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Methodenartikel

Erkennung von Viren von Bioaerosolen Anion Austausch Harz

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DOI:

10.3791/58111

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22. August 2018

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1High Plains Intermountain Center for Agricultural Health and Safety, Department of Environmental and Radiological Health Sciences, Colorado State University, 2National Wildlife Research Center, Wildlife Services, Animal and Plant Health Inspection Service, United States Department of Agriculture, 3Western Sydney University, 4Leprino Foods, Inc, 5Department of Food Science and Agricultural Chemistry, McGill University, 6Department of Mechanical Engineering, Colorado State University, 7Department of Animal Science, University of Wyoming

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Ein Anion Austausch Harz-basierte Methode, angepasst an Flüssigkeit, die Impingement-basierte Bioaerosol Probenahme von Viren nachgewiesen wird. Kombination mit nachgeschalteter molekulare Erkennung ermöglicht die Methode facile und empfindlichen Nachweis von Viren von bioaerosolen.

Zusammenfassung

Dieses Protokoll zeigt eine angepasste Bioaerosol Sampling-Methode für Viren. In diesem System ist Anion Austausch Harz mit flüssigen Impingement-basierten Air Probenahmegeräte für wirksame Konzentration von negativ geladenen Viren von bioaerosolen gekoppelt. So dient das Harz als zusätzliche Konzentration Schritt im Workflow Bioaerosol Probenahme. Nukleinsäure-Extraktion der viralen Partikel erfolgt dann direkt aus dem Anion Austausch Harz, mit der sich daraus ergebenden Probe für Molekulare Analysen geeignet. Dieses Protokoll beschreibt weiter, eine Custom-Built Bioaerosol Kammer erzeugen Virus beladenen Bioaerosole unter verschiedensten Umweltbedingungen und damit für die kontinuierliche Überwachung der Umgebungsvariablen wie Temperatur, Feuchtigkeit, Windgeschwindigkeit und Aerosol Massenkonzentration. Der wesentliche Vorteil der Verwendung dieses Protokolls ist erhöhte Empfindlichkeit des Viren-Erkennung, da mittels direkter Vergleich zu einer unveränderten konventionelle flüssige Ausbeute bewertet. Weitere Vorteile sind die Möglichkeit, diverse negativ geladene Viren, die niedrigen Kosten der Anion Austausch Harz (~$0.14 pro Probe) und Benutzerfreundlichkeit zu konzentrieren. Nachteile sind die Unfähigkeit dieses Protokolls, Infektiosität von Harz adsorbiert Viruspartikel zu bewerten, und möglicherweise die Notwendigkeit zur Optimierung des Puffers flüssige Probenahme verwendet innerhalb der Ausbeute.

Einleitung

Der Zweck dieser Methode ist eine hochsensible Bioaerosol Probenahme Plattform zur molekularen Erkennung von negativ geladenen Viren von bioaerosolen Erleichterung bieten. Mikroorganismen, einschließlich Viruspartikel, können über einen längeren Zeitraum der Zeit1in bioaerosolen überleben. Bioaerosole können über relativ große Entfernungen reisen und Lebensfähigkeit und Infektiosität, zu erhalten, wie ein Ausbruch der Legionärskrankheit belegt, die aus industriellen Kühltürme befindet sich in einer Entfernung von 6 km von den betroffenen Personen stammen und 18 Todesfälle2führte. Indirekter Übertragung von Viren auf den Menschen vermittelt durch Bioaerosole für Norovirus Ausbrüche in Schulen und Restaurants3,4nachgewiesen und kann in mehreren Einstellungen auftreten. In ähnlicher Weise kann Bioaerosol Übertragung von Viren in landwirtschaftlichen Einstellungen wie z. B. bei Schweinen und Geflügel betrieben, mit dieser Übertragungsweg als ein wichtiger Faktor in der Bewegung von Viren zwischen Produktion Einrichtungen5, auftreten. 6 , 7 , 8 , 9.

