Isolierung von primären murinen Retinal-Ganglion-Zellen (RGCs) durch Durchflusszytometrie

Sumana R. Chintalapudi; Need N. Patel; Zachary K. Goldsmith; Levon Djenderedjian; Xiang Di Wang; Tony N. Marion; Monica M. Jablonski; Vanessa M. Morales-Tirado

doi:10.3791/55785

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Methodenartikel

Isolierung von primären murinen Retinal-Ganglion-Zellen (RGCs) durch Durchflusszytometrie

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DOI:

10.3791/55785

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5. Juli 2017

Sumana R. Chintalapudi¹ , Need N. Patel¹ , Zachary K. Goldsmith¹ , Levon Djenderedjian¹ , Xiang Di Wang¹ , Tony N. Marion² , Monica M. Jablonski¹^,³^,⁴ , Vanessa M. Morales-Tirado¹^,²

¹Department of Ophthalmology, Hamilton Eye Institute, University of Tennessee Health Science Center, ²Department of Microbiology, Immunology and Biochemistry, University of Tennessee Health Science Center, ³Department of Anatomy and Neurobiology, University of Tennessee Health Science Center, ⁴Department of Pharmaceutical Sciences, University of Tennessee Health Science Center

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Millionen von Menschen leiden an retinalen degenerativen Erkrankungen, die zu irreversibler Blindheit führen. Ein gemeinsames Element vieler dieser Krankheiten ist der Verlust von Netzhautganglienzellen (RGCs). Dieses detaillierte Protokoll beschreibt die Isolierung von primären murinen RGCs durch positive und negative Selektion mit Durchflusszytometrie.

Zusammenfassung

Neurodegenerative Erkrankungen haben oft einen verheerenden Einfluss auf die Betroffenen. Retinale Ganglienzelle (RGC) Verlust ist in einer Reihe von Krankheiten, einschließlich diabetischer Retinopathie und Glaukom, zusätzlich zu normalen Alterung verwickelt. Trotz ihrer Bedeutung waren RGCs bislang äußerst schwierig zu studieren, zum Teil aufgrund der Tatsache, dass sie nur einen kleinen Prozentsatz der Vielzahl von Zellen in der Netzhaut enthalten. Darüber hinaus verwenden aktuelle Isolationsmethoden intrazelluläre Marker, um RGCs zu identifizieren, die nicht lebensfähige Zellen produzieren. Diese Techniken beinhalten auch lange Isolationsprotokolle, so dass es an praktischen, standardisierten und zuverlässigen Methoden fehlt, um RGCs zu erhalten und zu isolieren. Diese Arbeit beschreibt eine effiziente, umfassende und zuverlässige Methode, um primäre RGCs von Mäusen retinae zu isolieren, wobei ein Protokoll auf der Grundlage sowohl positiver als auch negativer Selektionskriterien verwendet wird. Die vorgestellten Methoden erlauben die künftige Untersuchung von RGCs mit dem Ziel, das Gute besser zu verstehenAbnahme der Sehschärfe, die sich aus dem Verlust von funktionellen RGCs bei neurodegenerativen Erkrankungen ergibt.

Einleitung

RGCs sind endständig differenzierte Neuronen, und daher sind Primärzellen zum Experimentieren erforderlich. Die Entwicklung eines Protokolls für die Isolierung und Anreicherung von primären murinen Netzhautganglienzellen (RGCs) ist von grundlegender Bedeutung für die Aufdeckung der Mechanismen der RGC-Gesundheit und Degeneration in vitro . Dies ist besonders wichtig für Studien, die versuchen, potenzielle Therapien zur Förderung der RGC-Funktion zu generieren und ihren Tod zu minimieren. Die Degeneration von RGCs ist mit retinalen degenerativen Erkrankungen wie Glaukom, diabetischer Retinopathie und normaler Alterung assoziiert. Obwohl die spezifischen zellu....