von Infarktbereich verwenden

DOI:

10.3791/54805

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2. Februar 2017

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1Department of Biochemistry and Molecular Biology, Miller School of Medicine, University of Miami, 2Miller School of Medicine, University of Miami, 3Jerzy Kukuczka Academy of Physical Education

In diesem Artikel

Zusammenfassung

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Wir beschreiben ein Mausmodell für einen Schlaganfall, der durch den Verschluss der mittleren Hirnarterie mit einer silikonbeschichteten Naht induziert wird. Das Protokoll kann angewendet werden, um einen dauerhaften Verschluss oder eine vorübergehende Ischämie mit anschließender Reperfusion zu induzieren.

Zusammenfassung

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Zerebrovaskuläre Erkrankungen sind in der Weltbevölkerung weit verbreitet und umfassen verschiedene Arten von Erkrankungen, einschließlich Schlaganfall. Um den Einfluss eines Schlaganfalls auf Gewebeverletzungen zu untersuchen und die Wirksamkeit therapeutischer Interventionen zu bewerten, wurden mehrere experimentelle Modelle in einer Vielzahl von Spezies entwickelt. Dazu gehören die vollständige globale zerebrale Ischämie, die inkomplette globale Ischämie, die fokale zerebrale Ischämie und die multifokale zerebrale Ischämie. Das in diesem Protokoll beschriebene Modell basiert auf dem Verschluss der mittleren Hirnarterie (MCAO) und ist der Kategorie der fokalen Ischämie zugeordnet. Diese Technik führt zu einer konsistenten fokalen Ischämie in einem streng definierten Bereich der Hemisphäre und ist weniger invasiv als andere Methoden. Das beschriebene Verfahren wird an Mäusen durchgeführt, da mehrere genetische Varianten verfügbar sind und eine hohe Anzahl von Tests für Mäuse standardisiert ist, um die Bewertung des Verhaltens und des Neurodefizits zu unterstützen.

Einleitung

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Die Studie von kardiovaskulären Erkrankungen, wie Schlaganfall, beruht auf der Verwendung von in vivo - Modellen. Um die möglichen Auswirkungen von Ischämie, Arzneimitteltoxizität zu verstehen und / oder Behandlung, besteht ein Bedarf, einen geeigneten, standardisiert, zuverlässig zu verwenden und reproduzierbares Modell der Krankheit, die zwischen den Behandlungsgruppen vergleichende Untersuchungen ermöglicht. In diesem Manuskript, verwenden wir Mäuse, da die Verfügbarkeit einer großen Anzahl von transgenen Mäusen und standardisierte Bewertungsmodelle. Raking Partituren Motor und Verhaltensdefiziten folgenden experimentellen ischämischen Schlaganfall und de....

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Protokoll

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Alle Verfahren wurden von der University of Miami Institutional Animal Care und Use Committee (IACUC) in Übereinstimmung mit den National Institutes of Health (NIH) Richtlinien zugelassen. Die Verwendung in sterile Geräte und aseptischer Techniken erforderlich ist.

1. Vorbereiten der Occlusion Suture

  1. Verwenden einer Naht von 0,21 mm Durchmesser für Mäuse zwischen 20 bis 25 g und 0,23 mm für Mäuse zwischen 25 - 35 g Körpergewicht. Die Wahl der Art von Nähten für die MCAO Verfahrens beruht auf Tiergewicht.
  2. Mit einem silbernen Stift, markieren Sie die Naht auf 9 mm von der silikonbeschichteten Spitze beginnen. Dies wird ....

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Ergebnisse

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Die Einfügungs Route für die Okklusion Naht wird in Abbildung 1 gezeigt. Die MCAO Naht ist in die Okklusion Bereich geführt werden, in der ICA-gegabelt. Erfolgreiche Verschluss der MCA wird auf Gewebeverletzung, sichtbar durch TTC-Färbung führen. Abbildung 2 zeigt Bilder der Färbung von Schein - behandelten Tier (2A) und von einer 60 min MCAO Ischämie Reperfusion Tier (Färbung bei 90 min oder 24 Stunden nach der Okklusion, 2B).

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Diskussion

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Die erfolgreiche Anwendung des beschriebenen Verfahrens MCAO ist stark abhängig von einem Verständnis der Hirndurchblutung Anatomie. Da die korrekte Platzierung der Naht ist schwer aufgrund des fehlenden direkten visuelle Hinweise zu erkennen, wird wiederholt der Praxis wichtig, das Verfahren zu meistern, bevor es für den Untersuchungen verwendet. Hubvolumen sollten konsistente Ergebnisse zu gewährleisten, werden analysiert. Die Zugabe eines Laser-Doppler-System kann dazu beitragen, die erfolgreiche Okklusion des Blutfl.......

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Offenlegungen

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Autoren haben keine konkurrierenden oder Interessenkonflikte.

Danksagungen

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Wir möchten uns bei Dr. Lei Chen (Icahn School of Medicine at Mount Sinai, NY) bedanken, der dieses Modell zuerst in unserem Labor etabliert hat. Teilweise unterstützt von HL126559, DA039576, MH098891, MH63022, MH072567, DA027569 und NSC 2015/17/B/NZ7/02985. Dr. Luc Bertrand wird unter anderem durch ein Postdoc-Stipendium der American Heart Association (16POST31170002) unterstützt.

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Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
MCAO-Nahtmaterial 0,23 mmDoccol702345PK5Re
MCAO-Nahtmaterial 0,21 mmDoccol702145PK5Re Silberne
Stiftklammern503205
AnästhesiegerätVetequip901806
Chirurgische SchereFine-Science-Werkzeug14558-09
Chirurgische Zange gerade SpitzeFein Wissenschaftliches Werkzeug00108-11
Chirurgische Zange mit abgewinkelter SpitzeFine Science Tool00109-11
FederschereFine Science Tool15000-08
Nylon-NahtBraintree scintificSUT-S 104
VerschlussnahtVWR95057-036
IsofluranPiramal
2,3,5- TriphenyltetrazoliumchloridFisherSci50-121-8005
HirnblockBraintree scintificBS-A 5000C
Kryostat KlingeVWR89202-606
Optional:
Periflux LaserdopplersystemPerimed Periflux5000
ÜberwachungseinheitPerimedPF 5010 - LDPM

Referenzen

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  1. Cuomo, O., et al. Antithrombin reduces ischemic volume, ameliorates neurologic deficits, and prolongs animal survival in both transient and permanent focal ischemia. Stroke. 38 (12), 3272-3279 (2007).
  2. Wauquier, A., Melis, W., Janssen, P. A.

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Schlagwörter

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