Effektive Probenahme von bioaerosolen Virus beladenen ermöglicht eine Verbesserung der Schnelldiagnostik und Bereitschaft zur ausbruchsprävention, wie bei Demonstrationen gezeigt welche H5, Grippe eine Viren wurden von bioaerosolen im lebenden Tier entdeckt in China Märkten und die USA10,11. Aktuellen Bioaerosol-Sampling-Technologien beinhalten eine Reihe von verschiedenen Teilchen erfassen Prinzipien und in Impingers, Zyklone, Impaktoren und Filter12breit kategorisiert werden können. Es sprengt den Umfang dieses Protokolls erschöpfend decken alle Vorteile und Nachteile dieser Plattformen für die Probenahme von bioaerosolen Viren; Allerdings ist festzuhalten, dass der Großteil dieser Probenahmegeräte für die Sammlung von Viren und Bakteriophagen13nicht optimiert wurden. Darüber hinaus ist Infektiosität der Viruspartikel oft negativ beeinflusst, mit flüssigen Impingers als virale Infektiosität effektiver als sampling-Geräte wie solide Impaktoren oder Filter14pflegen. Ein Nachteil des flüssigen Impingement ist jedoch der Verwässerungseffekt Ziel, die tritt auf, weil Viren in relativ großen Mengen (in der Regel ≥20 mL) Flüssigkeit in den Sammelbehälter aufgefangen werden. Ein weiterer wichtiger Nachteil beinhaltet die suboptimale Effizienz des flüssigen Impingers Partikel konzentrieren < 0,5 µM in Größe15. Capture Effizienz dieser Geräte kann jedoch durch Immobilisierung auf festen Matrizen verbessert werden, wie Immobilisierung Erhaltung der viralen Nukleinsäuren und virale Infektiosität16,17verbessern kann.

Wir haben bereits gezeigt, dass Anion Austausch Harz ein wirksames Instrument für die Erfassung und die Konzentration der Viren aus flüssigen Matrizen ist, einschließlich F-RNA Bakteriophagen, Hepatitis A-Virus, menschliche Adenovirus und Rotaviren18,19 ,20. Wie vom Hersteller definiert, ist das Anion Austausch Harz genutzt in diesem Werk ein Macroreticular Polystyrol starke base Anion Austausch Harz in der funktionalisierten quartäres Amin Gruppen vermitteln Attraktion und Erfassung von Anionen in einer flüssigen Mittel21 . Infolgedessen soll das Anion Austausch Harz Viren mit Net-Negative Oberfläche Gebühren, einschließlich viele enterischen Viren, Influenza-Viren und andere Viren relevant für die Gesundheit von Mensch und Tier zu erfassen.

Das aktuelle Protokoll beinhaltet die Zugabe von Anion Austausch Harz zu einem flüssigen Ausbeute. In diesem System dient das Harz als eine sekundäre Konzentration Schritt für virale Partikel in die Ausbeute Flüssigkeit gefangen genommen. Nukleinsäuren können dann direkt in kleinen Mengen, bietet eine konzentrierte Probe für Molekulare Analysen eluiert werden. Der Hauptvorteil dieser Methode deshalb die Verbesserung der viralen Nachweisempfindlichkeit, vor allem durch Verringerung des Volumens der Probe. Darüber hinaus aufgrund der inhärenten unspezifische Einnahme negativ geladene Viren, die Methode ist wahrscheinlich für die Erkennung einer Vielzahl von Viren von Interesse. Hier wird die Methode für Impfstämme Typ A und Typ B Influenza-Viren und die FRNA Coliphage MS2 (MS2) demonstriert. Diese Viren sind anschließend mit standard qRT-PCR-Assays als zuvor beschriebenen22nachgewiesen. Der Endpunkt-Benutzer sollten nicht erwarten, Schwierigkeiten bei der Durchführung dieser Methode, da Änderungen an der aktuell vorhandenen Geräte sind keine größere Störungen zu den herkömmlichen Fluss Bioaerosol Probenahme-und Analysemethoden.

