Summary
심장 혈관 운동과 복잡한 환경에서 자극의 경험은 쥐의 뇌에서 신경 가소성의 여러 조치에 긍정적 인 효과를 가지고있다. 이 문서에서는 휠 실행 환경의 복잡성을 결합하여 이러한 개입의 한계를 해결할 것 "superintervention"이러한 개입의 구현에 대해 설명합니다.
Abstract
(광범위 동물 연구에서 사용 된 예를 들면, 휠 실행 (WR)) 유산소 운동 등 성인 신경, 혈관 신생 및 설치류에 신경 영양 인자의 발현 속도와 같은 뇌의 neuroplastic 가능성에 긍정적 인 영향을 많은 조치. 이 개입은 설치류에서 기형 (알코올 즉, 발달 노출) 및 연령과 관련된 신경 퇴행의 부정적 영향의 행동 및 신경 해부학 적 측면을 완화하는 것으로 나타났다. 환경의 복잡성 (EC)은 피질과 피질 하 구조에 수많은 neuroplastic 이익을 생성하는 것으로 나타났다 및 성인 해마의 증식 및 새로운 세포의 생존을 증가시키는 차륜 주행과 결합 될 수있다. 두 개입의 조합은 신경 질환의 설치류 모델의 범위에서 구현 될 수있는 강력한 "superintervention"(WR-EC)를 제공한다. 우리는 WR / EC의 구현과에서 그 구성에 대해 설명합니다인간 태아 알콜에 노출되는 동물 모델을 사용하여 래트에서 더 강력한 치료 개입로서 사용 terventions. 우리는 또한 절차의 요소가 개입을 위해 절대적으로 필요하고 어떤 사람은 실험자의 질문이나 시설에 따라 변경 될 수있는 설명합니다.
Introduction
다른 환경에서 사육하는 것은 긴 신경 건강의 다양한 방법의 변화를 일으키는 것으로 알려져있다. 많은 연구는, 예를 들어 다이아몬드와 Rosenzweig (에 의해 획기적인 연구를 시작하여 복잡한 환경에서 양육의 유익한 효과 (EC)를 보면 1, 2)과 Greenough (예를 들어, 3, 4). EC 뇌 5, 6, 7 및 시냅스 세포 변화에 명백한 긍정적 인 효과를 입증하고있다. EC뿐만 아니라 해마 8, 9, 시각 피질 10, 11, 복부 선조체 (12, 13)을 포함한 뇌 영역의 다양성에 영향을 미칠 수있다뇌 전체 신경 면역 기능으로 (14에서 검토). 이 EC 수지상 소성 구 (13)를 통해 치아 이랑 성인 태생 과립 세포의 생존율을 증가시킬 수 있음을 입증 할 때 특히 관심은 해마의 연구로부터 발전되었다. 이 마지막 점으로 인해 심장 혈관 운동이 모두 건강하고 손상된 뇌 15, 16, 17, 18 성인 신경을 촉진 나타내는 문학의 성장 몸에 많은 관심을 모아왔다. 휠 실행 (WR)은 신경 학적 장애 또는 17, 19, 20 노화의 쥐 모델에서 도움이 될 것으로 나타났다 자발적인 심장 혈관 활동의 형태를 구현하기 쉽습니다. WR은 성장 인자의 발현에 영향을 미친다 중추 및 말초 신경계 21, 22, 이십삼인치
는 "superintervention"(WR-EC)에 (이후) WR 및 EC 결합 (즉, EC 30 일까지 다음 WR 12 일)는 해마 성인 신경의 강력한 증가와 새로 증식 된 세포 (8)의 증가 생존의 제공 FASD의 동물 모델에 개별 구성 요소에 의해 달성되지 않은 효과 (아래 참조). WR-EC의 두 성분은 뇌 (13) 내의 구조물의 다양한 배열을 영향 때문에 간섭의 구현은 용이 신경계 모두의 발달과 나중에 개시 모델 쥐 모델에 적용 할 수있다 (22 평가 WR, EC (24)에서 검토) 손상 (예를 들어, 신생아 알코올 노출, 노화, 생애 초기 스트레스).
