Vollkreiskauterisierung des limbalen Gefäßplexus bei chirurgisch induziertem Glaukom bei Nagetieren

Zusammenfassung

Das Ziel dieses Protokolls ist es, ein neuartiges Modell der glaukomatösen Neurodegeneration zu charakterisieren, das auf einer thermischen 360°-Kauterisierung des limbalen Gefäßplexus basiert und eine subakute okuläre Hypertonie induziert.

Zusammenfassung

Das Glaukom, die zweithäufigste Erblindungsursache weltweit, ist eine heterogene Gruppe von Augenerkrankungen, die durch eine strukturelle Schädigung des Sehnervs und eine Degeneration der retinalen Ganglienzellen (RGC) gekennzeichnet sind, die zu einer Sehstörung führt, indem die Übertragung visueller Informationen vom Auge zum Gehirn unterbrochen wird. Ein erhöhter Augeninnendruck ist der wichtigste Risikofaktor; Daher wurden mehrere Modelle der okulären Hypertonie bei Nagetieren entweder durch genetische oder experimentelle Ansätze entwickelt, um die Ursachen und Auswirkungen der Krankheit zu untersuchen. Unter diesen wurden einige Einschränkungen berichtet, wie z. B. chirurgische Invasivität, unzureichende funktionelle Beurteilung, die Notwendigkeit einer umfangreichen Ausbildung und eine sehr variable Ausdehnung der Netzhautschäden. Die vorliegende Arbeit charakterisiert eine einfache, kostengünstige und effiziente Methode zur Induktion von okulärer Hypertonie bei Nagetieren, die auf der Kauterisierung des limbalen Gefäßplexus bei niedriger Temperatur, einer Hauptkomponente der Kammerwasserdrainage, basiert. Das neue Modell bietet eine technisch einfache, nicht-invasive und reproduzierbare subakute okuläre Hypertonie, die mit einer progressiven RGC und einer Degeneration des Sehnervs einhergeht, sowie eine einzigartige postoperative klinische Genesungsrate, die in vivo funktionelle Studien sowohl mit elektrophysiologischen als auch mit verhaltenstherapeutischen Methoden ermöglicht.

Einleitung

In der medizinischen Literatur wird das Glaukom als eine heterogene Gruppe von Optikusneuropathien verstanden, die durch eine fortschreitende Degeneration von retinalen Ganglienzellen (RGCs), Dendriten, Soma und Axonen gekennzeichnet sind, was zu einem strukturellen Schröpfen (Exkavation) der Papille und einer funktionellen Verschlechterung des Sehnervs führt, was in unkontrollierten Fällen zu einer Amaurose führt, indem die Übertragung visueller Informationen vom Auge zum Gehirn unterbrochen wird¹. Das Glaukom ist derzeit weltweit die häufigste Ursache für irreversible Erblindung und wird im Jahr 2040 voraussichtlich etwa 111,8 Millionen Mensc....

Protokoll

Alle Verfahren wurden in Übereinstimmung mit der Erklärung für die Verwendung von Tieren in der Augen- und Sehforschung der Association for Research in Vision and Ophthalmology (ARVO) durchgeführt und von der Ethikkommission für die Verwendung von Tieren in wissenschaftlichen Experimenten des Zentrums für Gesundheitswissenschaften der Bundesuniversität Rio de Janeiro genehmigt (Protokoll 083/17). In der vorliegenden Arbeit wurden Lister Hooded Ratten beiderlei Geschlechts im Alter von 2-3 Monaten und mit einem Gewicht von 180-320 g verwendet. Das Verfahren kann jedoch an verschiedene Rattenstämme unterschiedlichen Alters angepasst werden.

Ergebnisse

Die quantitativen Variablen werden als Mittelwert ± Standardfehler des Mittelwerts (SEM) ausgedrückt. Mit Ausnahme des Vergleichs der IOD-Dynamik zwischen OHT- und Kontrollgruppen (Abbildung 1F) wurde die statistische Analyse mittels Zwei-Wege-ANOVA durchgeführt, gefolgt von Sidaks Mehrfachvergleichstest. Ein p-Wert < 0,05 wurde als statistisch signifikant angesehen.

Abbildung 1 zeigt die chirurgischen Schritte des Modells der Full.......

Diskussion

Die Limbus-Plexus-Kauterisation (LPC) ist ein neuartiges posttrabekuläres Modell mit dem Vorteil, dass es auf leicht zugängliche Gefäßstrukturen abzielt, die keine Konjunktival- oder Zapfendissektion erfordern^17,28. Anders als beim Vortex-Venen-Kauterisierungsmodell, einem renommierten OHT-Modell, das auf der chirurgischen Beeinträchtigung der Aderhautvenendrainage basiert, ist nicht zu erwarten, dass eine venöse Stauung den IOD-Anstieg im LPC-Modell beeinflusst,.......