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Protokoll

1. Setup der Bioaerosol Kammer (siehe Abbildung 2)

  1. Vorspannung der flüssigen Impingers mit 20 mL 0,01 M Phosphat gepufferte Kochsalzlösung, pH 7,5 (PBS).
    1. 0,5 g Anion Austausch Harz und unterbrechen Sie innerhalb der PBS eines flüssigen Impingers, mit einer anderen Flüssigkeit Ausbeute als Kontrolle dienen.
  2. Lage flüssige Impingers parallel in der Bioaerosol-Kammer mit Klammer steht mit Aerosol Buchten mit Blick auf den Zerstäuber.
    Hinweis: Siehe Abbildung 2 für weitere Details.
  3. Zusammenlegung eines direkten lesenden Aerosol Monitors in der Nähe der flüssigen Impingers Konzentration (mg/m3) von dem Bioaerosol messen.
  4. Zusammenlegung von zusätzlichen direkten lesenden Instrumente (Raumluft Qualität Monitor und thermische Anemometer) in der Nähe der flüssigen Impingers Umgebungsvariablen wie Temperatur, Überwachung der relativen Luftfeuchtigkeit und Wind zu beschleunigen, innerhalb der Bioaerosol-Kammer.
  5. Führen Sie Axialventilatoren in den Ecken der Bioaerosol Kammer zur Erleichterung des Aerosols mischen.
    Hinweis: Axialventilatoren mit einer festen Geschwindigkeit laufen und sind nicht verstellbar.

2. Bioaerosolization Modellversuche (siehe Abbildung 3)

  1. Seriell, 10-divisibel Verdünnungen von MS2 Bakteriophagen und Influenza-Impfstoff zur gewünschten Konzentrationen in Phosphat-gepufferte Kochsalzlösung (PBS) durchführen.
    Hinweis: Werden die Methode hier, 103,5 FFU/mL von der Typ A und B Influenza-Impfstoff Virusstämme und 10 zeigen5 PFU/mL von der Bakteriophage MS2 genutzt. Um Titer für die Impfkulturen festzustellen, sind Bakteriophagen in Escherichia coli HS (pFamp) R propagiert und wie zuvor beschrieben20aufgelistet. Der kommerziellen Impfstoff enthält bekannte Mengen von vier live abgeschwächten Grippe-Virus-Stämme, zwei geben eine Influenza-Viren und zwei Typ B Influenza-Viren, ausgedrückt in fluoreszierenden Fokus Einheiten oder FFU.
  2. Bereiten Sie Impfkulturen in das Glasgefäß eine Kollision 6-Jet Vernebler durch die Schaffung von Suspensionen der gewünschten Konzentrationen von Viruspartikel in 100 mL PBS vor und installieren Sie innerhalb der benutzerdefinierten Bioaerosol-Kammer.
  3. Messgeräte zur Messung von Variablen innerhalb der Kammer Bioaerosol, wie Temperatur, % Relative Feuchte, Kohlendioxid-Konzentration und Windgeschwindigkeit (erzeugt mit einem Axialventilator) zu initiieren. Verwenden Sie einen direkten lesenden Aerosol Monitor Massenkonzentration innerhalb der Kammer Bioaerosol verfolgen und Konsistenz innerhalb und zwischen den Prüfungen zu etablieren.
  4. Versiegeln der Bioaerosol-Kammer und spülen Sie 10 min mit HEPA-gefilterte Luft.
  5. Der Vernebler mit 6,9 kPa liefern Sie gefilterte, getrocknete Luft.
  6. Generieren Sie eine Zielkonzentration von viralen Bioaerosole (über Vernebler) in jeder Studie Bioaerosol-Kammer. In dieser Demo werden Bioaerosole mit einer Konzentration von 5 mg/m3 generiert.
  7. Die Masse Zielkonzentration des Aerosols angekommen, stoppen Sie Vernebelung.
  8. Betreiben Sie eine Luftpumpe Probenahme für jedes flüssige Ausbeute, die zu einer Durchflussmenge von 12,5 L/min Verhalten Kalibrierung mit einem Standard-Primärfluss vor und nach jeder Samplingereignis zur Sicherstellung der Konsistenz in Probenahme Volumen kalibriert wurde. Versorgung Verdünnung der Luft mit einem HEPA-Filtern in der Nähe des Verneblers und konstanten Druck in der Kammer zu erhalten.
  9. Genießen Sie aktiv die Bioaerosol Kammeratmosphäre, für einen Zeitraum von 40 min, ein Sampling-Volumen von 500 L pro Probe zu erreichen.
    Hinweis: Sampling für 40 min bei 12,5 L/min mit zwei Pumpen parallel kann für die Probenahme von 1.000 L die Bioaerosol. So wird am Ende des Experiments erwartet, dass die Mehrheit der Luft in der Kammer Bioaerosol entnommen und über ein HEPA Filter System in die Umwelt freigesetzt wurde. Dies wird durch die Abnahme der Partikelkonzentration belegt. Nach dem Experiment werden Oberflächen mit 10 % Haushalt Chlorid und 70 % Ethanol dekontaminiert. Indikatoren sind in dieser Demo verwendet; jedoch kann wenn bekannt, dass pathogene Organismen in diesem System verwendet werden, zusätzliche biologische Maßnahmen bedarf.

