Hier beschreiben wir eine optimierte, Langendorff-basierte Verfahren zur Isolierung von einzelligen Vorhofflimmern Herzzellen aus einem Rattenmodell der metabolischen Syndrom im Zusammenhang mit Herzinsuffizienz mit erhaltener Auswurffraktion. Eine manuelle Regelung der Intraluminal Druck von kardialen Hohlräumen wird implementiert, um funktionell intakt Myozyten geeignet für Erregung-Kontraktion-Kupplung Studien ergeben.
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Methodenartikel
Isolierung von Vorhofflimmern Herzzellen aus einem Rattenmodell der metabolischen Syndrom im Zusammenhang mit Herzinsuffizienz mit erhaltener Auswurffraktion
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
In diesem Artikel beschreiben wir eine optimierte, Langendorff-basierte Verfahren zur Isolierung von einzelligen Vorhofflimmern Kardiomyozyten (ACMs) aus einem Rattenmodell des metabolischen Syndroms (MetS)-im Zusammenhang mit Herzinsuffizienz mit erhaltener Auswurffraktion (HFpEF). Die Prävalenz der MetS-bezogenen HFpEF steigt, und Vorhofflimmern Kardiomyopathien Vorhofflimmern Umbau und Vorhofflimmern zugeordnet sind klinisch sehr relevant, da Vorhofflimmern Umbau ein unabhängiger Prädiktor für die Mortalität ist. Studien mit isolierten einzellige Herzzellen werden häufig verwendet, zu bestätigen und in-Vivo -Befunde zu ergänzen. Herz-Kreislauf-Gefäß-Rarefication und interstitiellen Gewebe Fibrose stellen einen potenziell limitierenden Faktor für die erfolgreiche einzellige Isolation der asbesthaltiger aus Tiermodellen der Krankheit.
Wir haben dieses Problem behoben, durch den Einsatz eines Geräts manuell Regeln des Intraluminal Drucks der kardialen Hohlräume bei der Isolierung im wesentlichen Erhöhung der Ausbeute von morphologisch und funktionell intakt ACMs. Die gewonnenen Zellen können in einer Vielzahl von verschiedenen Experimenten, wie Zellkultur und funktionelle Bildgebung von Calcium (d.h. Erregung-Kontraktion-Kupplung) verwendet werden.
Die Forscher bieten wir eine Schritt für Schritt-Protokoll, eine Liste von optimierten Lösungen, genaue Anweisungen zur Vorbereitung der notwendigen Ausrüstung und eine umfassende Anleitung zur Fehlerbehebung. Während die erste Implementierung des Verfahrens würde schwierig sein, können eine erfolgreiche Anpassung den Leser State-of-the-Art-ACM-Isolationen in einem Rattenmodell der MetS-bezogenen HFpEF für ein breites Spektrum an Experimente durchführen.
Einleitung
MetS beschreibt eine Ansammlung von Risikofaktoren für Diabetes Mellitus Typ 2 und Herz-Kreislauf-Erkrankungen und enthält einen erhöhte arteriellen Blutdruck, Fettstoffwechselstörungen (Triglyceride angehoben und abgesenkt High-density-Lipoprotein-Cholesterin), erhöhte Fasten Glukose und zentrale Adipositas1. Die weltweite Prävalenz des MetS wird voraussichtlich 25 – 30 % und stetig steigende2sein. HFpEF ist ein heterogenes klinisches Syndrom oft im Zusammenhang mit MetS. Kardialen remodeling während HFpEF und seiner vorhergehenden Phasen (z.B. Hypertensive Herzkrankheit) einher geht auch eine Umgestaltung der ....
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Protokoll
Alle Experimente wurden von der lokalen Ethikkommission (TVA T0060/15 und T0003-15) genehmigt und durchgeführt in Übereinstimmung mit den Leitlinien für die Pflege und Verwendung von Labortieren (National Institute of Health, U.S.A.).
Hinweis: Ein vereinfachtes Flussdiagramm des Verfahrens ist in Abbildung 1dargestellt.
(1) Großereignis
- Bereiten Sie die Puffer gemäß Tabelle 1.
| Lösung | PB |
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Ergebnisse
21 Wochen alt können 60 – 90 % der lebensfähigen ACMs (geschätzt wie in Schritt 6.1 beschrieben), nach der Kalzium-Re-Anpassung (Schritt 5.4 – 5,7), von fettleibigen Ratten ZSF-1 mit dieser Methode (Abb. 4A) isoliert werden. Bei Ratten zeichnen sich durch eine andere und mehr heterogene Phänotyp im Vergleich zu VCMs24,25ACMs. Abbildung 4 b zeigt eine einzelne ACM mit erha.......
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Diskussion
Hier beschrieben wir zunächst ein Protokoll für die Isolierung von einzelligen asbesthaltiger aus einem Rattenmodell der MetS-bezogenen HFpEF, die zeigt Vorhofflimmern umgestaltet22markiert. Das Verfahren ist einzigartig anspruchsvoll, wie übermäßiges Fettgewebe die chirurgische Vorbereitung sowie die Kanülierung der Aorta, immer schwieriger machen kann. Die Anleitung zur Fehlerbehebung gemäß Tabelle 2 Adressen der am häufigsten auftretenden Probleme des Verfahrens isoliert.
<.......Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Offenlegungen
Die Autoren haben nichts preisgeben.
