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Methodenartikel

Neuartiges Verfahren für den 3D-Druck Decellularized Matrizen

6.8K Aufrufe

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DOI:

10.3791/58720

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7. Januar 2019

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In diesem Artikel

Zusammenfassung

Dieses Protokoll beschreibt die Herstellung von Polycaprolactons (PCL) Filament mit eingebetteten Polymilchsäure (PLA) Säure Mikrosphären die decellularized Matrizen (DM) für den 3D-Druck von strukturellen Gewebetechnik Konstrukte enthalten.

Zusammenfassung

3D Bioprinting zielt darauf ab, eigene Gerüste zu schaffen, die sind biologisch aktiv und Platz für die gewünschte Größe und Geometrie. Ein thermoplastischer Backbone kann mechanischen Stabilität ähnlich wie bei nativen Gewebe bereitzustellen, während biologische Agenten kompositorischen Signale zu Vorläuferzellen, bieten ihre Migration, Proliferation und Differenzierung, das ursprüngliche Gewebe wiederherzustellen / Organe,1,2. Leider sind viele 3D Druck kompatibel, resorbierbaren Polymeren (z. B. Polymilchsäure PLA) gedruckten bei einer Temperatur von 210 ° C oder höher - Temperaturen, sind schädlich für Biologics. Auf der anderen Seite ist Polycaprolactons (PCL), eine andere Art von Polyester, eine bioresorbierbare, 3D druckbare Material, das eine sanftere Druck Temperatur von 65 ° C. Es wurde daher vermutet, dass decellularized extrazelluläre Matrix (DM) enthaltenen thermisch Schutzwall PLA konnte innerhalb von PCL Filament gedruckt werden und bleiben in seine funktionelle Konformation. In dieser Arbeit war osteochondrale Reparatur der Anwendung, für die die Hypothese getestet wurde. Als solche war porcinen Knorpel decellularized und gekapselt in sauren Polymilchsäure (PLA) Mikrosphären, die dann mit Polycaprolactons (PCL) extrudiert wurden in Filament, 3D Konstrukte über fused Deposition Modellierung zu produzieren. Die Konstrukte mit oder ohne die Mikrosphären (PLA-DM/PCL und PCL(-), beziehungsweise) wurden für unterschiedliche Oberflächeneigenschaften ausgewertet.

Einleitung

Aktuelle Gewebe-engineering-Techniken für klinische Anwendungen wie Knochen, Knorpel, Sehnen und Bänder Wiederaufbau verwenden Sie Auto und Allografts, um geschädigtes Gewebe zu reparieren. Jede dieser Techniken wird routinemäßig als "Goldstandard" in der klinischen Praxis durchgeführt, indem zuerst Ernte Spendergewebe entweder der Patient oder ein cadaveric Spiel, und dann das Spendergewebe in den defekt Seite2. Allerdings sind diese Strategien durch Spender Website Morbidität, Spender Website Knappheit für große Mängel, Risiko von Infektionen und Schwierigkeiten, die Transplantate, die die gewünschte Geometrie entsprechen begrenzt. Darüber hi....

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Protokoll

1. Erhalt und Vorverarbeitung Mikrosphären

  1. Mikrosphären mit dem gewünschten Matrix gekapselt (PLA-DM)2zu produzieren.
    Hinweis: Es ist unerlässlich, dass die Mikrosphären einheitlicher Größe. Aus diesem Grund ist es unerlässlich, Siebung der Mikrosphären vor dem Gebrauch. Obwohl in früheren Publikationen2Matrix Decellularization und Kapselung detaillierte worden, folgt eine kurze Zusammenfassung des Prozesses.
    1. Erstens ernten Sie Knorpel Stecker von porcinen Hinterbeine. Decellularize des Knorpels in einer Reihe von Waschungen mit 0,05 % Trypsin/0,5 mm Tetrasodium Ethylenediaminetetraacetic Acid (EDTA)....