(3) Nukleinsäure-Extraktion und qRT-PCR-Nachweis

  1. Isolieren Sie Nukleinsäuren direkt vom Anion Austausch Harz und zu Vergleichszwecken, aus der Flüssigkeit innerhalb der flüssigen Impingers verwendet. In diesem Beispiel eine RNA Isolierung ist beschrieben, aber ein ähnliches Protokoll für DNA-Viren genutzt werden.
    1. Nukleinsäure-Isolierung aus dem Anion Austausch Harz.
      1. Übertragen Sie gesamte Anion Austausch Harz-haltige Flüssigkeit von der flüssigen Ausbeute auf eine sterile 50 mL konische Rohr.
      2. Ermöglichen Sie das Harz zu begleichen, und Dekantieren Sie langsam die flüssige Probe aus dem Anion Austausch Harz. Verwenden Sie eine 1 mL-PIPETTENSPITZE, die restliche Flüssigkeit aus dem Anion Austausch Harz entfernen.
      3. Aus einem viralen RNA isolierungskit Hinzufügen von 560 µL virale Lyse Puffer mit Träger RNA direkt an das Anion Austausch Harz und inkubieren Sie für 10 min bei Raumtemperatur mit periodischen mischen.
      4. Mit einer 1 mL-PIPETTENSPITZE übertragen die virale lysate (virale Lyse-Puffer), eine sterile 1,5 mL konische Rohr und fahren Sie mit RNA Isolierung mit einer viralen RNA Isolation kit (siehe Tabelle der Materialien) gemäß den Anweisungen des Herstellers, mit Ausnahme die RNA ist in einem Gesamtvolumen von 60 µL Elution Puffer eluiert.
    2. Nukleinsäure-Isolierung von flüssigen Impingers.
      1. Pipette 140 µL der flüssigen Probe in ein steriles 1,5 mL konische Rohr und RNA-Isolierung mit dem viralen RNA isolierungskit gemäß den Anweisungen des Herstellers, mit Ausnahme der eluierenden RNA in einem Gesamtvolumen von 60 µL Elution Puffer führen.
        Hinweis: 140 µL ist die maximale Sample-Volumen, das mit dem spezifischen viralen RNA isolierungskit hier in einer einstufigen Zubereitung beschäftigt verarbeitet werden können.
  2. Führen Sie qRT-PCR zur Detektion von MS2 und Influenza A und B Viren als zuvor beschriebenen23,24. In dieser Demo werden 5 µL der Nukleinsäure-Eluate für qRT-PCR verwendet.

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Ergebnisse

Abbildung 1 veranschaulicht das Prinzip hinter kostenlos-basierte Erfassung von Viren von bioaerosolen durch Einbeziehung des Harzes in flüssig-Impingers. Abbildung 2 zeigt den Aufbau der Custom-Built Bioaerosol Kammer. Abbildung 3 beschreibt die Schritte zur Einrichtung der Aerosolization Experiment und Maßnahmen zur Qualitätssicherung. Abbildung 4 zeigt Verstärkung Kur...

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Diskussion

Dieses Protokoll beschreibt eine Methode für sensible virale Erfassung von bioaerosolen mit modifizierten flüssigen Impingers. Die Methode ist für die Erkennung und Quantifizierung von der Viruslast in bioaerosolen optimiert. Die gezielte Modifizierung demonstriert hier beinhaltet die Zugabe von Flüssigkeit in eine gemeinsame flüssige Impinger enthaltenen Anion Austausch Harz. Diese Methode wurde für seine Einfachheit in nachgeschalteten Probenverarbeitung entwickelt, wobei andere Probe Verarbeitungstechniken wie Zentrif...

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Offenlegungen

Die Autoren haben nichts preisgeben.

Danksagungen

Diese Arbeit wurde unterstützt durch die Finanzierung von CDC/NIOSH High Plains Intermountain Center für landwirtschaftliche Gesundheit und Sicherheit (5U54OH008085) und Colorado Bioscience Entdeckung Auswertung Subventionsprogramms (14BGF-16).

