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Methodenartikel

Eine Anastomose Magenbypass (OAGB) bei Ratten

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DOI:

10.3791/58776

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10. November 2018

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1Institut national de la santé et de la recherche médicale (Inserm) unité mixte de recherche (UMR) 1149, Unité de formation et de recherche (UFR) de Médecine Paris Diderot, Universit é Paris Diderot, Assistance Publique-Hôpitaux de Paris (AP-HP), 2Department of digestive Surgery, AP-HP Hôpital Européen Georges Pompidou, 3Department of General and Visceral Surgery, Bichat-Claude Bernard University Hospital

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Dieses Protokoll ist für die Erfüllung einer Anastomose Magenbypass (OAGB) auf Ratte. Der Operator führt einen langen, röhrenförmigen geheftet Magen Beutel gefolgt von handgenähter Anastomose. Für dieses Modell reproduziert der Betreiber das gleiche Verhältnis zwischen biliopankreatischen und gemeinsame Gliedmaßen beim Menschen; Daher misst die Biliopancreatic Limb 35 cm.

Zusammenfassung

Das Ziel dieses Protokolls ist ein präklinischen Modell der Adipositaschirurgie und, genauer gesagt OAGB bei fettleibigen Ratten eingerichtet. Ausgehend von diesem präklinischen Modell, können Längsschnittstudien erfolgen ermöglichen ein besseres Verständnis der Mechanismen, die die Ergebnisse nach bariatrischer Chirurgie beim Menschen gesehen. Zu diesem Zweck sind Ratten durch eine Laparotomie unter allgemeiner Anästhesie mit Isofluran operiert. Erstens schafft der Chirurg einen langen und schlauchförmigen Magen Beutel: nach größere Kurve und hiatal Dissektion, nonglandular Magen geheftet und entfernt. Dann wird der restliche Magen auch geheftet, um eine Magensonde zu schaffen und das Antrum des Magens auszuschließen. Danach führt der Chirurg eine einzige End-to-Side-Gastrojejunostomy 35 cm aus dem Duodenojejunal Winkel. Diese Gliedmaßen Länge wurde gewählt, um das gleiche Verhältnis zwischen der Biliopancreatic Limb (BPL) und gemeinsame Gliedmaßen (CL) Länge wie in menschlichen Adipositaschirurgie zu reproduzieren. Die Operation endet durch aponeurotic und kutanen Schließung. Die frühe postoperative Betreuung besteht aus subkutane Flüssigkeitszufuhr, eine intramuskuläre prophylaktische Antibiotika-Injektion, einen parietalen Injektion von Xylocain, die Gabe von Schmerzmitteln und eine progressive Wiedereinführung der Ernährung.

Einleitung

Morbider Adipositas ist ein großes gesundheitliches Problem in der westlichen Welt, mit zunehmender Prävalenz1. Bariatric Chirurgie bleibt die einzige langfristige effektive Therapie für morbide Adipositas2, mit klaren Vorteilen für Adipositas Folgeerkrankungen3. Roux-En-Y Magen-bypass (RYGB) bleibt der Goldstandard wie ist eines der ältesten Verfahren und eines der meistgespielten weltweit mit der längsten Follow-up-4. OAGB ist eine neuere Verfahren erstmals im Jahr 2001 von Rutledge5beschrieben. Es ist beschrieben worden als eine effektive Alternative zu RYGB6 und hat einige Vorteile. Erste Daten zeigt eine ähnliche Wirksamkeit zu RYGB in Bezug auf Gewichtsverlust und die Auflösung von Komorbiditäten Adipositas6,7. Darüber hinaus das Risiko von Stenose oder Auslaufen des Jejunojejunal Anastomose in RYGB vermieden und das Risiko von einer inneren Hernien kann niedriger sein als mit RYGB8.

Die physiologischen Mechanismen Gewichtsverlust nach bariatrischer Chirurgie bleiben umstritten und können schwierig sein, in Menschen9zu studieren. Tiermodelle sind nützlich, zu verstehen wie bariatrische Operationen kann Glukose-Stoffwechsel, neuroendokrinen Veränderungen oder Sättigungsgefühl Mechanismen auswirken. Vergleichsdaten zwischen Verfahren fehlen und langfristige Auswirkungen dieser Operationen besser verstanden10sein müssen. Es ist nicht möglich, Prä- und postoperativ klinische Versorgung vollständig zu standardisieren und zufriedenstellende Follow-up kann nur schwer zu erreichen sein: einige Studien Bericht Verlust-zu-Follow-Up Preise so hoch wie 30 % für das erste Jahr11.

