इस प्रोटोकॉल को ठीक है और गैर के साथ एक मिश्रण से दुर्लभ लक्ष्य कोशिकाओं को तैयार करने के लिए है एकल कोशिका स्तर पर आणविक आनुवंशिक लक्षण वर्णन के लिए लक्ष्य पृष्ठभूमि कोशिकाओं । डीएनए की गुणवत्ता गैर-इलाज एकल कोशिकाओं के बराबर है और एकल सेल आवेदन (दोनों स्क्रीनिंग आधारित और लक्षित विश्लेषण) के लिए अनुमति देता है ।
दुर्लभ लक्ष्य कोशिकाओं के लक्ष्य कोशिकाओं की सतह प्रोटीन के लिए विशेष एंटीबॉडी का उपयोग गैर लक्ष्य कोशिकाओं की एक उच्च पृष्ठभूमि से अलग किया जा सकता है । हाल ही में एक विकसित विधि एक चिकित्सा विरोधी के साथ कार्यात्मक-उपकला कोशिका आसंजन अणु (EpCAM) एंटीबॉडी परिचालित ट्यूमर कोशिकाओं (CTCs)1के अलगाव में के लिए बहुआयामी तार का उपयोग करता है. गैर में एक रोगी मिलान पलटन-मेटास्टेटिक प्रोस्टेट कैंसर से पता चला कि vivo अलगाव तकनीक में एक उच्च प्रतिशत के परिणामस्वरूप रोगियों CTCs के लिए सकारात्मक के रूप में अच्छी तरह से उच्च सीटीसी गिनती के रूप में सीटीसी गणन में वर्तमान स्वर्ण मानक की तुलना में । के रूप में कोशिकाओं को वर्तमान चिकित्सा उपकरणों, एक नए कार्यात्मक तार से बरामद नहीं किया जा सकता है (डिवाइस के रूप में संदर्भित) कब्जा और एंजाइमी उपचार द्वारा कोशिकाओं के बाद टुकड़ी की अनुमति निर्मित किया गया । कोशिकाओं को डिवाइस के लिए संलग्न करने की अनुमति दी जाती है, एक खुर्दबीन पर visualized और एंजाइमी उपचार का उपयोग कर अलग । बरामद कोशिकाओं झिल्ली लेपित स्लाइड पर cytocentrifuged और लेजर microdissection या micromanipulation के माध्यम से व्यक्तिगत रूप से काटा जाता है । एकल सेल नमूने तो एकल सेल पूरे जीनोम प्रवर्धन स्क्रीनिंग और लक्ष्य विशेष दृष्टिकोण सहित एकाधिक बहाव विश्लेषण की अनुमति के अधीन हैं । अलगाव और वसूली की प्रक्रिया एकल कोशिकाओं से उच्च गुणवत्ता डीएनए पैदावार और बाद में पूरे जीनोम प्रवर्धन (WGA) ख़राब नहीं है । एक एकल कोशिका के परिवर्धित डीएनए को परखने के लिए अग्रेषित किया जा सकता है और/या लक्षित विश्लेषण जैसे सरणी तुलनात्मक जीनोम संकरण (ऐरे-CGH) या अनुक्रमण । डिवाइस कृत्रिम दुर्लभ सेल नमूनों से पूर्व vivo अलगाव की अनुमति देता है (यानी ५०० लक्ष्य कोशिकाओं परिधीय रक्त के 5 मिलीलीटर में नुकीला). जबकि कोशिकाओं की टुकड़ी की दरें स्वीकार्य हैं (५०-९०%), स्लाइड पर अलग कक्षों की पुनर्प्राप्ति दर, उपयोग की जाने वाली कक्ष लाइन पर निर्भर एक विस्तृत श्रृंखला तक विस्तारित होती है ( 50%) और कुछ और ध्यान देने की आवश्यकता है । मरीजों में इस्तेमाल के लिए यह डिवाइस क्लियर नहीं है ।