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Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
Escherichia coli Bakteriophagen MS2 (ATCC 15597-B1)American Type Culture CollectionATCC 15597-B1
FluMist QuadrivalentAstraZenecaHersteller kontaktierenDie viralen Bestandteile dieses Impfstoffs können sich jährlich ändern
CFX96 Touch Real-Time PCR Detection SystemBio-Rad1855195
Primer und SondenIntegrierte DNA-TechnologienNA
0.2 &Mikro; M SterilfilterNANA
1 L Pyrexflaschen oder gleichwertigNANA
1 mL PipettenspitzenNANA
1 mL PipettiererNANA
50 mL serologische PipetteNANA
PCR-RöhrchenNANA
Pipetenhilfe oder gleichwertigNANA
QIAamp Virale RNA Mini KitQiagen52904
QuantiTect Sonde RT-PCR KitQiagen204443
Amberlite IRA-900 Chlorid FormSigma-Aldrich216585-500G
Phosphatgepufferte KochsalzlösungSigma-AldrichP5368-10PAK
Wasser (molekularbiologische Qualität)Sigma-AldrichW4502-1L
Eppendorf DNA LoBind MikrozentrifugenröhrchenThermoFisher13-698-791
Falcon 50 mL konische Zentrifugenröhrchen ThermoFisher14-432-22
Falcon Zentrifugenröhrchen aus PolypropylenThermoFisher05-538-62
SuperScript III Platinum One-Step qRT-PCR Kit mit ROXThermoFisher11745100
SKC Biosampler 20 mL, 3-teiliges GlassetSKC Inc.225-9593
Vac-u-Go ProbenpumpenSKC Inc.228-9695
Collison Vernebler (6 Düsen)BGI Inc.
HEPA-KapselPALL12144
Q-TRAK Luftqualitätsmonitor für Innenräume 8554TSI Inc.
Alnor Velometer thermisches Anemometer AVM440-ATSI Inc.
SidePak AM510 Persönlicher AerosolmonitorTSI Inc.
Bioaerosol-KammerNANA
NANANANA