NT "> 사춘기 초기 성인 기간 (즉, 출생 후의 일 30-72가)에서 WR-EC의 통합 태아 알코올 스펙트럼 장애의 쥐 모델 (FASDs)의 부정적인 영향의 일부를 개선 할 수 8 연구 한의 컬렉션입니다. 증명 그러한 수지상 복잡성 (25), 소뇌 개발 26, 27, 신경 면역 응답 (28)뿐만 아니라 장애 학습과 기억 (29), (30)의 발현, 31 신경 해부학 적 조치 9 디스플레이 상당한 적자를 통해 출생 후 일 (PD)에서 알코올 4에 노출 된 설치류 일부 구조가 더 이상 시그 볼 수없는 상태.이 시간 창 내에서 알코올 노출도 감소 된 양 (즉, 9 PD 7) 청소년 및 성인 쥐 (32)에서 학습과 기억에 적자로 이어질 수으로 유의 신경 해부학 적 손상 27. 해마에 의존하는 작업에 행동 장애 이외에 - - 이러한 적자의 대부분은이 WR-EC 패러다임 8, 33 또는 혼자 WR (25), (31)에 노출 된 다음과 같은 완화되었습니다. 단독 WR이 널리 사용 개입 하였지만, WR-EC의 조합은 아직 WR (8)의 비교적 단기 이득을 유지하는 능력에도 불구하고, 문헌에 활용되지 않았다. 이 문서는 사춘기 동안 WR-EC 개입의 구현에 대해 설명합니다. 이 패러다임은 출생 초기 알코올 노출의 맥락에서 사용되지만, 이는 뇌 장애 모델에서 뇌 신경 가소성 대한 잠재력을 평가하기 위해 여러 가지 설치류 모델에 도입 될 수있다.Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
윤리 정책 : 다음 프로토콜은 델라웨어 대학의 기관 동물 관리 및 사용위원회 (IACUC)에 의해 승인되었다.
1. 발달 노출 (또는 진탕 같은 에탄올 노출의 모델)
- PD3에서 각 동물의 성별을 결정하고 쓰레기 크기 (8 동물) 및 성별 분포 (4 남성 : 4 여성) 유지하기 위해 필요한 경우 모든 동물을 교차 육성 각각의 쓰레기 내에서 일관성을.
참고 : 그것은 실험 교란을 방지하기 위해 가능한 한 일관성있는 쓰레기 크기와 성별 분포를 유지하는 것이 중요합니다. 이 프로토콜은 쓰레기 당 8 새끼 (4 남성과 4 명의 여성)를 사용하지만, 다른 쓰레기의 크기 나 성별 분포는 실험 설계의 요구에 맞출 수있다. - 피하 각 쓰레기 내에 동물을 식별하는 발에 검은 인도 소량의 잉크를 주입.
- 의사가-무작위로 50 %의 알코올 노출 AE () 50 % 가짜 삽관 제어를 포함하는 등의 실험 새끼를 (지정 (SI) 강아지들) 또는 빨고 제어 (SC) (PD 4에서 모든 삽관, 꼬리 자르기, 또는 분리 프로토콜을받지 않는 동물 - 일) 무게 및 귀 펀치를 제외하고 9.
- 일관성 그룹 크기를 유지하려면, SC의 새끼 두 배 많은 실험 새끼를 할당합니다.
- 다음 홈 케이지에 반환 각 동물의 무게. 동물은 삽관 기간 (- 9 PD 4) 동안 매일 발생합니다 무게.
- 댐에서 전체 쓰레기를 제거합니다.
- 가열 패드에 새끼를 놓습니다.
- 각 강아지의 중량을 기록한다.