हाल ही में, CellCollector DC01, एक चिकित्सा कैंसर रोगियों के परिधीय रक्त से अलग CTCs के लिए विरोधी EpCAM एंटीबॉडी के साथ कार्यात्मक तार, सीटीसी गणन1के व्यवस्थित स्पेक्ट्रम में जोड़ा गया था,2,3 . गैर में वर्तमान में चल रहे एक अध्ययन में मेटास्टेटिक प्रोस्टेट कैंसर, इस कार्यात्मक तार रिपोर्ट लगभग दो बार के रूप में कई रोगियों को सीटीसी-सकारात्मक और उच्च सीटीसी सीटीसी में गिना जाता है-सकारात्मक रोगियों के रूप में CellSearch की तुलना में, सीटीसी गणन 3 में स्वर्ण मानक . इस उत्साहजनक प्रदर्शन के कारण, एकल सेल विश्लेषण के लिए एक कार्यात्मक चिकित्सा तार से कोशिकाओं के अलगाव वांछनीय होगा, लेकिन न तो सेल टुकड़ी समाधान (जैसे trypsin) और न ही लेजर microdissection के साथ एंजाइमी उपचार की अनुमति देता है बरकरार कोशिकाओं की वसूली (डेटा नहीं दिखाया गया है) ।
कब्जा कर लिया कोशिकाओं की टुकड़ी की अनुमति देने के लिए, कार्यात्मक तारों की एक नई पीढ़ी एक विशिष्ट बहुलक से सुसज्जित किया गया था । इस बहुलक, जो तार को कब्जा एंटीबॉडी लिंक, एक रिलीज बफर बरकरार कोशिकाओं की टुकड़ी की अनुमति उपचार (CellCollector DC03 डिवाइस के रूप में संदर्भित करने के लिए अतिसंवेदनशील) है । नई कार्यात्मक उपकरण, कैंसर कोशिका रेखा की कोशिकाओं के विभिंन सांद्रता से अलगाव गोजातीय सीरम एल्ब्युमिन (BSA)/phosphate बफर खारा (पंजाब) और परिधीय रक्त, क्रमशः में नुकीला की अनुमति देता है ।
डिवाइस पर और वसूली के बाद कोशिकाओं के दृश्य का पता लगाने को कम करने के लिए, लक्ष्य कैंसर कोशिकाओं carboxyfluorescein succinimidyl एस्टर (CFSE) और उबरने उपचार (यानीचार्ज और अलग) से पहले एक डीएनए दाग के साथ लेबल कर रहे हैं । एकल कोशिकाओं के डीएनए की गुणवत्ता पर इलाज के प्रभाव पहले एक गुणवत्ता नियंत्रण के माध्यम से WGA के बाद मूल्यांकन किया गया था पीसीआर4,5, ऐरे-CGH6,7 और लक्षित अनुक्रमण7 कोई अंतर नहीं दिखा गैर-स्वास्थ्यकर्मी कक्षों की तुलना में कक्ष निलंबन7से micromanipulated । इस विधि का लाभ दुर्लभ लक्ष्य के संयोजन में निहित है-सेल पूर्व संवर्धन और एकल के लिए कोशिकाओं की वसूली-कक्ष बहाव विश्लेषण (चित्र 1) । वर्तमान CE-लेबल vivo संग्रह डिवाइस में आम तौर पर CTCs के बजाय एकल-सेल आणविक लक्षण वर्णन2,8के लिए गणन के लिए किया जाता है । हालांकि, CTCs के बीच विविधता की जांच करने के लिए और अधिक व्यापक विश्लेषण व्यक्तिगत सेल स्तर पर विश्लेषण के लिए (यानी एकल-कक्ष स्तर पर लक्षित अनुक्रमण) । अंय सेल आधारित तरीकों EpCAM के immunomagnetic अलगाव पर आधारित है-सकारात्मक CTCs और एकल सेल हैंडलिंग बाद आणविक आनुवंशिक विश्लेषण के लिए dielectrophoresis के आधार पर9,10। CTCs के आणविक लक्षण वर्णन एक नैदानिक सेटिंग में उनके उपयोगी कार्यान्वयन के लिए एक महत्वपूर्ण आवश्यकता है और मेटास्टेटिक झरना के बुनियादी अनुसंधान में समान रूप से महत्वपूर्ण है. CTCs के समानांतर में, परिसंचारी ट्यूमर डीएनए (ctDNA) बहुत महत्व का हो गया है के रूप में यह ंयूनतम तकनीकी अलगाव प्रक्रियाओं11,12के साथ ट्यूमर के बोझ के डीएनए विश्लेषण की अनुमति देता है । सेल आधारित दृष्टिकोण एक पूरक योगदान के रूप में सेवा के रूप में यह आरएनए13,14 और प्रोटीन15 अभिव्यक्ति विश्लेषण के लिए अनुमति देता है और सीटीसी व्युत्पंन सेल संस्कृतियों या xenografts16के लिए भी कर सकते हैं, 17. हालांकि कम सेल वसूली और रोगियों में उपयोग के लिए मंजूरी के रूप में इस तरह की बाधाओं को अभी भी दूर करने की जरूरत है, पकड़ और रिलीज विधि दुर्लभ लक्ष्य कोशिकाओं के लक्षण वर्णन की दिशा में एक महत्वपूर्ण अगले कदम लेता है ।
