Echokardiographische Untersuchung wird häufig bei Mäusen verwendet. Teure hochauflösende Ultraschall-Geräte wurden für diesen Zweck entwickelt. Dieses Protokoll beschreibt eine erschwingliche echokardiographische Verfahren kombiniert mit histologischen morphometrische Analysen kardiale Morphologie zu bestimmen.
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Methodenartikel
Echokardiographische und histologische Untersuchung der kardiale Morphologie in der Maus
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Eine wachsende Zahl von genetisch veränderten Mäusen ist verfügbar in den letzten Jahren geworden. Darüber hinaus ist die Anzahl der pharmakologischen Studien an Mäusen hoch. Phänotypischen Charakterisierung dieser Maus-Modelle erfordert auch die Untersuchung der Herzfunktion und Morphologie. Echokardiographie und Magnetresonanz-Bildgebung (MRI) sind häufig verwendete Ansätze Herzfunktion und Morphologie bei Mäusen zu charakterisieren. Echokardiographische und MRT-Geräte spezialisiert für den Gebrauch in kleinen Nagetieren ist teuer und erfordert einen eigenen Platz. Dieses Protokoll beschreibt kardiale Messungen bei Mäusen mit einem klinischen echokardiographische System mit einer menschlichen Kreislauf 15 MHz-Sonde. Messungen werden an narkotisierten erwachsenen Mäusen durchgeführt. Mindestens drei Bildsequenzen werden aufgezeichnet und analysiert für jedes Tier im M-Modus in der Parasternal kurze Achse Ansicht. Danach kardiologische histologische Untersuchung wird durchgeführt, und Cardiomyocyte Durchmesser richten sich auf Hämatoxylin-Eosin oder Weizenkeime Agglutinin (WGA)-gebeizt Paraffin Abschnitte. Schiff-Dichte ist bestimmt Morphometrically nach Pecam-1 Immunostaining. Das Protokoll wurde erfolgreich auf pharmakologische Studien angewendet und verschiedene genetische Tiermodellen unter geplanten Bedingungen sowie nach experimentellen Myokardinfarkt durch die dauerhafte Unterbindung des linken vorderen absteigenden Koronararterie ( (LAD). Nach unserer Erfahrung echokardiographische Untersuchung beschränkt sich auf narkotisierten Tiere und ist machbar in erwachsener Mäuse mit einem Gewicht von mindestens 25 g.
Einleitung
Gibt es eine Vielzahl von genetisch veränderten Mäusen, und die Anzahl der pharmakologischen Studien an Mäusen ist hoch1,2. Echokardiographie und MRT sind häufig verwendete Ansätze zur phänotypischen Charakterisierung der Herzfunktion und Morphologie in diese Maus-Modelle-3. Das Ziel des vorliegenden Protokolls ist, Herzfunktion und Morphologie bei Erwachsenen Mäusen zu analysieren. Es verbindet echokardiographische, histologischen, und immunhistochemische Messungen. Echokardiographische Untersuchung ist in Mäusen4,5,....
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Protokoll
die hier beschriebenen Experimente wurden in Übereinstimmung mit den relevanten institutionellen und französischen Tierschutz Gesetze, Richtlinien und Richtlinien durchgeführt. Sie wurden von der französischen Ethikkommission genehmigt worden (Comité Institutionnel d ' Ethique Pour l ' Tier de Laboratoire; Nummer NCE/2012-106).
1. Echokardiographie
- bestimmen das Körpergewicht der Maus mit einer standard-Laborwaage halten Sie es leicht am Schwanz auf um die richtige Positionierung zu gewährleisten.
- Betäuben das Tier durch die intraperitoneale (i.p.) Injektion von 50 mg/kg Pentobarbital 25
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Ergebnisse
In Abbildung 1zeigen repräsentative echokardiographische Aufnahmen die Nützlichkeit der Echokardiographie, kardiale Phänotypen bei genetisch veränderten Mäusen zu identifizieren. Der Unterschied zwischen einer Maus mit normalen Herzfunktion (Abbildung 1A) und ein Tier mit einem dilatierten linken Ventrikel und reduzierte LV-Funktion (Abb. 1 b) kann leicht identifiziert werden. Ab.......
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Diskussion
Verschiedene Methoden wurden entwickelt, um kardiale Struktur und Funktion bei Mäusen, einschließlich Echokardiographie, Kontrast-verstärkte MRI, Mikro-CT und PET-Scan zu bewerten. Aufgrund seiner Wirtschaftlichkeit und Einfachheit ist Echokardiographie die am weitesten verbreitete Technik zur Funktionsanalyse in Mäusen11. In der Regel wegen der geringen Größe des Herzens und der hohen Frequenz der Herzfrequenz bei Mäusen, Wandler mit einer Frequenz > 10 MHz sollte verwendet werden, obwohl erf.......