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Ergebnisse

Nach Siebung, sollten Mikrosphären erscheinen einheitlich und frei von Aggregaten. Unter SEM werden die gesiebten Mikrosphären möglicherweise kleine Poren auf der Oberfläche, jedoch ansonsten sphärische und glatt, wie in Abbildung 1dargestellt. Alle extrudierten Filamente sollte der einheitlichen Durchmesser und kreisförmigen Querschnitt. Ein Filament, das Mikrokugeln (PLA-DM/PCL) enthält haben eine etwas mehr Matte während einer PCL-nur zu beenden (PCL(-)) F.......

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Diskussion

Beide decellularized Matrizen und 3D gedruckte PCL Gerüste haben unabhängig voneinander gezeigt worden, um Adhäsion und Proliferation von Zellen, überprüfen ihre Verwendung für osteochondrale10,11,12reparieren lassen. Die Verwendung von decellularized Matrix engineering Ansätze zur Gewebereparatur wurde ein viel Interesse und Erfolg in der jüngsten Vergangenheit2,3,.......

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Offenlegungen

Die Autoren haben nichts preisgeben.

Danksagungen

Dieses Projekt wurde teilweise finanziert durch einen Zuschuss aus der pädiatrischen orthopädischen Gesellschaft von Nordamerika (POSNA) und die National Institutes of Health NIBIB R21EB025378-01 (explorative Bioengineering Research Grant) zu gewähren.

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Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
SiebmaschineHaver & Boecker TylerRo-Tap RX 29-E Pure
Sieve 90 umFisherbrand170328156Nr. 170
Sieve 53 umFisherbrand162513588No. 270
Sieve 106 umFisherbrand162018121No. 140
Sputter CoaterLeican/a
RasterelektronenmikroskopHitachi, USAn/a
Filabot EX2Filabot.comFB00061
Filabot SpoolerFilabot.comFB00073
CAPA 6506Perstorp24980-41-4
Phosphatgepufferte Kochsalzlösung, PBSGibco10010023
6" FanComfort Zone, Amazonn/a
Ultraschall WasserbadCole ParmerSK-08895-13
DreamerFlashForgen/a
Drum MixerCustommade n/aÄhnliches Gerät: https://www.coleparmer.com/i/argos-technologies-flexiroll-digital-tube-roller-shaker-120-vac/0439744?PubID=UX&persist=true&ip=
no& gclid=CjwKCAjw-
dXaBRAEEiwAbwCi5khGDMz0
dTjsraEsBGfhMEH7ytx
LQWGUPNgUJYQ1p3vj_yxkYoI_
ixoC9GwQAvD_BwE
MikrowaageMettler Toledo, Fisher Scientific01-913-851
Simplify3DSimplify3Dn/a
SolidWorksSolidWorksn/a
MikrokugelnEigenproduziert, siehe gleichzeitig eingereicht JoVE Einreichung
p-Nitrophenylphosphat, Dinatriumsalz, HexahydratMillipore4876-5GM
Phosphatase, alkalischRoche Diagnostics GmbH10 713 023 001
Absorbance ReaderTecanSunrise
Tris-HCl PufferSigma-AldrichT6455-100ML
Beheizter ShakerNeu Brunswick ScientificExcella E24

Referenzen

  1. Hutchmaker, D., Teoh, S., Zein, I., Ng, K. W., Schantz, J. -T., Leahy, J. C. Design and Fabrication of a 3D Scaffold for Tissue Engineering Bone. Synthetic Bioabsorbable Polymers and Implants. 15 (2), 845-847 (1988).
  2. Ghosh, P., Gruber, S. M. S., Lin, C. -Y., Whitlock, P. Microspheres containing decellularized cartilage induce chondrogenesis and remain functional after incorporation within a poly(caprolactone) filament useful for fabricating a 3D scaffold. Biofabrication. , (201....

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Nachdrucke und Genehmigungen

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