वर्णित प्रोटोकॉल का उद्देश्य एक कार्यात्मक तार से कोशिकाओं को वापस लाने के लिए (डिवाइस के रूप में संदर्भित) के लिए पूर्व विवो एकल सेल जीनोमिक विश्लेषण. हम तीन EpCAM-सकारात्मक सेल लाइनों (एचटी-29, LNCaP, और VCaP) का परीक्षण किया, लेकिन सिद्धांत रूप में, इस विधि EpCAM व्यक्त करने के लिए किसी भी सेल लाइन के लिए लागू कर सकते हैं । EpCAM-सकारात्मक लक्ष्य कोशिकाओं शुद्ध सेल निलंबन के रूप में डिवाइस के लिए प्रस्तुत किया जा सकता है (२.१ देखें.) या पृष्ठभूमि कोशिकाओं के एक अधिशेष में मिश्रित (उदापरिधीय रक्त, २.२ देखें.) । जबकि विशेष रूप से उत्तरार्द्ध दुर्लभ कोशिका शर्तों के तहत अलगाव क्षमताओं का परीक्षण करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है, तार से जुड़ी कोशिकाओं की संख्या की ठीक ट्यूनिंग वर्णित कम मात्रा दृष्टिकोण का उपयोग किया जा सकता है (२.३ देखें.) । के रूप में सेल लाइनों के बीच मतभेद की उंमीद कर रहे हैं, तार चार्ज करने के लिए उपयुक्त सेल घनत्व, रोटेशन की गति के रूप में के रूप में अच्छी तरह से मशीन समय की जरूरत संलग्न कोशिकाओं की संख्या का मूल्यांकन एक इम्यूनोफ्लोरेसेंस माइक्रोस्कोप का उपयोग करके empirically परीक्षण किया जाना है ।
एकल-कक्ष स्तर WGA पर जीनोमिक बहाव अनुप्रयोगों के लिए, की आवश्यकता है । पसंद की WGA विधि प्रयोगशालाओं के बीच अलग हो सकता है और, सिद्धांत रूप में, हमारे विधि से सभी तरीकों के लिए खुला है micromanipulation या लेजर microdissection से प्राप्त नमूनों को संभाल कर सकते हैं । इस प्रोटोकॉल में, हम एक enzymatically खंडित डीएनए के आधार पर एक गर्मी-विखंडन आधारित WGA7की तुलना में एक बेहतर प्रदर्शन के कारण विधि का उपयोग करें । वैकल्पिक, एकल कोशिकाओं इज़ोटेर्माल बाद डीएनए20,21रूपरेखा की अनुमति WGA को अग्रेषित किया जा सकता है ।
वर्णित प्रोटोकॉल जीनोमिक एकल सेल विश्लेषण के लिए कार्यात्मक तारों की एक नई पीढ़ी से जुड़ा होने के बाद बरकरार कोशिकाओं को ठीक करना है । कार्यात्मक तारों की पहली पीढ़ी है, जो भी केवल CE-बाजार पर अब तक vivo संवर्धन उपकरणों में अनुमोदित का प्रतिनिधित्व करते हैं, metastasized कैंसर रोगियों में CTCs की गणना के लिए इस्तेमाल किया गया । पिछले प्रकाशनों और हमारे स्वयं के डेटा वर्तमान सोने की मानक प्रौद्योगिकी2की तुलना में अधिक संवेदनशील होने के लिए vivo आइसोलेशन तकनीक में सुझाव देते हैं । इस प्रकार, डिवाइस में महसूस किया के रूप में एक वसूली सुविधा के साथ vivo अलगाव तकनीक में लैस एकल कोशिका स्तर पर लक्षण वर्णन के साथ उच्च सीटीसी वसूली के संयोजन की अनुमति देता है.