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Offenlegungen
Die Autoren haben nichts preisgeben.
Danksagungen
Die Arbeit wurde von der französischen Regierung (National Research Agency, ANR) durch das Programm "Investitionen für die Zukunft" LABEX SIGNALIFE (Referenz ANR-11-LABX-0028-01) unterstützt und durch Zuschüsse, K. D. W. von der Association pour la Recherche Sur le Cancer Fondation de France, und planen Sie Krebs Inserm. D. B. und A. V. Feldkamp von der Fondation Pour la Recherche Médicale und von der Stadt Nizza, beziehungsweise. Die Echokardiograph und der Wandler wurden uns freundlicherweise zur Verfügung gestellt von Philips. Wir danken A. Borderie, S. Destree, M. Cutajar-Bossert, A. Landouar, A. Martres, A. Biancardini und S. M. Wagner für ihre qualifizierte tech....
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Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| Weizenkeim-Agglutinin (WGA)-konjugiertes Tetramethylrhodamin | Life Technologies, Molekulare Sonden | W849 | |
| Biotinylierte Ziege Anti-Kaninchen-IgG-Antikörper | Vectorlabs | BA-1000 | |
| Avidin/Biotin Blocking Kit | Vectorlabs | SP-2001 | |
| VECTASTAIN Elite ABC HRP Kit (Peroxidase, Standard) | Vectorlabs | PK-6100 | |
| VECTASHIELD Antifade Eindeckmedium mit DAPI | Vectorlabs | H-1200 | |
| SIGMAFAST 3,3'-Diaminobenzidin Tabletten | Sigma | D4168 | |
| Wasserstoffperoxidlösung | Sigma | H1009 | |
| Anti-Pecam-1 (CD31) Antikörper | Abcam | ab28364 | |
| Ultraschall-Transmissionsgel, Gel Aquasonic 100 | Parker | ||
| Lineare Ultraschallsonde, L15-7io | Philips Healthcare | ||
| Echokardiograph, IE33 xMATRIX | Philips Healthcare Mikroskop | ||
| , Leica DMi8 | Leica | ||
| Fluoreszenzfilterset DAPI | Leica | 11525304 | |
| Filterset TxR | Leica | 11525310 | |
| Digitalkamera, SPOT RT3 Color Slider | Spot Imaging | ||
| Imaging Software, SPOT 5.2 Advanced and Basic Software | Spot Imaging | ||
| Imaging Computer | Dell | ||
| Fine Scissors | Fine Science Tools | 14028-10 | |
| Große Schere | Fine Science Tools | 14501-14 | |
| Skalpellklingen | Fine Science Tools | 10023-00 | |
| Graefe Forceps | Fine Science Tools | 11650-10 | |
| Nagetierrasierer | Harvard Apparatus | 34-0243 | |
| Kassetten zum Einbetten von Paraffin | Sakura | 4155F | |
| neutral gepuffert Formalin | Sakura | 8727 | |
| Xylol | Sakura | 8733 | |
| Paraffin TEK III | Sakura | 4511 | |
| automatisierte Einbettungsapparatur, Tissue-Tek VIP | Sakura | 6032 | |
| Paraffineinbettstation, Tissue-Tek TEC 5 | Sakura | 5229 | |
| Mikrotomklingen, Accu-Edge S35 | Sakura | 4685 | |
| Objektträger, Tissue-Tek | Sakura | 9533 | |
| Deckgläser, Tissue-Tek | Sakura | 9582 | |
| Eindeckmedium Tissue-Tek | Sakura | 1408 | |
| Objektträgerboxen | Sakura | 3958 | |
| Eosinlösung | Sakura | 8703 | |
| Hämatoxylinlösung | Sakura | 8711 | |
| Mikrotom, RM2125RT | Leica | 720-1880 (VWR) | |
| Wasserbad, Leica HI1210 | Leica | 720-0113(VWR) | |
| Ethanol | VWR | ACRO444220050 | |
| 15 ml Tuben | VWR | 734-0451 | |
| Färbeglasschale | VWR | MARI4220004 | |
| Färbegläser | VWR | MARI4200005 | |
| Inkubator | Binder | 9010-0012 | |
| DAB und Harnstoff Wasserstoffperoxid Tabletten, SIGMAFAST 3,3′-Diaminobenzidin Tabletten | Sigma | D4293 | |
| PBS (10X) | Thermo Fisher Scientific | 70011044 |
Referenzen
- Ormandy, E. H., Dale, J., Griffin, G. Genetic engineering of animals: ethical issues, including welfare concerns. Can Vet J. 52 (5), 544-550 (2011).
- Karl, T., Pabst, R., von Hörsten, S. Behavioral phenotyping of mice in pharmacological and toxicological resear....
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Nachdrucke und Genehmigungen