Danksagungen
Diese Forschung wurde unterstützt durch die DZHK (Deutsches Zentrum für Herz-Kreislauf-Forschung, d.b.), die EKFS (Else-Kröner-Fresenius-Stiftung, f.h.), und durch das BMBF (deutschen Bundesministerium für Bildung und Forschung) sowie Bosnien und Herzegowina-Charité, klinische Wissenschaftler Programm finanziert, von der Charité - Universitätsmedizin Berlin und das Berlin Institute of Health (f.h.).
....Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| ZSF-1 Fettleibige Ratte | Charles River Laboratories, Inc. | 21 Wochen alt | |
| Feine Irisschere | Fine Science Tools GmbH | 14094-11 | |
| Chirurgische Schere | Fine Science Tools GmbH | 14001-18 | |
| Mikro-Abrichtzange (gebogen, gezahnt) | Aesculap, Inc. | BD312R | |
| Gewebezange (gerade, 1 x 2 Zähne) | Aesculap, Inc. | BD537R | |
| Bindezange (abgewinkelt) | Aesculap, Inc. | MA624R | |
| Guillotine für Nagetiere und Kleintiere | Kent Scientific Corp. | DCAP | |
| Low Cost Induktionskammer 3,0 l | Kent Scientific Corp. | SOMNO-0730 | |
| Schmetterlings-Winged Infusion Set 21 g | Hospira, Inc. | ||
| Abbocath 16 G | Hospira, Inc. | 0G7149702 | |
| Mikrolanze Injektionsnadel | Becton Dickinson GmbH | 301300 | Nadel zur Herstellung einer Kanüle modifizieren |
| Braun Original Perfusor Spritze 50 ml | B. Braun Melsungen AG | 8728810F | |
| Braun Inject Solo Spritze 10 ml | B. Braun Melsungen AG | 2057926 | |
| Becher 50ml | Duran Group (DWK Life Sciences GmbH) | 21 106 17 | |
| Duroplan Petrischale (100 x 20 mm) | Duran Group (DWK Life Sciences GmbH) | 21 755 48 | |
| Seraflex Nahtmaterial USP 3/0 | SERAG-WIESSNER GmbH & Co. KG | IC208000 | |
| VWR Einweg-Vierkant-Wiegeschiffchen 100ml | VWR, Inc. | 10803-148 | |
| aus Styropor | |||
| Natriumchlorid | Sigma-Aldrich, Inc. | 71380 | |
| Kaliumchlorid | Sigma-Aldrich, Inc. | P4504 | |
| Kaliumphosphat monobasisch | Sigma-Aldrich, Inc. | P5379 | |
| Natriumphosphat zweibasisch | Sigma-Aldrich, Inc. | S0876 | |
| Magensiumsulfat-Heptahydrat | Sigma-Aldrich, Inc. | ||
| Magensiumchlorid | Sigma-Aldrich, Inc. | M8266 | |
| HEPES | Sigma-Aldrich, Inc. | H3375 | |
| Taurin | Sigma-Aldrich, Inc. | T0625 | |
| Glukose | Sigma-Aldrich, Inc. | G7528 | |
| 2,3-Butandion-Monoxim | Sigma-Aldrich, Inc. | B0753 | |
| Calciumchlorid-Lösung (1 M) | Sigma-Aldrich, Inc. | 21115 | |
| Rinderserumalbumin | Sigma-Aldrich, Inc. | A9647 | |
| Liberase | Roche (Sigma-Aldrich, Inc.) | LIBTM-RO | |
| Heparin | Rotexmedica GmbH | 3862357 | |
| Forene (Isofluran) | Abbvie Deutschland GmbH & Co. KG 10182054 | ||
| Laminin aus Engelbreth-Holm-Swarm murines Sarkom-Basalmembran | Sigma-Aldrich, Inc. | L2020 | |
| WillCo Glasbodenschale 500µ l 0,005 mm | WillCo Wells B.V. | HBST-3522 | |
| Fluo4 AM | Invitrogen (Thermo Fisher Scientific, Inc.) | F14201 | 5&Mikro; M für 20min bei RT |
| Di-8-ANNEPS | Invitrogen (Thermo Fisher Scientific, Inc.) | D3167 | 10&Mikro; M für 45 min bei 37°; C |
| Mitotracker RED FM | Invitrogen (Thermo Fisher Scientific, Inc.) | M22425 | 20nM für 30 min bei 37°; C |
| Ummanteltes Reaktionsgefäß 500 ml | Gebr. Rettberg GmbH | 107024414 | |
| Ummanteltes Reaktionsgefäß 1000 ml | Gebr. Rettberg GmbH | 107025414 | |
| Ummantelte Blasenfalle | Gebr. Rettberg GmbH | 134720001 | |
| ED Heizung Tauchthermostat | Julabo GmbH | 9116000 | |
| Reglo Digital MS-2/6 Schlauchpumpe | Ismatec (Cole-Parmer Gmbh) | ISM 831 | |
| Voltcraft Thermometer 302 K/J | Conrad Electronic SE | 030300546 | |
| Schlauch | |||
| LSM 700 Mikroskop | Carl Zeiss, Inc. | ||
| ZEN 2.3 Imaging-Software | Carl Zeiss, Inc. | 410135-1011-240 | |
| Einkanal-Heizungsregler TC-324B | Warner Instruments, LLC | 64-2400 | |
| 8-Kanal-Perfusionssystem | Warner Instruments, LLC | 64-0185 | |
| 8-Kanal-Multi-Line-In-Line-Lösungsheizungen | Warner Instruments, LLC | 64-0105 |
Referenzen
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Nachdrucke und Genehmigungen