हालांकि, डिवाइस रोगियों में उपयोग के लिए साफ़ नहीं है, इस प्रकार, नैदानिक डेटा उपलब्ध नहीं हैं । पूर्व vivo अनुप्रयोगों (यानी अलग CTCs के बाद परिधीय रक्त से नमूना) की सिफारिश नहीं कर रहे हैं के रूप में प्रौद्योगिकी cubital व्यर्थ में मौजूद सेटिंग्स के लिए अनुकूलित है, व्यर्थ के कम व्यास उदा (की संभावना बढ़ रही है CTCs और पकड़ने एंटीबॉडी के बीच सीधा संपर्क) और लंबे समय प्रतिधारण (30 मिनट, रक्त की 2-3 एल तार पारित करने की अनुमति). हालांकि, के रूप में २.२ अनुभाग में उल्लिखित । लक्ष्य कक्षों को मिश्रित नमूनों7से भी पृथक किया जा सकता है ।
विधि की वर्तमान सीमा तारों से अलगाव के बाद स्थिर कोशिकाओं की अकुशल वसूली है । यह, तथापि, एक सेल निर्धारण कदम से सुधार किया जा सकता है टुकड़ी उपचार से पहले ।
संक्षेप में, इस प्रोटोकॉल आनुवंशिक रूप से निस्र्पक एकल कोशिकाओं के लिए सेल वसूली के साथ एक vivo में अलगाव तकनीक के संयुक्त उपयोग की दिशा में पहला कदम है । इसके अलावा प्रयासों के रोगियों में अपने आवेदन के लिए सेल वसूली और मंजूरी के अनुकूलन का पता1,2की जरूरत है । हालांकि, उपचार की निगरानी और चिकित्सा के निर्णय के लिए व्यक्तिगत दवा CTCs की गणन से परे है । इस प्रकार, इस विधि एकल कोशिका स्तर पर जीनोमिक सीटीसी लक्षण वर्णन की दिशा में पहला कदम है ।
एकल सेल transcriptome विश्लेषण की दिशा में आवेदन बरकरार कोशिकाओं काटा जाता है के रूप में संभव लग रहे हैं । तथापि, यह आकलन किया जा रहा है कि क्या उबर प्रक्रिया पर आरएनए अखंडता (उदा. अग्रेषण-qPCR22के बाद प्रत्यक्ष lysis करने के लिए एकल कक्ष पुनर्प्राप्त) पर प्रभाव पड़ता है । यदि सफल, एकल कोशिकाओं के लक्षण वर्णन (जैसे CTCs) transcriptome स्तर पर स्थानांतरित किया जा सकता है, और अधिक विस्तृत विश्लेषण की अनुमति. इस संबंध में, आरएनए-seq स्मार्ट-seq2 का उपयोग कर एकल कोशिकाओं की आरएनए अनुप्रवाह विश्लेषण के लिए एक मूल्यवान उपकरण प्रदान करता है के रूप में प्रवर्धित सीडीएनए (आरएनए-seq पुस्तकालय की तैयारी के दौरान प्राप्त) मात्रात्मक पीसीआर के अधीन किया जा सकता है । यह एक संयुक्त लक्ष्य और स्क्रीनिंग आधारित एकल बरामद कोशिकाओं22,23के विश्लेषण की अनुमति देगा ।
वर्तमान कार्यात्मक तारों विरोधी EpCAM एंटीबॉडी जो24CTCs के सकारात्मक चयन के लिए एक व्यापक रूप से इस्तेमाल किया उपकला मार्कर है पर आधारित हैं । कई CTCs जैसे cytokeratins या EpCAM के रूप में उपकला मार्करों downregulate हो सकता है25, HER2 के रूप में एंटीबॉडी जोड़ने/नए सीटीसी अलगाव की संभावना बढ़ जाएगी । कई एंटीबॉडी आधारित संवर्धन रणनीतियों और विकसित किया गया है फरेरा एट अलद्वारा की समीक्षा की । २०१६ में26. एक तार पर एक एंटीबॉडी मैटीरियल का मिश्रण एक उच्च संख्या और CTCs के अतिरिक्त उपप्रकार के अलगाव के लिए अग्रणी प्रौद्योगिकी का एक भविष्य में सुधार हो सकता है ।
यह सभी तार हैंडलिंग को शामिल कदम के लिए अनिवार्य समाधान में जलमग्न तार के कार्यात्मक हिस्सा रखने के लिए अपनी कार्यक्षमता बनाए रखने के लिए है । हम मूल्यांकन (माइक्रोस्कोप के दौरान 1x पंजाब में तार जगह की सिफारिश; उदा. चरण ३.१ । -३.३.) और भंडारण । अनुचित दाग से बचने के लिए, हम कदम 1.2.1 में हौसले से तैयार दाग समाधान का उपयोग करने की सलाह देते हैं । और 1.2.2 । कमजोर से सना हुआ कोशिकाओं तार पर सेल गिनती बाधित और संलग्न कोशिकाओं के अनुमान के लिए नेतृत्व कर सकते हैं ।
