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Moxibustionsstrategien für Mäuse

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DOI:

10.3791/63119

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7. Januar 2022

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1Department of Traditional Chinese Medicine, Sichuan Provincial People's Hospital, University of Electronic Science and Technology of China, 2Chinese Academy of Sciences Sichuan Translational Medicine Research Hospital, 3Acupuncture and Tuina School, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, 4Department of Pharmacy Service, Hospital of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, 5Department of Acupuncture, Southwest Medical University Affiliated Traditional Chinese Medicine Hospital, 6Department of Acupuncture, Chongqing Traditional Chinese Medicine Hospital

* These authors contributed equally

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Das vorliegende Protokoll beschreibt eine Moxibustionsmethode für Mäuse, mit dem Vorteil, die Ängstlichkeit der Mäuse zu reduzieren, ihr Wohlergehen zu gewährleisten und die Effizienz für die Forscher zu verbessern.

Zusammenfassung

Das Feld der Moxibustionsforschung expandiert, mit einem rasanten Anstieg der Publikationen in den letzten Jahren. Moxibustion ist eine Therapie, die Moxa auf der Haut des Menschen entzündet, mit einem Anstieg der peripheren Hauttemperatur und einer lokalisierten Rötung. Während dieser Behandlung muss der Empfänger ruhig bleiben, um Verbrühungen zu vermeiden und die Eingriffsstellen für eine einfache Manipulation freizulegen. Die Aufrechterhaltung einer festen Haltung während der Moxibustion ist jedoch eine große Herausforderung für die Tiere. Daher kann die Manipulation der Moxibustion bei kleinen Tieren, wie z. B. Mäusen, zu mehreren Schwierigkeiten für die Forscher führen. Darüber hinaus kann eine unbequeme Haltung der Tiere zu Angst und Widerstand gegen Moxibustion, erhöhtem Verletzungsrisiko, vermindertem Tierwohl und weniger validen Forschungsdaten führen. Eine effiziente, komfortable Moxibustionsmethode ist erforderlich, um das Wohlergehen der Tiere zu schützen und die nachteiligen Auswirkungen auf die Versuchsergebnisse zu minimieren. Moxibustionsmethoden sind jedoch sehr variabel und oft nur begrenzt wirksam. Noch wichtiger ist, dass eine unbequeme Moxibustionshaltung eine Stressreaktion hervorrufen kann, wie sie bei Angst, Furcht und Wut beobachtet wird, was die Forschungsdaten beeinflussen könnte. Daher sind Strategien für die Moxibustion von Tieren erforderlich, die während des Eingriffs den geringstmöglichen Schaden anrichten. Dieses Protokoll führt eine Maus-Tethering-Methode für Moxibustionsinterventionen ein, die das Unbehagen der Maus minimiert und die Studieneffizienz verbessert. Wesentliche Strategien für das Tethering von Mäusen und die Anwendung von Moxibustion werden hervorgehoben und die Struktur des Tethering-Instruments beschrieben.

Einleitung

Moxibustion ist eine äußere Behandlung, die in dertraditionellen chinesischen Medizin 1 angewendet wird. Es wird seit Jahrhunderten häufig eingesetzt, um sich fit zu halten und Krankheiten vorzubeugen und zu heilen 2,3. Der Mechanismus der Moxibustion muss jedoch noch aufgeklärt werden; So hat sich dieses Forschungsfeld in den letzten Jahren erweitert, da Forscher seine Wirkungen und biologischen Mechanismen erforschen.

