Bau eines vielschichtigen mesenchymale Stammzellen-Blatt mit einem 3D dynamische Kultursystem

Summary

Dieser Artikel bietet eine effiziente und praktikable Methode für den Bau von vielschichtigen Stammzell-Blätter mit günstigen Stammzell-Eigenschaft.

Abstract

Stammzell-Therapie zeigt eine viel versprechende Zukunft bei der Regeneration von verletzten Organ und Gewebe, und die Zelle-Blatt-Technik wurde entwickelt, um die niedrigen Zelle Aufbewahrung und Armen überleben innerhalb der Zielzone zu verbessern. Während des Bauprozesses in Vitro ist eine Lösung für die Aufrechterhaltung der Stammzelle Bioaktivität und Erhöhung der Zelle innerhalb der Zelle Blatt jedoch dringend erforderlich. Dieses Protokoll stellt eine Methode für das Konstruieren einer vielschichtigen Zelle Blatt mit günstigen Stammzellen Bioaktivität und optimale Bedienbarkeit. Decellularized porcinen Perikard (DPP) wird vorbereitet, indem Phospholipase₂ (PLA₂) Decellularization Methode als die Zelle Blatt Gerüst und Ratte Knochenmark mesenchymale Stammzellen (BMSCs) sind isoliert und als die gesetzten Zellen erweitert. Die temporäre vielschichtigen Zellstruktur Blatt mit RAD16 konstruiert ist-ich Peptid Hydrogel. Schließlich Zelle Blatt ist mit einem dynamischen Perfusion System zu stabilisieren die dreidimensionale (3D) Struktur kultiviert, und die Zelle Blatt konnte nach einer 48-Stunden-Kultur in Vitroabgerufen werden. Dieses Protokoll bietet eine effiziente und praktikable Methode für den Bau von einem vielschichtigen Stammzell-Blatt und das Blatt Zelle in der Zukunft als günstige Stammzell-Therapie Produkt entwickelt werden könnte.

Introduction

Stammzell-Therapie als eine wirksame Behandlung für viele Krankheiten berichtet; niedrige Zelle Retention und Armen überleben innerhalb der Zielzone bleiben jedoch kritische Fragen nach der traditionellen Stammzell-Injektion. Um dieses Problem zu lösen, entwickelte Gewebe-engineering-Wissenschaftler die Zelle Blatt Technik. Eine monolayered Zelle Blatt mit intakten extrazelluläre Matrix war zunächst mithilfe der Temperatur-Antwort Kultur Gericht¹vorbereitet, und seine Follow-up Studien berichtet die signifikanten Verbesserungen der Stammzellen Aufbewahrung und Überleben in das infarzierte Bereich^2,

Protocol

Alle Stammzellen und Tierversuch Verfahren wurden nach den ethischen Richtlinien des nationalen Leitfadens für die Pflege und Verwendung von Labortieren durchgeführt und durch die Jinan Universität Animal Care and Use Committee (Guangzhou, China) genehmigt.

1. Vorbereitung des DPP-Gerüst mit PLA₂ Decellularization Methode¹⁴

Hinweis: Siehe Abbildung 1A für eine schematische Darstellung des PLA₂ Decellularization Methode.

1. 100 mL 200 U/mL PLA₂ Lösung vorzubereiten. 0,5 g Natrium-Deoxycholate und 2 mL PLA₂ in 1....

Results

Die schematische Darstellung der vielschichtigen Stammzell-Blatt Bau ist in Abbildung 1dargestellt. Vorbereitung der Zelle Blatt Gerüst von der PLA-₂ -Decellularization-Methode ist der erste Schritt. Basierend auf dem Schafott, entsteht eine temporäre 3D Zellstruktur durch Mischen der Stammzellen mit der RAD16-1-Peptid-Hydrogel. Um ein vielschichtiges Zelle Blatt mit günstigen Stammzellen Bioaktivität und optimale mechanische Festigkeit zu erhalten.......

Discussion

Dieses Protokoll meldet eine effiziente Methode für das Konstruieren einer vielschichtigen MSC-Blatt. Dieses Blatt Zelle weist optimale mechanische Festigkeit, hohe Zelldichte seeding und günstige Stammzellen Bioaktivität. Mit BMSCs als ein Beispiel, die 3D Zellstruktur ist schnell aufgebaut mit RAD16-ich Peptid Hydrogel. Nach in das dynamische Perfusion System kultiviert wird, erhält man das vielschichtige BMSC Blatt erfolgreich und die BMSCs pflegen eine hohe Expression der Stammzell-Marker.

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Phospholipase A2	Sigma-Aldrich	P6534
Natriumdesoxycholat	Sigma-Aldrich	D6750-100G
Phosphatpuffer	Gibco BRL	89033
Penicillin Streptomycin / Amphotericin	Gibco BRL	15640055
Puffer Bikarbonat	Sigma-Aldrich	C3041
Tischkonzentrator	Changzhou Aohua Instrument Co.
Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM)	Corning Cellgro	10-014-CVR
Südamerikanisches fötales Rinderserum	Gibco BRL	10270-106/P30-3302
L-Glutamin	Corning Cellgro	25-005-CI
0,25 % Trypsin/2,21 mM EDTA	Corning Cellgro	25-053-CI
Biosicherheitswerkbank	Esco,Singapur	AC2-2S1
Inkubator mit konstanter Temperatur	Esco, Singapur	CLS-170B-8
Zentrifugenröhrchen	Corning	430790
EP Röhrchen	Axygen	31617934
Zentrifugalmaschine	TOMOS	1-16R
Saccharose	Sigma-Aldrich	S9378-500G
Pura Matrix	BD	354250
Dynamisches Perfusionskultursystem	Minucells und Minutissue	D-93077
Schlauchpumpe	Ismatec	IPC N8
Pumpenschlauch	Ismatec	Nr.1306
MINUSHEET 1300		Regensburger	Gewebeträgerkomponenten
MINUSHEET	Regensburg		dynamisches Perfusionssystem
MINUSHEET 0006	Regensburg		Gasaustauschausrüstung
MINUSHEET 0002	Regensburg		500 mL Glasflasche
MINUSHEET 1301			Behälter für Perfusionskultur