Das Konzept der Magen-Bypass ist eine Kombination aus ein restriktives Verfahren, durch die Schaffung eines Magen-Beutels und ein gewisses Maß an Malabsorption, infolge des Ausschluss von das Duodenum und proximalen Jejunum aus dem Magen-Darm-Transit. Extremität Länge in der bariatrischen Chirurgie ist derzeit noch eine Angelegenheit der Debatte12,13. Verfügbare Daten zeigen eine hohe Variabilität der Verfahren und keinen Konsens noch auf die optimale Gliedmaßen Länge für OAGB14,15erreicht ist. Dennoch haben viele Autoren eine Länge von 200 cm BPL als Standard für OAGB16,17,18berichtet. Die mittlere Länge des Dünndarms ist etwa 700 cm19.

Einige Nager-Modelle von RYGB wurden weltweit20, mit großen Schwankungen in Bezug auf Beutel Größe, Länge der Gliedmaßen und die Erhaltung der Vagusnerv entwickelt. Aber sehr wenige Autoren berichteten ein Modell des experimentellen OAGB; aus diesem Grund entwickelte Theresearch Team ein Modell der OAGB in Zusammenarbeit mit bariatrischen Chirurgen. Die Beweggründe für die Entwicklung des Modells war, Magen-Bypass praktiziert beim Menschen zu imitieren. Das Modell beinhaltet den Bau eines Magen-Beutels mit Ausnahme von dem Antrum und dem Körper des Magens. Dafür macht der Chirurg eine Ablation des nonglandular Magens mit einem Heftkopf Gerät. Im Vergleich zu vorherigen Protokoll20, verknüpft das Team beschloss, eine pro-Operative antibiotische Prophylaxe hinzufügen, um die Morbidität zu verringern, Magen-Darm-Anastomose als Routine in menschliche Chirurgie21ist.

Die Ratte Gliedmaßen Länge verwendet in diesem Modell wurde gewählt, um das Verhältnis zwischen der BPL und CL beim Menschen zu reproduzieren. Vorläufige Messungen haben die gesamten Dünndarm Länge bei Ratten zwischen 90 und 120 cm22gezeigt. Infolgedessen war die Länge der BPL gewählt für OAGB 35 cm. Darüber hinaus ist dieses Modell ohne jede vaskulären Ligation, Vermeidung von Magen-Beutel Ischämie praktikabel.

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Protokoll

Alle Tierversuche gemäß den Leitlinien der Europäischen Gemeinschaft und von der lokalen Ethikkommission genehmigt wurde (Comité d'Éthique de Expérimentation Animale N ° 121) und das Ministerium für Hochschulbildung und Forschung (Ref #02285.03).

(1) Tiere und Diäten

  1. Ratten
    1. Verwenden Sie männliche Wistar-Ratten mit einem Gewicht von 260-320 g, begann auf eine fettreiche Diät (HFD) im Alter von 7 Wochen.
  2. Ernährung
    1. Eine Diät-induzierten Adipositas mit mindestens 12 Wochen präoperativ die HFD zu induzieren. Geben Sie die Ratten freien Zugang zu Wasser und die HFD.
      Hinweis: Die HFD besteht aus einer gereinigten Labor Hypercaloric Nagetier Diät, 45 % Fett (siehe Tabelle der Materialien).
    2. Sicherstellen Sie, dass die Ratten zum Zeitpunkt der Operation, mit einem Gewicht zwischen 600-800 Gramm übergewichtig sind.