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Aceton	Isofar	201	Wird für die Gewebevorbereitung der Elektronenmikroskopie verwendet (Schritt 5)
Aktive Elektrode für die Elektroretinographie	Hansol Medical	Co-Edelstahlnadel	0,25 mm & mal 15 mm
Anestalcon	Novartis Biociê ncias S/A	MS-1.0068.1087	Proxymetacainhydrochlorid 0,5%
Calciumchlorid	Vetec	560	Wird für die Elektronenmikroskopie-Gewebevorbereitung verwendet (Schritt 5)
Cautery Low Temp Fine Tip 10/bx	Bovie Medical Corporation	AA00	Low-temperature ophthalmic cautery
Cetamin	Syntec do Brasil Ltda	000200-3-000003	Ketaminhydrochlorid 10%
DAKO	Dako Nordamerika	S3023	Antifade-Eindeckmedium
DAPI	Thermo Fisher Scientific	28718-90-3	Diamidino-2-phenylindol; blau fluoreszierender nuklearer Gegenfleck; Emission bei 452± 3 nm
Ecofilm	Cristá lia Produtos Quí micos Farmacê uticos Ltda	MS-1.0298.0487	Carmellose-Natrium 0,5%
EPON-Harz	Polysciences, Inc.	-	Epoxidharz für die Elektronenmikroskopie, bestehend aus einer Mischung aus vier Reagenzien: Poly/Bed 812 Resin (CAT#08791); DDSA - Dodecenylbernsteinsäureanhydrid (CAT#00563); NMA - Nadic-Methylanhydrid (CAT#00886); DMP-30 - 2,4,6-tris(dimethylaminomethyl)phenol (CAT#00553)
Glutaraldehyd	Elektronenmikroskopie	Sciences 16110	Wird für die Elektronenmikroskopie-Gewebepräparation verwendet (Schritt 5)
Hyabak	Uniã o Quí Glimmer Farmacê utica Nacional S/A	MS-8042140002	Natriumhyaluronat 0,15%
Icare Tonolab	Icare Finland Oy	TV02 (Modellnummer)	Rebound-Handheld-Tonometer
IgG Esel Anti-Maus-Antikörper + Alexa Fluor 555	Thermo Fisher Scientific	A31570	Sekundäre Antikörperlösung
LCD-Monitor 23 Zoll	Samsung Electronics Co. Ltd.	S23B550	Modell LS23B550, für Elektroretinogramm-Aufnahme
LSM 510 Meta	Carl Zeiss-Konfokales		Epifluoreszenzmikroskop
Maxiflox	Cristá lia Produtos Quí micos Farmacê uticos Ltda	MS-1.0298.0489	Ciprofloxacin 3,5 mg/g
MEB-9400K	Nihon Kohden	Corporation-System	zur Aufzeichnung von Elektroretinogrammen
monoklonale IgG1-Maus anti-Brn3a	MilliporeSigma	MAB-1585	Brn3a primäre Antikörperlösung
Neuropack Manager v08.33	Nihon Kohden	Corporation-Software	zur Elektroretinogramm-Signalverarbeitung
Optometrie	CerebralMechanics-System		zur optomotorischen Reaktionsanalyse
Osmiumtetroxid	Elektronenmikroskopie Sciences	19100	Zur Elektronenmikroskopie-Gewebepräparation (Schritt 5)
Kaliumferrocyanid	Elektronenmikroskopie Sciences	20150	Zur Elektronenmikroskopie-Gewebepräparation (Schritt 5)
Referenz- und Masseelektroden für die Elektroretinographie	Chalgren Enterprises	110-63	Edelstahlnadeln 0,4 mm & mal 37 mm
Natriumcacodylatpuffer	Elektronenmikroskopie Sciences	12300	Wird für die Elektronenmikroskopie Gewebevorbereitung (Schritt 5) verwendet
	. o Quí Glimmer Farmacê utica Nacional S/A	MS-1.0497.1287	Prednisolonacetat 0,12%
Terolac	Cristá lia Produtos Quí micos Farmacê uticos Ltda	MS-1.0497.1286	Ketorolac Trometamol 0,5%
Terramicina	Laborató rios Pfizer Ltda	MS-1.0216.0024	Oxytetracyclinhydrochlorid 30 mg/g + Polymyxin B 10.000 U/g
Tono-Pen XL	Reichert Technologies	230635	Digitales Applanations-Handheld-Tonometer
TO-PRO-3	Thermo Fisher Scientific	T3605	Fernrot fluoreszierender nuklearer Gegenfleck; Emission bei 661 nm
Triton X-100	Sigma-Aldrich	9036-19-5	Nichtionisches Tensid
Uranylacetat	Elektronenmikroskopie Sciences	22400	Wird für die Elektronenmikroskopie Gewebepräparation verwendet (Schritt 5)
Xilazin	Syntec do Brasil Ltda	7899	Xylazinhydrochlorid 2%
	Carl Zeiss-Stereomikroskop		für Chirurgie und Netzhautdissektion