यह सेल निलंबन (कदम 2.3.4.) के बाद लदान के लिए पाश्चर पिपेट में तार डालने जब रबर टोपी के साथ पाश्चर पिपेट plugging से बचने के लिए आवश्यक है. रबर टोपी जगह में तार पकड़ इतना है कि कार्यात्मक हिस्सा पाश्चर पिपेट की नोक के अंदर स्थित है प्रयोग किया जाता है । यदि टोपी भी मजबूती से पाश्चर पिपेट के पीछे से जुड़ा हुआ है, सेल निलंबन की लोडिंग संभव नहीं है । इस मामले में, टोपी ऐसी है कि हवा जो लोड सेल निलंबन से विस्थापित है पिपेट छोड़ सकते है कम ।
तार झुका कदम ३.२ में सेल की गिनती के दौरान अपने अभिविन्यास के लिए महत्वपूर्ण है । और ३.३. इस तरह के तार के गैर कार्यात्मक अंत एक तरफ झूठ करने के लिए आता है कि चिपकने वाला टेप का उपयोग कर तारों माउंट । कार्यात्मक भाग की पूरी लंबाई की स्कैनिंग के बाद, तार लुढ़का १८० ° है तो अंय कार्यात्मक तार के आधे स्कैन किया जा सकता है । तार पर कोशिकाओं की संख्या का आकलन करने के लिए प्रारंभिक प्रयोगों के लिए यह कदम महत्वपूर्ण है । एक बार एक निश्चित सेल लाइन और प्रक्रिया के लिए कोशिकाओं की संख्या का मूल्यांकन किया है, प्रक्रिया सेल गिनती के बिना दोहराया जा सकता है (उदाकेवल कक्षों की उपस्थिति के लिए जांच कर रहा है या इस चरण को छोड़ रहा है) । सावधान pipetting जब चरण ४.८ में supernatant की मात्रा को कम करने के लिए सेल हानि से बचने के लिए महत्वपूर्ण है । सुनिश्चित करें कि pipetting सुचारू रूप से गोली करने के लिए अशांति के कारण के बिना किया जाता है ।
The authors have nothing to disclose.
इस अध्ययन के ऑस्ट्रिया के विज्ञान कोष (FWF), परियोजना-नहीं द्वारा वित्त पोषित किया गया । मैं १२२०-B19 (पी एस के लिए) में ERANET परियोजना के भाग के रूप में अनुवाद कैंसर अनुसंधान (TRANSCAN) “प्रोस्टेट कैंसर में ंयूनतम अवशिष्ट रोग के लिए के रूप में ट्यूमर कोशिकाओं परिसंचारी (सीटीसी-स्कैन)” । पीएचडी परीक्षार्थी एस॰सी॰ को मेडिकल यूनिवर्सिटी ऑफ चरने के पीएचडी प्रोग्राम आणविक चिकित्सा के फ्रेम के भीतर प्रशिक्षित किया गया । लेखक आभार नीना Schlögl, डैनियल Kummer, गाबी Wendt, क्लाउडिया Chudak, जूलिया Schulz, और Johanna Schiller अपने विशेषज्ञ तकनीकी सहायता के लिए स्वीकार करते हैं । लेखक चित्रमय डिजाइन समर्थन के लिए Georg Peinhaupt धंयवाद ।
Gilupi Release Buffer | Gilupi | GIL083 | Used to detach cells from the wire |
McCoy's 5A Medium (1x) suppl. with L-Glutamine | Thermo Fisher Scientific | 16600-082 | Culture medium used for HT-29 cells, adapt culture medium to cell line used for the experiments |
HEPES Buffer Solution (1 M) | PAA | S11-001 | Supplement for McCoy's 5A Medium |
Foetal Bovine Serum Gold | PAA | A15-151 | Supplement for McCoy's 5a Modified Medium |
Penicillin-Streptomycin (100x) | Biowest | L0018-100 | Supplement for McCoy's 5a Modified Medium |
Phosphate Buffered Saline (1x PBS) | Thermo Fisher Scientific | 10010-015 | |
Accutase | Biowest | L0950-100 | Cell detachment solution (cell culture) |
Water bath | GFL | Type 1003 | Used for prewarming solutions |
Incubator | Thermo Fisher Scientific | Used to incubate cells (cell culture) | |
50 mL reaction tubes | VWR | 525-0403 | |
Roller mixer | Stuart Scientific | SRT6D | Used to attach cells to the wire while keeping the cells from sedimenting |