Während der Moxibustion muss der Empfänger ruhig bleiben, um die besten Ergebnisse zu erzielen4. Die Moxibustionsbehandlung dauert in der Regel 15-30 Minuten 5,6. Aus diesem Grund ist die Manipulation der Moxibustion für Tiere, insbesondere für Kleintiere wie Mäuse und Ratten (günstig für den Einsatz in Tierversuchen), zu einer großen Herausforderung für die Forscher geworden. Die meisten Moxibustionsgeräte sind für den klinischen Einsatz geeignet und können nicht bei Tieren verwendet werden, insbesondere nicht bei Kleintieren wie Mäusen 7,8,9. Außerdem können Tiere im Gegensatz zu Menschen kaum Befehlen folgen und über eine Weile ruhig bleiben. Eine feste und unbequeme Haltung bei Tieren kann zu passiven Emotionen wie Angst, Furcht, Wut, Nervosität und Widerstand gegen die Behandlung führen, was das Verletzungsrisiko erhöht, das Wohlergehen der Tiere verringert und zu weniger validen Forschungsdaten führt10. Um dieses Problem zu lösen, wurden in früheren Studien Anästhetika über längere Zeiträume in Tierversuchen mit externen Therapien der traditionellen chinesischen Medizin angewendet, einschließlich Akupunktur, Moxibustion und Massageforschung 11,12,13. Angesichts der Tatsache, dass sich die körperlichen Bedingungen mit der Anästhesie ändern und in den meisten klinischen Fällen Moxibustion an Menschen in bewussten Zuständen verabreicht wird, kann die Anästhesie die Authentizität der Forschungsdaten beeinträchtigen. Daher wird eine Methode, Tiere bewusst und komfortabel anzubinden, zu einer Herausforderung. Um diese technischen Probleme zu lösen, wurden spezielle Geräte für die Moxibustion von Mäusen eingeführt. Dieses Protokoll bietet eine Anbindemethode, die Forscher bei der Durchführung einer Moxibustionsbehandlung an Tieren unterstützt, so dass die Tiere ruhig, bei Bewusstsein und bequem bleiben.

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Protokoll

Alle Versuche wurden gemäß dem National Institutes of Health Guide for the Care and Use of Laboratory Animals durchgeführt und vom Institutional Animal Care and Use Committee der Chengdu University of TCM genehmigt. Die Pflege und Wartung der Tiere im Labor erfolgte in Anlehnung an die Referenzen14,15. Für den Test wurden adulte männliche C57BL/6J-Mäuse mit einem Gewicht von 20-25 g verwendet. Alle Mäuse wurden in einem 12-stündigen Hell-Dunkel-Zyklus bei 24 °C und 40%-50% Luftfeuchtigkeit gehalten, mit freiem Zugang zu Futter und Wasser. Das folgende Protokoll zeigt die Moxibustionsverfahren unter typischen Laborhaltungsbedingungen.