- PD4에서, 각각의 동물을 중량 측정 후, 각 동물 당 5.25 g / kg / 일의 총 필요한 알콜 양을 계산한다 (단계 1.4에서 강아지 중량 기준) 8.
- 11.9 % 에탄올에 우유 대체 (부피 / 부피)로 알코올을 관리 할 수 있습니다.
- 오전 9시에 시작, 한 번에 어머니로부터 한 쓰레기의 새끼를 제거합니다.
- 각 AE 강아지에 에탄올에 우유를 관리
- 각 SI 강아지 8 가짜 삽관.
- 반복 1.5 단계를 반복합니다. 1.8을 통해. 각 실험 쓰레기합니다.
- 제 도즈 다음 두 시간 동안은 제 2 알코올 투여 용 투여 절차 (180 내지 150 단계) 반복한다.
- 1.5 시간 초 알코올 도즈 (피크 매일 혈중 알코올 농도가 달성되는 지점) 후, 수집하고 미래 혈중 알코올 농도 분석 35 패스 꼬리 통해 AE 및 SI 새끼로부터 원심 피.
- 혈액의 60 μL를 수집합니다.
- 1 ML의 microcentrifuge 관에서 혈액을 놓습니다. 25 분 1.5 XG에 원심 분리기 혈액입니다.
- 조심스럽게 원심 분리 튜브로부터의 상징액 혈청을 수집하고 미래 혈중 알코올 농도 분석을 위해 저장한다.
- AE의 간호 무능력에서 영양 결핍을 방지하기 위해 에탄올에 우유 대신 우유를 사용하여 투약 절차 (1.8 단계 1.5) 반복새끼.
- PD 사에 2 시간 간격이 보충 우유 용량의 총을 수행합니다.
- 9 - 반복 PD 5 1.4 (단계 1.11 제외) 1.12을 통해 단계를 반복합니다.
- PD9에 대한 최종 보충 우유 량에 따라, 귀는 EC 케이지의 식별을 위해 모든 새끼 펀치.
- 쓰레기 번호 또는 식별자의 일부 측정 값 천공 귀 좌표 (짝수 새끼에서 동물 권리 귀 펀치 얻을 것 동안 예를 들면, 집단 내에서 홀수 새끼가 자신의 왼쪽 귀를 얻을 것입니다 것은 천공). 이렇게하면, 다른 담가 여러 동물 동일한 pawmark 패턴을 가져야 EC 장에 동물을 식별 할 것이다.
2. 이유 용
- PD (23)에, 집 2의 새장에있는 모든 동물 - 3.
- 같은 케이지에 보관 모든 동물이 동성인지 확인합니다.
- 하나 SC, 하나의 SI 및 케이지 당 하나의 AE 동물 수를 포함합니다.
- 케이지 동료의 수 일 최소화에서 같은 쓰레기에서 있습니다.
- 모든 동물은 음식과 물에 액세스 할 수 있는지 확인합니다.
3. 휠 실행
- PD30에서 WR에 동물 케이지의 절반을 할당합니다. 하우스 부착 된 스테인레스 스틸 실행 휠에 무료로 액세스 할 수있는 새장에 동물.
- 바퀴 회전 수를 평가하는 카운터가 있는지 확인합니다.
- PD (30)와 PD (36)에 모든 동물의 무게를.
- 오전 9시 매일 각 바퀴의 회전 수를 확인합니다.
- 12 일 기준 해당 주택 상태에서 동물을 둡니다.
4. 환경 복잡성
- 실험 동물에 대한 PD (42)에 해당하는 일 오전 9 전에 EC 케이지를 준비합니다.
- 30 "X 18"X 36 "아연 도금 강판 케이지를 가져옵니다.
주 : 케이지는, 복수의 수치가 여러 쥐의 무게를 지탱할 수 있어야 표준 채워질침구, 물 병 및 식품 디스펜서를 연결하는 여러 위치에 있습니다. - 소설, 케이지의 변수 크기와 모양의 화려한 개체를 배치합니다.