Referenzen

  1. Pirtle, E. C., Beran, G. W. Virus survival in the environment. Revue scientifique et technique (International Office of Epizootics). 10 (3), 733-748 (1991).
  2. Nguyen, T. M., et al. A community-wide outbreak of legionnaires disease linked to industrial cooling towers--how far can contaminated aerosols spread? The Journal of Infectious Diseases. 193 (1), 102-111 (2006).
  3. Marks, P. J., et al. Evidence for airborne transmission of Norwalk-like virus (NLV) in a hotel restaurant. Epidemiology and Infection. 124 (3), 481-487 (2000).
  4. Marks, P. J., et al. A school outbreak of Norwalk-like virus: Evidence for airborne transmission. Epidemiology and Infection. 131 (1), 727-736 (2003).
  5. Corzo, C. A., Culhane, M., Dee, S., Morrison, R. B., Torremorell, M. Airborne detection and quantification of swine influenza a virus in air samples collected inside, outside and downwind from swine barns. PLoS One. 8 (8), e71444(2013).
  6. Anderson, B. D., et al. Bioaerosol sampling in modern agriculture: A novel approach for emerging pathogen surveillance. The Journal of Infectious Diseases. 214 (4), 537-545 (2016).
  7. Hietala, S. K., Hullinger, P. J., Crossley, B. M., Kinde, H., Ardans, A. A. Environmental air sampling to detect exotic Newcastle disease virus in two California commercial poultry flocks. Journal of Veterinary Diagnostic Investigation. 17 (2), 198-200 (2005).
  8. Jonges, M., et al. Wind-mediated spread of low-pathogenic avian influenza virus into the environment during outbreaks at commercial poultry farms. PLoS One. 10 (5), e0125401(2015).
  9. Otake, S., Dee, S. A., Jacobson, L., Torremorell, M., Pijoan, C. Evaluation of aerosol transmission of porcine reproductive and respiratory syndrome virus under controlled field conditions. The Veterinary Record. 150 (26), 804-808 (2002).
  10. Wu, Y., et al. Aerosolized avian influenza A (H5N6) virus isolated from a live poultry market, China. The Journal of Infection. 74 (1), 89-91 (2017).
  11. Choi, M. J., et al. Live animal markets in Minnesota: A potential source for emergence of novel influenza A viruses and interspecies transmission. Clinical Infectious Diseases. 61 (9), 1355-1362 (2015).
  12. Haig, C. W., Mackay, W. G., Walker, J. T., Williams, C. Bioaerosol sampling: Sampling mechanisms, bioefficiency and field studies. The Journal of Hospical Infection. 93 (3), 242-255 (2016).
  13. Anderson, B. D., Lednicky, J. A., Torremorell, M., Gray, G. C. The use of bioaerosol aampling for airborne virus surveillance in swine production facilities: A mini review. Frontiers in Veterinary Science. 4, 121(2017).
  14. Verreault, D., Moineau, S., Duchaine, C. Methods for sampling of airborne viruses. Microbiology and Molecular Biology Reviews. 72 (3), 413-444 (2008).
  15. Hogan, C. J. Jr Sampling methodologies and dosage assessment techniques for submicrometre and ultrafine virus aerosol particles. Journal of Applied Microbiology. 99 (6), 1422-1434 (2005).
  16. Yu, K. -P., Chen, Y. -P., Gong, J. -Y., Chen, Y. -C., Cheng, C. -C. Improving the collection efficiency of the liquid impinger for ultrafine particles and viral aerosols by applying granular bed filtration. Journal of Aerosol Science. 101, 133-143 (2016).
  17. Perez-Mendez, A., et al. Evaluation of a simple and cost effective filter paper-based shipping and storage medium for environmental sampling of F-RNA coliphages. J Virol Methods. 194 (1-2), 60-66 (2013).
  18. Chandler, J. C., et al. Field-based evaluation of a male-specific (F+) RNA coliphage concentration method. Journal of Virological Methods. 239, 9-16 (2017).
  19. Perez-Mendez, A., Chandler, J. C., Bisha, B., Goodridge, L. D. Concentration of enteric viruses from tap water using an anion exchange resin-based method. Journal of Virological Methods. 206, 95-98 (2014).
  20. Perez-Mendez, A., Chandler, J. C., Bisha, B., Goodridge, L. D. Evaluation of an anion exchange resin-based method for concentration of F-RNA coliphages (enteric virus indicators) from water samples. Journal of Virological Methods. 204, 109-115 (2014).
  21. Kammerer, J., Carle, R., Kammerer, D. R. Adsorption and ion exchange: Basic principles and their application in food processing. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 59 (1), 22-42 (2011).
  22. Chandler, J. C., et al. A method for the improved detection of aerosolized influenza viruses and the male-specific (F+) RNA coliphage MS2. Journal of Virological Methods. 246, 38-41 (2017).
  23. Friedman, S. D., Cooper, E. M., Calci, K. R., Genthner, F. J. Design and assessment of a real time reverse transcription-PCR method to genotype single-stranded RNA male-specific coliphages (Family Leviviridae). Journal of Virological Methods. 173 (2), 196-202 (2011).
  24. Selvaraju, S. B., Selvarangan, R. Evaluation of three influenza A and B real-time reverse transcription-PCR assays and a new 2009 H1N1 assay for detection of influenza viruses. Journal of Clinical Microbiology. 48 (11), 3870-3875 (2010).
  25. Cademartiri, R., et al. Immobilization of bacteriophages on modified silica particles. Biomaterials. 31 (7), 1904-1910 (2010).
  26. Michen, B., Graule, T. Isoelectric points of viruses. Journal of Appled Microbiology. 109 (2), 388-397 (2010).
  27. Turgeon, N., Toulouse, M. J., Martel, B., Moineau, S., Duchaine, C. Comparison of five bacteriophages as models for viral aerosol studies. Applied and Environmental Microbiology. 80 (14), 4242-4250 (2014).
  28. Vergara, G. G., et al. Evaluation of FRNA coliphages as indicators of human enteric viruses in a tropical urban freshwater catchment. Water Research. 79, 39-47 (2015).
  29. Tung-Thompson, G., Libera, D. A., Koch, K. L., de Los Reyes, F. L. 3rd, Jaykus, L. A. Aerosolization of a human norovirus surrogate, bacteriophage MS2, during simulated vomiting. PLoS One. 10 (8), e0134277(2015).

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