1. Vorbereitung der Ausrüstung

  1. Maus-Tethering
    1. Bereiten Sie ein Maus-Tethering-Gerät vor, das aus einer vertikalen Platte, einem vertikalen Plattenfuß und Halterungen aus Holz besteht.
      1. Konstruieren Sie den festen Körper mit einer geraden Holzschiene (Länge: 30 cm x Breite: 3 cm x Höhe: 3 cm) und befestigen Sie den festen Klettband (der aus zwei Seiten besteht: einer Hakenseite (4 cm x 3 cm) und einer Schlaufenseite (10 cm x 3 cm)), um das Anbinden des Mauskörpers unter Beibehaltung der Flexibilität zu ermöglichen (siehe Materialtabelle).
      2. Befestige die Hakenseite mit einer Klebepistole auf der rechten Seite der Holzschiene und befestige eine 1/4 Länge der Schlaufenseite auf der linken Seite.
    2. Platzieren Sie die Maus auf dem festen Bett und binden Sie den Oberkörper der Maus mit dem festen Klettverschluss fest.
      HINWEIS: Stellen Sie sicher, dass der Anbindegurt nicht eng genug ist, um Druck auf das Herz auszuüben, der zum Tod der Maus führen kann. Binden Sie die Maus locker, aber fest an.
    3. Befestigen Sie die unteren/oberen Gliedmaßen mit Klebeband an beiden Seiten der Holzschiene und befestigen Sie den Schwanz an der Oberfläche der Holzschiene.
  2. Vorbereitung des Mausbett-Racks
    HINWEIS: Das Gestell besteht aus einer vertikalen Holzplatte, einer Holzgrundplatte und Holzhalterungen. Die Halterung besteht aus einem L-förmigen Stück Edelstahl, das jedem Mausbett Halt gibt.
    1. Befestigen Sie die vertikale Platte an der Grundplatte und erstellen Sie quadratische Rillen in der Grundplatte, um Holzstäbe einzusetzen, die als Leitbleche verwendet werden (Abbildung 1).
    2. Bereiten Sie eine transparente Kopfabdeckung aus Kunststoff vor, wenn den Mäusen Moxibustion über dem Kopf verabreicht wird.
      1. Verwenden Sie eine 1000-ml-Spritze und entfernen Sie die Nadel und den Kernstab. Schneiden Sie den Spritzenmantel mit einem Schneidwerkzeug oder Messer in zwei Hälften.
      2. Wählen Sie eine der beiden Seiten des Spritzenmantels, schneiden Sie Kopf und Schwanz ab und legen Sie den Mittelteil (Länge: 4 cm) als Kopfabdeckung für die Maus beiseite.
      3. Bohren Sie mit einer Bohrmaschine ein Loch (1 cm) in die Mitte des Spritzenmantels und setzen Sie einen Moxa-Stab in das Loch ein. Platzieren Sie eine Kopfbedeckung über dem Kopf der Maus, um die Kopfbewegung zu begrenzen und sie vor dem entzündeten Moxa zu schützen.
    3. Befestigen Sie zwei parallele Holzleisten (Länge: 7 cm x Breite: 1 cm) und ein horizontales Querstück (Länge: 7,5 cm x Breite: 1 cm) am Kopfende des Mausbettes, wenn Mäusen Moxibustion an den Vordergliedmaßen verabreicht wird (Abbildung 2).
      HINWEIS: Der Abstand zwischen jeder parallelen Holzleiste und dem Mausbett sollte 1 cm betragen. Die Anzahl der Halterungen und die Höhe der vertikalen Platten können auf der Grundlage der experimentellen Anforderungen bestimmt werden. Diese Schritte sollten vorsichtig durchgeführt werden, um die Mäuse nicht zu erschrecken. Stellen Sie sicher, dass Sie den Mäusen 1 Woche vor dem Experiment ein adaptives Training geben.
  3. Vorbereitung des Moxibustion-Stickhalters
    1. Bereiten Sie den Moxibustion-Stickhalter vor, bestehend aus einem magnetischen Metallrechteck (Länge: 30 cm), einem Bügelfuß (Länge: 5 cm x Breite: 5 cm x Höhe: 2 cm) und Holzwürfeln (Länge: 3 cm x Breite: 1,5 cm x Höhe: 1 cm), jeweils mit einem Loch (Durchmesser: 0,55 cm) in der Mitte, in das ein Moxa-Stick gesteckt werden kann (siehe Materialtabelle).
    2. Befestigen Sie einen flachen, dünnen Magneten (Länge: 3 cm × Breite: 1,5 cm, Dicke: 0,2 cm) an einer Seite jedes Würfels. Die magnetische Anziehungskraft zwischen den Würfeln mit Moxa-Sticks und dem Halter ermöglicht es, die Höhe der Moxa-Sticks einzustellen.
      HINWEIS: Stellen Sie sicher, dass sich die magnetischen Pole der Würfelmagnete gegenüber dem Pol des Haltermagneten befinden.
  4. Um den Beginn und das Ende des Moxibustionsvorgangs aufzuzeichnen, platzieren Sie ein Zeitmessgerät (siehe Materialtabelle) in der Nähe des Maus-Tethering-Geräts, wo es leicht abgelesen werden kann.
  5. Verwenden Sie eine bloße oder dünn behandschuhte Hand, wenn Sie die Mäuse halten und anbinden. Eine dünn behandschuhte Hand ist auch während der Moxibustion-Behandlung wirksam.

2. Moxibustion-Verfahren

  1. Ziehen Sie die Laborhandschuhe an. Rasieren Sie vor der Moxibustionsbehandlung das Fell mit einem Mausrasierer an der Moxibustionsstelle, um den Akupunkturpunkt freizulegen.
  2. Setzen Sie Moxa-Sticks (0,5 cm Durchmesser und 10 cm Länge) in den Moxibustion-Stickhalter ein (der aus dem magnetischen Metallrechteck, dem Halterungsfuß und Holzwürfeln mit Löchern in der Mitte zum Einführen des Moxa-Sticks besteht, und ein Stickhalter kann nur einen Moxa-Stick aufnehmen, Schritt 1.3).
  3. Um die Moxibustionstemperatur zu ermitteln, befestigen Sie einen digitalen Thermodetektor am Akupunkturpunkt, um die Temperaturschwankungen zu überwachen.
  4. Starten Sie den Timer und zünden Sie den Moxa-Stick; Fixieren oder kontrollieren Sie den Abstand zwischen der Haut des Akupunkturpunkts und dem beleuchteten Ende des Moxa-Sticks in Abhängigkeit von der für das Experiment erforderlichen Temperaturschwankung.