- EC의 케이지 6 큰 장난감을 놓습니다. 각 장난감 동시에 상호 작용하는 3 인 이상 쥐 충분히 큰 있는지 확인하십시오.
- EC의 케이지 6 매체 장난감을 놓습니다. 4 쥐가 동시에와 상호 작용 - 3 각 장난감이 충분한 크기를 확인합니다.
- EC의 케이지에 작은 장난감을 많이 (최소 20)를 배치합니다.
- (설명 참조) 참신이 개입에 중요하다 등 다양한 색상, 모양, 크기의 장난감을 사용합니다.
- 케이지의 양단에서 음식이 요리를 놓습니다.
- 케이지의 양단에 물 두 병을 놓습니다.
- 30 "X 18"X 36 "아연 도금 강판 케이지를 가져옵니다.
- PD (42)에 오전 9시, 모든 동물의 무게와 EC 케이지에 WR 동물 위치를 변경합니다. (12) 동물 - 각 EC 케이지 (9)를 포함해야합니다.
- 어떤 동물이 같은 pawmark과 귀 말장난 모두가 없는지 확인채널 패턴입니다.
- 모든 음식과 물을 매일 확인합니다.
- 이틀는 EC 케이지에서 장난감을 제거하고 교체 (단계 4.1.2에 따라.).
- 3 일의 EC 케이지를 청소합니다.
- EC의 케이지에서 동물을 제거하고 2의 임시 보유 케이지에 넣어 - 3 동물.
- 케이지의 바닥에서 침구를 모두 제거합니다.
- 이 날은 장난감 교체 일정과 일치하지 않는 케이지에 같은 장난감을 돌려줍니다 (4.4 단계에 따라.).
- 음식과 물을 모두 교체합니다.
- EC의 케이지에 쥐를 교체합니다.
5. 수집 조직
주 : 조직 수집 (예를 들어, 파라 포름 알데히드 관류) 및 저장 (예를 들어, 동결 파라핀 매립)은 다양한 방법으로 수행 될 수있다. 다음 0.1 M 인산 완충 식염수 (PBS에서 4 % 파라 포름 알데히드에서 4 % 파라 포름 알데히드 관류하는 과정을 설명 할 것이다) 용액 (8).
주의 : 파라 포름 알데히드는 발암 성이며, 또한 피부 자극, 알레르기 성 피부 반응, 또는 눈에 손상을 일으킬 수 있습니다. 적절한 눈 / 피부 보호를 사용합니다.
- 가볍게 동물을 이소 플루 란 마취 한 번에 하나의 쥐를 노출.
- 복강 내 케타민 / 자일 라진 혼합물 (케타민 10 ㎖의 혼합 용액 1.5의 자일 라진)을 2 ㎖ / kg으로 래트를 주입.
참고 : 케타민과 자일 라진 사출 혼합물에 대한 결합하기 전에 100 ㎎ / ㎖의 재고 농도에서 모두 있습니다. - (하여 pH = 7.2 PBS) PBS로 4 % 파라 포름 알데히드 하였다 (PH = 7.2) 쥐가 더 이상 응답되면 0.1 M 인산염 완충 식염수 동물 관류 없다.
- 48 시간 동안 4 ° C에서 PBS에서 4 % 파라 포름 알데히드의 두뇌와 저장소를 제거합니다.
- 이일 후, 30 % 수크로오스 용액을 이송 4 ℃에서 PBS 중의 4 % 파라 포름 알데히드에 첨가 하였다.