2. material

  1. Chirurgische Geräte
    1. Autoklav alle chirurgischen Instrumente vor der Operation.
    2. Legen Sie alle chirurgischen Instrumente, die für das Verfahren benötigt (siehe Tabelle der Materialien).
    3. Durchführen Sie die Anastomose unter Lupen, mit konventionellen und mikrochirurgischen Instrumenten.
    4. Stellen Sie sicher, dass die Ratten auf die Warmhalteplatte bei einer Temperatur von 37 ° C und unter einer Wärmelampe positioniert sind. Positionieren der isothermen Schalttafel nach Bedarf.
  2. Anästhesie und Tier Vorbereitung
    1. Die Ratte mit einer Inhalation von 3 % Vol Isofluran in Luft für die Induktion der Anästhesie im Feld Nagetier zu betäuben.
    2. Übertragen Sie die Ratte auf die Warmhalteplatte und Aufrechterhaltung der Narkose mit der Gesichtsmaske mit der gleichen Flow Rate von 3 %. Sicherzustellen Sie, daß die Anesthetization vollständig durch den Schweif des Tieres zu kneifen.
    3. Rasieren der vordere Fell, entsprechend der Laparotomie Schnitt Zone, einem ~ 3 cm-breite Zone von dem Xiphoid bis das Tier Becken, mit einen elektrischen Rasierapparat.
    4. Eine 3 cm breite Zone auf dem Rücken des Tieres, zentriert auf den Hals des Tieres zu rasieren. Dieser Schritt erleichtert die monopolare macht Wärmeleitung.
    5. Der Einsatzort besprühen Sie eines alkoholhaltigen Desinfektionsmittel.

(3) Chirurgie

  1. Laparotomie
    1. Alkohol-basierten lokalen Antiseptikum auf die rasierte Haut auftragen.
    2. Öffnen Sie den Bauch mit einer Mittellinie kutanen Schnitt aus dem Xiphoid-Prozess von ca. 3 cm in der Länge mit einem Skalpell. Öffnen Sie die Faszie und das Bauchfell entlang der Linea Alba mit einem einpoligen Skalpell.
    3. Sicherstellen Sie, dass die Bauchhöhle auf der gesamten Länge der kutanen Einschnitt geöffnet wird.
      Aussetzen der Bauchhöhle mit einem selbständigen Aufrollvorrichtung.
  2. Größere Kurve und hiatal Dissektion
    1. Die größere Magen-Kurve aus der Kreuzung zwischen der Drüsen- und nonglandular Magen auf die linke Seite des abdominalen Ösophagus mit Chirurgische Scheren zu sezieren.
    2. Schrittweise gerinnen die Gastrosplenic Gefäße mit dem monopolaren Skalpell, um vollständig zu befreien, die große Magen-Kurve, um seine Winkel. Dann setzen Sie die hiatal Bereich durch Schneiden von dünnen Bändern.
    3. Der rechten Seite des abdominalen Ösophagus, Erhaltung der linken gastrische Arterie und Vagusnerv, mit einer manuellen Sezierer zu sezieren.
  3. Magen-Beutel Konfektion
    1. Nonglandular Magen-ablation
      1. Eine 35 mm-Grundnahrungsmittel gelten Pistole (siehe Tabelle der Materialien), an der Kreuzung zwischen der Drüsen- und nonglandular Magen auf die linke Seite des gastroösophagealen Übergangs. Sicherstellen Sie, dass der nonglandular Magen auf der rechten Seite des Hefters ist.
      2. Abfeuern der Waffe und entfernen Sie dann den resezierten nonglandular Magen.
    2. Magen-Beutel
      1. Einen zweite Hefter mit einem dabehalten-Bauch (TA) Gerät (3-3,5 mm) gelten (siehe Tabelle der Materialien), Parallel zu den ersten Heften, auf der rechten Seite des gastroösophagealen Übergangs, das Antrum und ein Teil des Körpers des Magens auszuschließen.
      2. Stellen Sie sicher, dass das Ergebnis der beiden Grundnahrungsmittel Linien einen Magenbypass Beutel ca. 0,5 cm breit.
  4. OAGB
    1. Dünndarm-Messung
      1. Suchen Sie die Duodenojejunal Winkel. Die proximalen Jejunum ist der Dünndarm Teil befindet sich unter den medialen Teil des Dickdarms; Es ist nicht nur mobile Teil des Dünndarms bei der Ratte.
      2. Mit einem 5 cm langen Band manuell messen Sie 35 cm von der Duodenojejunal Winkel. Führen Sie dann eine punktförmige Enterotomy auf der antimesenteric Seite des das Jejunum.
    2. Gastrojejunal Anastomose
      1. Durchführen Sie einer punktförmigen Gastrotomy mit dem monopolaren Skalpell auf größere Kurve der Magen Beutel, genau zwischen den beiden früheren Heften Sie Linien. Wenn der Magen-Beutel ist nicht völlig leer, sanften manuellen Druck auf dem Magen Beutel entleeren durchführen.
      2. Führen Sie eine End-to-Side Gastrojejunal Anastomose mit nichttraumatischen Zange und eine kleine Nadelhalter.
      3. Starten Sie die Naht mit zwei Stichen der Extremität von 7-0 isotaktischen Polypropylen (siehe Tabelle der Materialien), die beiden Enden der Gastrotomy mit den Enden der Enterotomy nähen.
      4. Führen Sie dann mit der gleichen Threads verwendet für die beiden Extremitäten Stiche, zwei ausgeführten Nähte auf jeder Seite die Anastomose. Bei Bedarf zurück die Anastomose um das Manöver zu erleichtern. Stellen Sie sicher, die Qualität der Anastomose indem man enge Stiche mindestens sieben oder acht auf jeder Seite die Anastomose.
      5. Jeder Stich beteiligen Sie 1 mm breiten Darmhaut. Vermeiden Sie Schleimhaut im Stich, um sanft die magensaftresistente und Magen-Schleimhaut im Inneren des Nahtmaterials begraben.
        Hinweis: Die Folge davon ist ein Terminolateral Gastrojejunal Anastomose mit einer biliopankreatischen Glied auf der linken Seite und eine nährende (AL) /CL auf der rechten Seite. Sicherstellen Sie, dass die Anastomose mit sanftem Druck auf dem Magen Beutel durchlässig ist.
  5. Schließung und sofortige Versorgung
    1. Die Bauchhöhle mit 0,9 % NaCl-Lösung spülen und Bauchorgane in ihre physiologische Position manuell zu ersetzen.
    2. Nahe die Bauchdecke mit einem laufenden Naht der geflochten Polyester Naht 2-0 (siehe Tabelle der Materialien) mit einem klassischen Nadelhalter.
    3. Schließen Sie die Haut mit einem laufenden Naht Polyglactin 910 4-0 (siehe Tabelle der Materialien).
    4. Führen Sie zwei parietalen Injektionen von Lidocain 1 % auf jeder Seite der Laparotomie. Verwalten Sie eine Gesamtdosis von 1 mL/kg Lidocain 1 % in der Rectus Bauchmuskel Aponeurose.