3. Gleichzeitige Moxibustion der Maus

HINWEIS: Mäuse können als Gruppe mit Moxibustion behandelt werden. Ein Mausbettgestell wird verwendet, um die Mäusebetten so zu positionieren, dass eine Gruppe von Mäusen gleichzeitig behandelt werden kann.

  1. Stellen Sie jedes Mausbett auf das Gestell und stecken Sie ein Holzstäbchen in die Bodenplatte, um die Mäuse vor dem Herunterfallen zu schützen (Abbildung 3).
  2. Setzen Sie Moxa-Sticks (0,5 cm Durchmesser und 12 cm Länge) in den Moxibustion-Stick-Halter ein, und zwar in einer Höhe, die mit dem jeweiligen Mausbett übereinstimmt. Stellen Sie den Abstand zwischen dem Mausgestell und dem Stickhalter ein und zünden Sie dann die Moxa-Sticks an.
    HINWEIS: Dadurch können die Mäuse in einem entspannten, komfortablen Zustand mit Moxibustion behandelt werden. Achten Sie während der Moxibustion darauf, dass der Abstand zwischen Mausablage und Stickhalter bei allen Mäusen gleich bleibt.
  3. Führen Sie vor der Modellierung die Reaktionen der Maus auf den TWL-Test (Thermal Withdrawal Threshold) durch, um zu bestimmen, ob Moxibustion bei Analgesie wirksam wäre.

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Ergebnisse

Tabelle 1 fasst die verschiedenen Faktoren zusammen, die die Reaktionen auf Moxibustion beeinflussen. Positive Ergebnisse der Moxibustion bei Mäusen wurden durch mehrere Messungen des Wohlergehens der Maus und positive Effekte angezeigt.

Als nächstes werden spezifische Beispiele für Ergebnisse skizziert, die erzielt werden, wenn die Moxibustionstechnik mit vollständigen Freund-Adjuvans-induzierten (CFA)-induzierten Injektionsverfahren kombiniert wird. Der TWL-Test (Thermal Wit...

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Diskussion

Die Moxibustionstechnik ist wirksam bei vielen Erkrankungen wie Müdigkeit, Schlaflosigkeit, Durchfall und Schmerzsyndrom 20,21,22,23,24,25,26. Mit den Vorteilen der Moxibustionsbehandlung für viele Krankheiten hat der Mechanismus dieser Technik die Aufmerksa...

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Offenlegungen

Die Autoren erklären, dass sie nichts offenzulegen haben.

Danksagungen

Diese Arbeit wurde durch Zuschüsse der National Natural Science Foundation of China (81704187, 8210152562), des Sichuan Science and Technology Program (2019YJ0587, 2018JY0482, 2019YJ0329), der Sichuan Academy of Medical Sciences und des Sichuan People's Hospital Research Fund (2018ZX05), der Xinglin Scholars Research Foundation der Chengdu University of Traditional Chinese Medicine (QNXZ2019034) unterstützt.

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Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
Vollständiges Freund's Adjuvans (CFA)Sigma-AldrichSF588102
KlebepistoleDeli Group Co., Ltd.DL5041
LaborhandschuhBoci  Co., Ltd53625130323
Magnetisches Metallrechteck (Dicke: 0,2 cm)Sitoo Stationery Co., Ltd1007908729 Moxa-Stick
Hanyi Airong Fabrik5613
StahlblechRizhan Metallmaterialien Co., Ltd1108
Spritze (1000 ml)Xinmin Fuda Co., Ltd
TimerBevoza Co., LtdKT003
Velcro GürtelMinnesota Mining and Manufacturing Co., Ltd3MSJ3550
HolzwürfelChuang Hing Wood Chip Co., Ltd2581457A
HolzschieneChuang Hing Wood Chip Co., Ltd3410968M
HolzstabChuang Hing Wood Chip Co., Ltd2785476M
HolzleisteChuang Hing Wood Chip Co., Ltd2374652S
796341

Referenzen

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