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Representative Results
WR 및 EC - - 수퍼 간섭의 효과를 평가하기 위해, 우리는 그 구성 요소들 각각의 효과를 살펴보아야 관심 우리의 방법에. 3 (아래)를 통해 1이이 패러다임 (8)을 이용하여 이전 책에서 등장 인물. 그림 4는 박사 학위 논문 (36)에 출연했다. 이러한 데이터는 치아 이랑에서 해마 성인 신경에서 WR-EC의 영향을 예시한다. 모든 그래프는 오차 막대는 평균에서 하나의 표준 오차를 표시와 함께, 그룹 방법을 설명한다. 그림 1은 WR 구성 요소는 일반적으로 개발 해마의 DG에서 세포 증식을 증가 견고하게 할 수있는 것을 나타내는, 우리의 개입의 WR 부분은 다음 세포 증식의 증가를 보여, 초기 생활 스트레스, 알코올에 노출 된 동물. 그림 2neonatally 응력 또는 알코올 중 하나에 노출 된 동물에 DG 성인 생성 세포의 생존을 증가시키기 EC의 기능을 설명한다. 그림 3에 대한 치료로 연루, WR-EC는 알콜 또는 삽관 스트레스에 신생아 노출을 받아야 동물에서 성인 선천적 인 치아 이랑의 과립 세포의 증식과 생존을 증가시킬 수 있음을 표시하는 신경 세포의 표현형으로 분화 세포의 증가를 보여줍니다 해마 성인 신경의 구조 적자. AE 쥐의 치아 이랑 '과립 세포의 doublecortin 양성 수상 돌기의 길이 더 이상 다른 컨트롤에서됩니다 없습니다 : 마지막으로, 그림 4는 수지상 소성에 WR-EC 효과를 확인한다. PD 4 혈중 알코올 농도 (BAC)이 노출 패러다임 (28), (37)를 사용하여 다른 연구와 비교 321.19 ± 14.03 밀리그램 / DL (SEM 평균 ±)이었다. 이전 연구는 것을 증명 한 동물이러한 치료 그룹은 WR 15 일 동안 실행 거리에서 다르지 않다 교차합니다.
그림 1. WR은 견고 해마 DG에서 세포 증식을 증가시킵니다. 현미경은 WR (A) 및 사회 주택 (B) 다음 PD42의 DG (WR의 중단) AE 동물의 브로 모 옥시 우리 딘 (BrdU의)로 표지로 세포 증식의 차이를 보여줍니다. WR은 견고 신생아 치료 (C)에 관계없이 세포 증식을 증가시킨다. 양방향 ANOVA는 (SH 대 WR) (F 1,40 = 19.703, P <0.001) 주택 조건의 주 효과를 밝혀 동안 또는 상호 작용 (.. AE 대 SI 대 SC) 출생 후의 치료의 유의 한 주 효과 없음 두 요소 사이에서 관찰되었다. 사후 비교는 Tukey에의 테스트로 수행되었다. 모든 값은 파트 :평균 ±에게 평균 (SEM)의 표준 오류를 보냈습니다. * P <0.05, #p를 <0.01. 이 수치는 해밀턴 등의 알에서 재현 할 수 있습니다. 2012 년 8. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
신생아 알코올 노출 또는 위장 스트레스에 따라 세포 생존에 EC 구출 적자가 이어 그림 2. WR. 현미경 사진 WR-EC (A) 및 PD41에 BrdU를 주사 사회적 수납 상태 (B)에서 AE 동물에서의 BrdU 표지 세포의 차이를 나타낸다. 사회적으로 수용 동물 컨트롤을 빨고 할 상대 알코올 노출 다음의 감소를 표시. PD4 후 증식 세포의 WR-EC의 superintervention 디스플레이 증가 생존율을받은 동물모두 SI 및 AE 그룹 (C) 1. 양방향 ANOVA는 (SH 대 WR) (F 1,29 = 11.402, P <0.01) 및 출생 후의 치료 및 주택 상태 (F 1,29 = 3.870, P 사이에 상당한 상호 작용 주택 조건의 주 효과를 보여 < 출생 후 치료 유의 주된 효과 (SC 대 SI 대 AE)는 관찰되지 않았다 동안 0.05). SH 동물 내의 편도 ANOVA는 WREC 동물 내에서 ANOVA는 출생 후 치료 사이에 유의 한 차이를 보이지 않았다 편도 반면 출생 후의 치료의 주 효과 (F 1,19 = 3.727, P <0.05) 밝혔다. 사후 비교는 Tukey에의 테스트로 수행되었다. 모든 값은 ± SEM을 의미 나타냅니다. * P <0.05, #p를 <0.01. 이 수치는 해밀턴 등의 알에서 재현 할 수 있습니다. 2012 년 8. 이 figu의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오레.
