Tissue-Engineering Nierenfunktion Konstrukte bieten eine Lösung für den Organmangel und die schädlichen Wirkungen der Dialyse. Hier beschreiben wir ein Protokoll zum Mikro murine Nieren zur Isolation von Cortico-medullären Segmente zu sezieren. Diese Segmente werden in zellulären Gerüst-freie Konstrukte bilden renale Organellen implantiert.
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Methodenartikel
Mikrodissektion primäre renale Gewebe Segmente und Einbindung mit neuartigen Gerüst-freie Konstrukt-Technologie
* These authors contributed equally
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Nieren-Transplantation ist jetzt ein Mainstream-Therapie bei terminaler Niereninsuffizienz. Mit rund 96.000 Menschen auf der Warteliste und nur ein Viertel dieser Patienten Transplantation zu erreichen, ist jedoch dringend nach Alternativen für diejenigen Organe versagen. Um die schädlichen Folgen der Dialyse zusammen mit der gesamten Gesundheitskosten zu verringern, die es verursacht, ist aktive Untersuchungen im Gange auf der Suche nach Alternativlösungen zur Organtransplantation. Implantierbare Tissue-Engineering renal zellulären Konstrukte sind ein solcher Machbaren Ansatz zu ersetzen verloren renal Funktionalität. Zum ersten Mal beschrieben, hier Mikrodissektion murinen Nieren zur Isolation von lebenden Corticomedullary renal Segmente. Diese Segmente sind in der Lage, rasche Einarbeitung in Gerüst-freie endothelial-Fibroblasten Konstrukte, die schnelle Verbindung mit Host Gefäßsystem einmal implantiert ermöglichen kann. Erwachsenen Maus Nieren wurden von Lebendspendern, gefolgt von Stereoskop Mikrodissektion, renale Segmente 200-300 µm im Durchmesser zu erhalten beschafft. Mehreren renal Konstrukte wurden hergestellt mit primären renal Segmente, die aus nur einer Niere geerntet. Diese Methode zeigt ein Verfahren, das renal Funktionsgewebe aus Organen zu retten könnte, die sonst weggeworfen würden.
Einleitung
Chronische Niereninsuffizienz (CNI) gehört zu den aktuellen öffentlichen Gesundheitswesens Herausforderungen weltweit1. Die Prävalenz von CKD in den Vereinigten Staaten ist mehr als 14 % der Gesamtbevölkerung, mit mehr als 600.000 Amerikaner leiden an der schwersten Form, terminaler Niereninsuffizienz (ESRD)2. Die aktuellen Behandlungsmöglichkeiten für Menschen mit terminaler Niereninsuffizienz Dialyse und Nieren-Transplantation gehören. Obwohl etwa 25.000 Patienten Nierentransplantation jährlich unterziehen, sind eine beträchtliche Anzahl von Patienten hinzugefügt jährlich eine große Diskrepanz zwischen denen, die warte....
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Protokoll
Alle tierischen chirurgischen Eingriffe, die unten beschriebenen stimmten die institutionellen Animal Care und verwenden Committee (IACUC) an der Medical University of South Carolina vor jedem Tier Operationen oder Einsatz von jedem Tiergewebe.
(1) murinen Nephrektomie
- Don ein Mundschutz und bouffant Kappe zur Minimierung des Risikos einer Kontamination. Sterilität bei der Einrichtung von der OP-Bereich zu erhalten.
- Legen Sie nicht gefenstert OP-Abdeckungen auf dem Operationstisch.
- Öffnen Sie die Packung autoklaviert Instrumente auf der sterilen Tüchern. Die Instrumente Nephrektomie gehören 3 kleine Hämostatika,....
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Ergebnisse
Das Protokoll beschrieben produziert ca. 50 renal Segmente pro pyramidale 2 mm3 Abschnitt des renalen Gewebes. Die renale Segmente, die verarbeitet und abgebildet haben röhrenförmige und glomeruläre Komponenten in unterschiedlichen Anteilen (siehe Abbildung 2). Die intakte Segmente waren ein Test unterzogen, um die Lebensfähigkeit der verschiedenen Segmente einmal alle 24 h für drei Tage zu bestimmen. Grün-fluoreszierende Calcein-AM ist mit intraze.......
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Diskussion
Renal lebendes Gewebe zu konstruieren, die Konstrukte in Bezug auf die Art von Zellen und Biomaterialien genutzt und in vielen Fällen sehr unterschiedlich verwendeten Methoden sind veraltet oder nicht gut charakterisierten in der Literatur-7. Während viele Stammzellen Ansätze verwenden oder Rekapitulation Einzelkomponenten der renalen Architektur isoliert, ist die Aussicht auf eine künstlich Neuerstellung eines ganzen Organs mit über 26 verschiedenen differenzierte Zelltypen aus zellulären Suspens.......