4. postoperative Pflege

  1. Führen Sie eine intramuskuläre Injektion von 20.000 Einheiten/kg Penicillin G.
  2. Führen Sie eine subkutane Injektion von 10 mL isotonische Polyionic Lösung Kalium (2 g KCl/L, 4 g NaCl/L und 50 g Glukose/L). In diese Injektion ist es möglich, mit geeigneten Schmerzmitteln wie Buprenorphin (0,1 mg/kg) und Meloxicam (2 mg/kg) zu mischen.
  3. Legen Sie die Ratten in einzelne Käfige, die von einer Lampe erwärmt, bis sie vollständig wach sind.
  4. Prüfen Sie häufig die Tiere um postoperative Behandlung mit geeigneten Analgesie und Flüssigkeitszufuhr (isotonische Polyionic Lösung) zu verwalten.
  5. Geeignete Schmerzmittel Spritzen, Buprenorphin (0,1 mg/kg) und Meloxicam (2 mg/kg), subkutan aus der unmittelbaren postoperativen Zeitraum bis Tag 4, alle 12 h.
  6. Halten Sie die Ratten mit freiem Zugang zu Wasser tagsüber 1. Am Tag 2/3, geben ihnen freien Zugang zu eine flüssige Diät. Am 4. Tag Ihnen Sie Ad Libitum Zugang zu einer normalen Ernährung.

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Ergebnisse

Dieses Protokoll ist reproduzierbar und OAGB imitiert, wie am Menschen geübt. Die Sicherheit dieses Protokolls wird mit veröffentlichten Daten23,24 mit einer geringen Sterblichkeitsrate zwischen 12 % und 25 % unterstützt. Verschiedene Chirurgen in das Forschungsteam mit einer ähnlichen Sterblichkeitsrate haben dieses Protokoll praktiziert.