신생아 알코올 노출 또는 위장 스트레스에 따라 신경 발생에 그림 3. WR-EC 구출 적자. 해마의 과립 세포에서 BrdU의 (녹색) 표현과 NeuN (적색)의 공동 현지화. 형광 공 초점 이미지는 면역 절차에 따라 인수했다. BrdU의 PD41이 조직에 주입 하였다 PD72에 수집 하였다. 및 BrdU의 NeuN DG 모두에서 관찰되었다 (A, B). SC 동물 신경 세포 증식의 수가 크게 증가되지 않았다하더라도 두 AE 및 SI 동물 사회적 수납 동물에 비해 WR-EC 패러다임 다음 (BrdU의 및 NeuN 이중 라벨링에 의해 나타낸 바와 같이) 신경 세포의 증가를 보였다 (C) . 양방향 ANOVA는 (SH 대 WR) (F 1,28 = 20.48, P <0.001) 주택 조건의 주 효과를 보여 유의 주 EFFE 동안두 요인 사이에 출생 후의 치료의 CT (SC 대 SI 대 AE) 또는 상호 작용이 관찰되었다. 사후 비교는 Tukey에의 테스트로 수행되었다. 모든 값은 ± SEM을 의미 나타냅니다. * P <0.05, #p를 <0.01. 이 수치는 해밀턴 등의 알에서 재현 할 수 있습니다. 2012 년 8. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
해마 DG 과립 세포의 수지상 복잡성 그림 4. WR-EC 구출 적자. Sholl는 수지상 교차 분석 신생아 알코올 노출 다음 성인 쥐의 치아 이랑의 수지상 복잡성에 WR-EC의 개량의 효과를 보여줍니다. 소셜 하우징 조건, AE 동물 DG 과립 세포의 감소 수있을 동물 제어에 대하여 수지상 교점 (a). WREC 주택은 사회적으로 수용 컨트롤의 (b)를 기준으로 AE 동물의 교차점의 수를 증가시킨다. 우리의 WREC 패러다임에서 사육 AE 동물 WREC (c)에 보관되어 동물을 제어 할 상대 교차로의 비슷한 번호를 표시합니다. 반복 측정 ANOVAs 각 그래프의 데이터에 대해 수행 하였다. 패널 A는 출생 후 치료의 주 효과 (F 1,11 = 6.265, P = 0.029)를 보여줍니다. 패널 B는 주거 환경 사이의 주요 효과 경향 (F 1.6 = 4.181, P = 0.087)를 보여줍니다. 패널 C는 WREC 하우징 조건 내의 SC 및 AE 동물 사이에 유의 한 차이를 보여 없다. 모든 사후 비교는 Tukey에의 테스트로 수행되었다. 모든 값은 ± SEM을 의미 나타냅니다. ^ p <0.01, * p <0.05. 이 수치는 해밀턴 2012 년 36에서 재현 할 수 있습니다.페이지 "대상 ="_ 빈 ">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
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Discussion
위의 프로토콜에서, 우리는 신생아 알코올 노출 다음과 신경 해부학 적자를 구출하는 편법 개입을 보여 주었다. 이 개입 인한 간섭의 각 성분의 견고성 다른 동물 모델에서 치료 적으로 사용될 수있다. WR의 형태로 자발 심혈관 활성은 여러 행동 결과 38,39 이점 및 ((40)에 검토) 해마 같은 뇌 영역에 기능성 플라스틱 변형을 유도하는 것으로 나타났다. 이것은 41 인해 두 설치류의 뇌 실질에서의 성장 인자 및 다른 신경 메커니즘 표현 부분에 21 인간. 이러한 효과를 보완 EC 유익 셀룰러 6, 11, 42, 43을 유도 할 수있다, 구조 2, 12 약리학, 설치류 (44)의 변화.
