Intracarotid Cancer Cell Injection zu produzieren Mausmodelle von Hirnmetastase

Zusammenfassung

Hirnmetastasen hat ein dringender medizinischer Bedarf werden wie ihre Häufigkeit zugenommen hat, während therapeutische Optionen palliative geblieben sind. Erstellen von experimentellen Tiermodellen von Hirnmetastasen über intracarotid arterielle Injektion von Krebszellen erleichtert mechanistische Untersuchungen der Krankheitsbiologie und Evaluierung neuartiger Interventions Regimen.

Zusammenfassung

Metastasierung, die Ausbreitung und das Wachstum von bösartigen Zellen an sekundären Standorten innerhalb des Körpers eines Patienten, Konten für> 90% der durch Krebs verursachten Todesfälle. Vor kurzem haben beeindruckende Fortschritte in der neuartigen Therapien dramatisch das Überleben und die Verbesserung der Lebensqualität verlängert für viele Krebspatienten. Leider ist schnell metastasierendem Rezidive Inzidenz von Gehirn steigt, und alle aktuellen Therapien sind nur palliative. Daher sind gute experimentelle Tiermodelle dringend notwendig in eingehende Studien der Biologie von Krankheiten zu erleichtern und neuartige Therapieschemata für die präklinische Evaluierung zu beurteilen. Jedoch erzeugt die Standard - in - vivo - Metastase Assay über Schwanzveneninjektion von Krebszellen überwiegend Lunge Metastasen; Tiere in die Lunge Tumorbelastung vor eine sinnvolle Auswuchs von Hirnmetastasen erliegen gewöhnlich. Intrakardial von Tumorzellen produziert metastatischen Läsionen zu multiplen Organ Websites einschließlich des Gehirns; jedoch die variabikeit des Tumorwachstums mit diesem Modell hergestellt ist groß, bei der Bewertung der therapeutischen Wirksamkeit seiner Nützlichkeit dämpfend. So generieren zuverlässige und konsistente Tiermodelle für Hirnmetastasen Studie beschreiben wir ein Verfahren zur Herstellung von experimentellen Hirnmetastasen in der Hausmaus (Mus musculus) über intracarotid Injektion von Tumorzellen. Dieser Ansatz ermöglicht eine große Anzahl von Hirnmetastasen tragenden Mäuse mit ähnlichen Wachstum und Mortalität Eigenschaften zu erzeugen, so dass die Forschungsanstrengungen zu erleichtern grundlegende biologische Mechanismen zu untersuchen und neuartige therapeutische Mittel zu beurteilen.

Einleitung

Die Metastasierung von Krebs auf das zentrale Nervensystem (ZNS) ist eine verheerende Krankheit, und kann entweder das Hirnparenchym oder die Leptomeningen ( "Hirnmetastasen" bezieht sich sowohl auf die in diesem Artikel) einzubeziehen. Es ist die vorherrschende intracranial Malignität, outnumbering primären Gliomen von> 10: 1 ^{1, 2.} Lungenkrebs, Brustkrebs und Melanomen sind die drei wichtigsten Tumorerkrankungen, die eine hohe Inzidenz von Hirnmetastasen produzieren ^{3, 4.} In den letzten Jahren haben beeindruckende Fortschritte in der neuen Krebsthera....

Protokoll

Ethik Aussage: Alle Tierstudien von der Institutional Animal Care und Use Committee (IACUC) von der University of Texas MD Anderson Cancer Center genehmigt.

1. Bereiten Sie Krebszellen für die Injektion

1. Samen, die Krebszellen ein oder zwei Tage vor der Injektion. Verwenden Sie DMEM / F12-Medium mit 10% FBS ergänzt, es sei denn, eine Spezialität Medium in der Literatur für eine bestimmte Zelllinie angedeutet ist.
2. Am Tag des chirurgischen Eingriffs, Ernte Zellen, wenn sie erreicht 70 bis 80% Konfluenz, indem zuerst Waschen mit serumfreiem Medium einmal vor Trypsinisierung (0,25%) für 1 bis 2 min bei 37 ° C. Hinzufügen, in Zellen 10% FBS ent....

Ergebnisse

Es gibt zwei Punkte, an denen die Qualität der Injektion ausgewertet werden kann. Die erste Chance wird durch die Beobachtung des Bedieners während der Injektion von Blutgefäßen Farben ändern. Leckage aus armen Injektionen können leicht unter dem Binokular beobachtet werden. Die stetige und sichere Platzierung des Mauskörpers (1A) und seine Arteria carotis (Abbildung 1B) auf der Stützwattebausch sind kritische Faktoren für glatte und erfolgreiche Injekti.......

Diskussion

Die kritischsten Schritte zur erfolgreichen carotis arterielle Injektion von Krebszellen sind: 1) tiefer Anästhesie von Maus in Vorbereitung für die chirurgische Operation; 2) stetig Platzierung der Arteria carotis auf der Oberseite der Baumwolle zu unterstützen; 3) dicht Ligatur der A. carotis nach erfolgreicher Injektion.

Tief Anästhesie von ~ 30 min ist in der Regel notwendig für die stationäre chirurgische Leistung unter dem Binokular. Wir verwenden kommerziell ready-to-use Ketamin / Xyl.......

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Ketaminhydrochlorid/Xylazinhydrochlorid-Lösung	Sigma-Aldrich	K113
Routine-Stereomikroskop Leica M50	Leica	M50	Das Mikroskop ist modular und hochgradig konfigurierbar, um besonderen Platzanforderungen gerecht zu werden.
Chirurgische Einweg-Scapel	Integra Miltex	4-410	zum Vornehmen von Hautschnitten
Gewebezange - 1 x 2 Zähne	Fine Science Tools	11021-12	zum stumpfen Präparieren von Muskeln
Dumont #5 - Mirror Finish Pinzette	Fine Science Tools	11252-23	zum Trennen und Vorbereiten der Halsschlagader für die
Injektion Federschere	Fine Science Tools	15025-10	zum Schneiden von Nähten
EZ Clip Kit	Stoelting	59020	für die Wundklour
BD Insulinspritze	Becton Dickinson	328438	für die Zellinjektion
IVIS Spectrum In Vivo Bildgebungssystem	PerkinElmer	124262