Trotzdem lernen Nagetier Chirur...

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Diskussion

Dieses Protokoll hat den Vorteil der Nachahmung OAGB routinemäßig in Menschen praktiziert. Seine Sicherheit und Reproduzierbarkeit bei Ratten wurden in klinischen und metabolische Ergebnisse nachgewiesen.

Die Anastomose in diesem Protokoll stellt eine technische Schwierigkeit und ist der wichtigste kritische Schritt. Hierzu ist es notwendig, spezielle mikrochirurgische Werkzeuge, wie eine Mikrochirurgie Nadelhalter oder Lupen zu verwenden. Um eine hermetische Anastomose ohne jede Stenose zu re...

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Offenlegungen

Die Autoren haben nichts preisgeben.

Danksagungen

Die Autoren möchten Jean Pierre Marmuse für seine ständige Hilfe und Unterstützung zu danken; Eglantine Voitellier, Jean-Baptiste Cavin und Houneyda El Jindi für den Aufbau der Modelle und Abbildungen; Anne-Charlotte Jarry und Andreia Goncalves für ihre Hilfe mit den Videos; Sara J. Zaat für die Bearbeitung des Textes in englischer Sprache. Matthieu A. Siebert und Lara Ribeiro-Parenti waren Empfänger von Patenschaften von der Fondation pour la Recherche Médicale (FRM) und der Association Française de Chirurgie (AFC).

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Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
Fettreiche Ernährung, 45 % FettGenestil, Royaucourt, FrankreichC 1090-45http://www.genestil.com/
Metzenbaum ScissorsWorld Precision Instrument, Sarasota, USA501739https://www.wpi-europe.com
Dumont PinzetteWorld Precision Instrument, Sarasota, US14098https://www.wpi-europe.com
Iris PinzetteWorld Precision Instrument, Sarasota, US15915https://www.wpi-europe.com
Iris Schere 10cmWorld Precision Instrument, Sarasota, US14218https://www.wpi-europe.com
NadelhalterWorld Precision Instrument, Sarasota, US14110https://www.wpi-europe.com
Alm Self Keeping RetractorWorld Precision Instrument, Sarasota, US14240https://www.wpi-europe.com
Baby Mixter Hämostatische Pinzette  RechtwinkligesWorld Precision Instrument, Sarasota, USA501240https://www.wpi-europe.com
Vlies-SteriltupferLCH Medical Products, Paris, FrankreichSN40-0755 www.lch-medical.com
Galilean Binokularlupe 2,5xWorld Precision Instrument, Sarasota, US504056 https://www.wpi-europe.com
Verdauungsfaden: Isotaktisches Polypropylen, Monofil Prolene 7-0& nbsp;Ethicon, Issy les  Moulineaux, FrankreichEH7813Ewww.ethicon.com
Parietalgarn : Beschichtetes geflochtenes Polyester Ti-Cron 2-0Covidien, Mannsfield, MA, USA3003-52www.covidien.com
Hautfaden : Polyglactin, VICRYL RAPIDE 4-0 Ethicon, Issy les  Moulineaux, FrankreichVR3100www.ethicon.com
ETS-Flex 35-mm-TackerEthicon, Issy les  Moulineaux, FrankreichATS45www.ethicon.com
Nachladbare HeftgeräteEthicon, Issy les  Moulineaux, FrankreichXR30Vwww.ethicon.com
TA-DST 30mm-3.5mmEthicon, Issy les  Moulineaux, FrankreichTX30Bwww.ethicon.com
Alkoholisch 5% BetadinMEDA Pharma, Merignac, Frankreich41085www.medapharma.fr
LIDOCAIN AGUETTANT 20 mg/mlLABORATOIRE AGUETTANT, Lyon, Frankreich3400940000000,0https://www.aguettant.fr
Penicillin G 5MUIPanpharma, Luitre, Frankreich3.40E+12https://www.panpharma.eu/fr
Bionolyt G5 ; Natriumchlorid 0,4%, Glukose 5%, Kaliumchlorid 0,2%)Baxter, Maurepas, Frankreich
FlüssignahrungGenestil, Royaucourt, FrankreichC-0200Thttp://www.genestil.com/
Isofluran 100%Centravet, Plancoet, FrankreichISO007 http://cooperative.centravet.net

Referenzen

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