동물 기능 주행 륜 자발적 액세스 할 WR 인간 증후군의 특정 모델에서 최대한 효율적으로 사용하기 위해서는 것이 중요하다; 매일 휠 액세스 시간 45 적어도 10 ~ 12 시간 하루, 바람직하게는 24 시간의 오랜 시간 동안 지속되어야한다 (실행중인 휠에서 철수 일부 부작용이보고되었다). 십이일는 청소년기와 초기 성인기에 맞게 WR 및 EC의 조합을 허용하는이 WR 패러다임은 지속됩니다. 기간, 노출의 연령, (다른 요소들 사이) 운동의 양상은 치료 적 개입 (46)로 운동의 효과에 영향을 미칠 수 있으며,이 프로토콜 또는 다른 WREC 패러다임을 구현하는 계획 할 때 이러한 중요한 요소가 고려되어야한다. 이 EC 패러다임의 핵심 구성 요소는 '아니오'환경 및 사회적 상호 작용의 여러 개체의 velty (14 년 47 리뷰). 따라서 모든 48 시간을 대체 할이 패러다임의 항목에 대한 중요하다. 다수의 항목에 대한 필요성에 기초하여, 상품 및 탐사 및 사회적 상호 작용의 상호 작용은, 우리 고유 항목, 항목 여분의 주파수 및 케이지 메이트의 수의 고객 번호가 신경 해부학 적 조치에 치료 결과를 유도하기에 충분한 것으로 발견 우리는 평가 있음. 우리는 30 일 동안 연속 노출은 새로운 환경에 제한 노출 상호 작용을보다 신생아 알코올 노출에 의해 유도 적자를 극복하는 것이 더 적절하다는 것을 발견했다.
이 프로토콜의 목적은 심장 혈관 운동 및 플라스틱 개입의 환경 참신 구성 요소를 모두 해결하는 WREC 패러다임을 소개하는 것입니다. 이러한 이유로, 우리는 paradig 이루어질 수 변형을 다룰 것이다m하지만 동물 패러다임뿐만 아니라 그릴 수 있습니다 실험 결론 내에서 상호 작용하는 방법을 변경할 수 있습니다 수정의 사용을주의한다. 한 가지 변화는 EC 환경에 바퀴를 실행의 도입이 될 것이다. 이렇게함으로써, 각 구성 요소의 상대적 기여도를 결정하기 어려울 것이다. 함께 EC에 필요한 10 동물 - 또한 모든 동물은 WR 구성 요소와 팔의 주택과 같은 패러다임의 EC 구성 요소 모두에 참여하는 것을 보장하기 어렵다. (이 프로토콜의 방법은 강력한 신경 해부학과 행동의 의미 (8)을 표시하고 있지만, 33) 그러나, 운동에 대한 장기적인 접근이 개입 (45)의 효능에 매우 중요하기 때문에, 앞으로의 연구는 EC의 액세스 WR 액세스의 최적 비율을 해결할 수있다 . EC 환경 내에서 사용되는 개별 항목에 대한 수정은 허용하지만, 비판적이다항목에 대한 난, 흥미, 복잡한, 소설이 될 자극 자주 (14)를 갱신합니다.