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Offenlegungen
Die Autoren haben nichts preisgeben.
Danksagungen
NIH institutionelle Postdoc Ausbildung Grant, NIH-HL-007260
....Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| Nicht gefensterte sterile Field | Busse Hospital Disposables | 696 | |
| Fenestrated Sterile Field | Busse Hospital Disposables | 697 | |
| Halsted Mosquito Pinzetten 5 gebogen | Miltex | Mil-7-4 | "Hämostat" im Manuskript |
| Extra feine Graefe Pinzette, gebogen mit Zähnen | Fine Science Tools | 11155-10 | Feine Pinzette mit Zähnen |
| Extra feine Graefe-Pinzette, gezahnt (ohne Zähne) | Fine Science Tools | 11152-10 | Feine Pinzette ohne |
| Zähne Feine Schere - Wolframkarbid | Fine Science Tools | 14568-09 | Irisschere |
| Betadine Chirurgisches Peeling mit Pumpe, Povidon-Jod 7,5% | Purdue Products L.P. | 67618-151-17 | |
| Steriles Wattepad (4" x 4") | Fisher Healthcare | 22-415-469 | |
| Dulbecco's Phosphat Buffered | Solution Corning | 21-030-CV | |
| Penicillin/Streptomycin Lösung, 100X | Corning | 30-002-Cl | |
| Isofluran, USP | Hersteller: Piramal, Händler: McKesson | 2254845 | |
| Nair Haarentferner | Nair | 22600-23307 | Haarentfernungscreme im Text |
| 200 Proof Ethanol | Decon Laboratories | 2705 | Verdünnt auf 70% Ethanol Lösung |
| BioLite 60mm Gewebekulturschale | Themo-Scientific | 130181 | |
| Press'n Seal | Glad | 12587-70441 | Aufgetragen auf Stereoskop |
| SZX16 Stereomikroskop | Olympus | SZX16 | |
| LWL-Strahler | Cole Parmer | 41720-20 | |
| Selbsttragende Dual-Light-Pfeife, 23" L Schwanenhals | Cole Parmer | EW-41720-60 | |
| Skalpellgriff #3 | Miltex | Mil-4-7 | |
| Sterile Rippenrückenklinge aus Kohlenstoffstahl, Klingengröße 15 | Bard-Parker | 371115 | |
| 31 1/2 Gauge | Nadel ThermoFisher Scientific | 14-826F | Becton Dickinson 305106 |
| Dulbecco's Modified Eagle's Medium | Corning | 10-017-CV | |
| Fetal Select 100% Rinderserum | Atlas Biologicals | FS-0500-AD | |
| Normale humane dermale Fibroblasten | Lonza | CC-2511 | |
| Humane fetthaltige mikrovaskuläre Endothelzellen | Sciencell Research Laboratories | 7200 | |
| Chirurgische Lupen (2,5x) | Oraskopische | N/A) Sonderanfertigung | |
| FGM-2 (Fibroblasten-Basalmedium mit FGM-2 SingleQuots hinzugefügt) | Lonza | CC-3131, CC-4126 | |
| EGM-2 (Endotheliales Basalmedium mit EGM-2 SingleQuots hinzugefügt) | Lonza | CC-3156, CC-4176 | |
| Lebend/Tot Lebensfähigkeit/Zytotoxizität Kit für Säugetierzellen | ThermoFisher Scientific | L3224 | |
| Anti-Cytokeratin-18 Antikörper | Abcam | ab668 | |
| Ziege Anti-Maus IgG, Alexa Fluor 633 | ThermoFisher Scientific | A-21052 | |
| Ziege Anti-Kaninchen-IgG, Alexa Fluor 546 | ThermoFisher Scientific | A-11010 | |
| Anti-Von-Willebrand-Faktor Antikörper | Abcam | ab6994 | |
| Albumin, Fluorescein isothiocyanat Konjugat | Sigma Aldrich | A9771-50MG | |
| Hoescht 33342 | BD Pharmingen | 561908 | |
| Hintergrund Buster | Innovex Biosciences | NB306 |
Referenzen
- Jha, V., et al. Chronic kidney disease: global dimension and perspectives. Lancet. 382 (9888), London, England. 260-272 (2013).
- 2016 USRDS Annual Data Report: Epidemiology of Kidney Disease in the United States. U.S.R.D. , Available from: https://www.usrds.org/2016/download/v2_ESRD_16.pdf (2016).
- Hart, A., et al.
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Nachdrucke und Genehmigungen