CellTrace CFSE Cell Proliferation Kit | Thermo Fisher Scientific | C34554 | Used to label living cells (cytoplasmic label) |
Hoechst 33342 | H3570 | Thermo Fisher Scientific | Used to stain DNA (nucleic counterstain) |
Centrifuge (equipped for holding 15 mL and 50 mL reaction tubes) | Thermo Fisher Scientific | Heraeus Megafuge 40R | Used for pelleting cells |
Observer Z1 (Fluorescence/laser microdissection microscope) | Carl Zeiss Microimaging | Inverted (immunofluorescence) microscope capable of laser microdissection; Fluorescence microscopes must be able to detect Hoechst 33342 (DAPI filter) and CFSE (FITC filter) | |
Bovine Serum Albumin (BSA) | Sigma-Aldrich | A4503-50G | Used for coating glass/plastic surfaces |
MS1 Minishaker | Sigma-Aldrich | Z404039 | Used for vortexing |
Vacutainer EDTA (or Na-heparin) tubes | BD | 366450 (or 366480) | Used as reaction tube for ex vivo capture of target cells |
Detektor CANCER03 DC03 | Gilupi | GIL003 | Functionalized wire capable of isolating and detaching EpCAM-positive cells (also referred to as catch&release, C&R) |
Syringe needles (G20) | VWR | 613-0554 | Used to puncture rubber caps in order to allow the non-functional part of the C&R to lead through it |
Neubauer chamber | Roth | T729.1 | Used to count cells |
Pasteur pipettes 150 mm | Volac | D810 | Used for the low-volume application of cells to the C&R |
Grease pen | Dako | S2002 | Used on glass slides to hold cell suspension in place |
Steril syringe filter (0.2 µm) | Corning | 431219 | For filtering freshly prepared Gilupi Release Buffer |
Delfia PlateShaker | Perkin Elmer | 1296-003 | Used for agitation during cell detachment |
1.5 mL tubes | Eppendorf | 30,125,150 | |
Ampli1 WGA Kit | Silicon Biosystems | To be ordered via Silicon Biosystems | |
Axiovert M200 equipped with Mikromanipulator MMJ and CellTram vario | Zeiss/Eppendorf | Use micromanipulation at hand | |
Microcapillaries (25 µm in diameter), CustomTip Type I | Eppendorf | 930001201 | Used for micromanipulating cells |
0.2 mL PCR tubes | Biozym | 710920 | |
Cytocentrifuge and equippment | Hettich | Universal 32 | Use cytocentrifuge at hand |
Thermo cycler | Bio-Rad | DNA Engine Dyad | Every thermo cycler with heated lid can be used |
Microcentrifuge | Roth | CX73.1 | Use desk-top centrifuge at hand |
MembraneSlide 1.0 PET | Zeiss | 415101-4401-050 | Membrane-coated glass slides used for laser microdissection |
UV Stratalinker 1800 | Stratagene | 400072 | Use DNA cross linker at hand |
Standard PCR reagents | |||
6x DNA Loading | Thermo Fisher Scientific | R0611 | Use gel loading dye at hand |
DNA ladder | BioLabs | N0551G | Use 100 bp ladder at hand |
Agarose | Biozym | 840004 | |
Gel electorphoresis station | Bio-Rad | Use electrophoresis system at hand | |
Gel Red Nucleic Acid Stain | Biotium | 41003 | Intercalating dye for DNA visualization In agarose gels |