이 패러다임이 "슈퍼 개입"을 구현하는 계획 할 때 고려해야 할 우리의 손에 여러 타고난 한계를 포함 않습니다. 패러다임의 WR 성분 한가지 제한은 개별 동물에 의해 실행 간격을 평가할 수 없다는 것이다. 명백한 및 간단한 해결책 중 하나는, WR 성분 중에 동물의 각각의 하우징 것이다. 그러나, 개별 주택 널리 동물에 해로운으로 인정되고 심지어 직접 바퀴를 실행 (48)의 유익한 효과를 상쇄 할 수 있다고 강조 될 필요가있다. 추가 대안은 (시간과 미완료 있지만) 비디오 레코드 동물 액세스 권한이 시점의 주행 륜 것이다. 이 독특한 색상이나 patte 그림, 예를 들어 장에 각 동물 (대한 고유 식별자를 필요로각 동물의 모피) 49 RNS. 이 기술은 아직 동시에 휠을 이용하여 여러 동물의 교란의 대상이 될 것입니다. 그것은 (식품 섭취의 기간을 제한하지 않고) 식품 개별 동물을 제한 어려워 여기서 유사한 어려움은 EC에 전달한다. 이것의 영향을 줄이기 위해, 우리는 즉시 음식을 제한 패러다임에 이어 전체 30 일 EC 주택을 추천 할 것입니다. EC의 아웃 시간의 연장 양이 패러다임 동안 발생 가소성을 유도 억제 할 수있다.
앞서 언급 한 바와 같이,이 문서의 중요성은 WR의 형태로 심장 혈관 운동을 다음과 일치 EC 패러다임의 특성과 그 구현을 허용하는 것입니다. 이전 EC 패러다임은 WR (12), 50 시간 (51)의 짧은 금액에 대한 EC 케이지의 내부 WR에 노출없이 EC 하우징에 동물을 노출 한이하 52 동물 또는 동물 케이지 상품 (13)의 덜 자주 변화하는 시간의 양 이상에 대한 EC의 환경에 노출되었다. EC의 유익한 효과는 장기간 효과를 보여주기 위해 시간적으로 중요한 시간 윈도우에서 WR로부터 유도 소성이 필요하다는 것이다. 이러한 방식으로, 우리는 각각 12 및 30 일 WR EC와 결합하여 최대로 유익하고 간결한 개입 수 있다고 믿는다.
이 시점에서,이 모델의 사용은 사춘기 및 성인 초기 시간 기간들에 한정되고있다. 다른 단계에서이 개입의 견고성 및 neuroplastic 이익의 개체 발생의 또 다른 검사는 앞으로 더 검토되어야한다. 이 같은 질환으로 고통받는 사람들을위한 효과적인 치료 적 개입의 개발에 도움이 될 것 같이 또한 다른 발달 적자의 사용이 크게 권장합니다. 이전 문헌 해제했다성인 신경, 학습과 기억, 또는 불안 (53)의 유전 마우스 모델에서 불안 같은 행동에 WR 또는 EC의 독립적 인 효과를 monstrated. 이 두 개입의 견고성과 EC의 상승 효과가 증가 WR-유발 효과 (즉, 해마 세포의 증식 및 신경)이 아니라 연구 질문의 다양한 범위에 통합 태세 수의 단기 효과를 유지합니다.
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Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Female Time-pregnant Long Evans Rats | Envigo (Formerly: Harlan, Inc.) | Average litter size is 8 - 10 pups | |
| Black India Ink | Higgins (Chartpak, Inc.) | 44201 | |
| Syringes and Injection Needles | Becton, Dickinson and Company (BD) | Assorted | For injection of pawmarking ink, administration of milk-alcohol solution |
| Ear Punch | Kent Scientific Corporation | INS750076 | |
| Running Wheels | Wahmann Labs | Wahmann Running Wheel is discontinued. One per cage. | |
| EC Cage | Martin's Cages, Inc. | R-695 | |
| Small EC Toys | Assorted | ||
| Medium EC Toys | Assorted | Should be able to fit 1 - 2 rats inside of/on top of object | |
| Large EC Toys | Assorted | Should be able to fit 3 or more rats inside of/on top of object |
References
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