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Keramisches omnidirektionales Bioprinting in zellbeladenen Suspensionen zur Erzeugung von Knochenanaloga

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DOI:

10.3791/63943

8. August 2022

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Dieses Protokoll beschreibt eine 3D-Drucktechnik zur Herstellung knochenähnlicher Strukturen durch Abscheiden einer Calciumphosphat-Tinte in einem körnigen Träger auf Gelatinebasis. Gedruckte Knochenanaloga werden in Freiform abgeschieden, mit Flexibilität für die direkte Ernte des Drucks oder die Vernetzung innerhalb einer lebenden Zellmatrix für mehrphasige Konstrukte.

Zusammenfassung

Strukturell ist Knochengewebe ein anorganisch-organisches Komposit mit metabolisch aktiven Zellen, die in eine hierarchische, hochmineralisierte Matrix eingebettet sind. Diese Organisation ist aufgrund der heterogenen Umgebung des Knochens schwierig zu replizieren. Ceramic omnidirectional Bioprinting in Cell-Suspensions (COBICS) ist eine Mikrogel-basierte Bioprinting-Technik, die die mineralische und zelluläre Struktur des Knochens auf einzigartige Weise repliziert. COBICS druckt komplexe, biologisch relevante Konstrukte ohne opfernde Trägermaterialien oder harte Nachbearbeitungsschritte (z.B. Bestrahlung und Hochtemperatursintern), die zwei der größten Herausforderungen bei der additiven Fertigung von knochenmimetischen Konstrukten darstellen. Diese Technik wird durch die Freiformextrusion einer neuartigen Tinte auf Calciumphosphatbasis in einer Mikrogelsuspension auf Gelatinebasis ermöglicht. Die Fließspannungseigenschaften der Suspension ermöglichen die Ablagerung und unterstützen die gedruckte Knochenstruktur. UV-Vernetzung und Nanopräzipitation "verriegeln" es dann. Die Fähigkeit, nanostrukturierte knochenmimetische Keramiken in zellbeladenen Biomaterialien zu drucken, bietet eine raumzeitliche Kontrolle über Makro- und Mikroarchitektur und erleichtert die Echtzeitherstellung komplexer Knochenkonstrukte in klinischen Umgebungen.

Einleitung

Knochen hat bemerkenswerte Regenerationsfähigkeiten als eine der wenigen Strukturen im Körper, die heilen können, indem sie ihre normale zelluläre Zusammensetzung, Orientierung und mechanische Stärke bis zu einer kritischen Defektgröße wiederherstellen, wenn die endogene Heilungskapazität beeinträchtigt ist1. Knochen unterstützt und erleichtert zusammen mit Knorpel und Band die Bewegung des Körpers, speichert Mineralien und Fette und produziert Blutzellen. Als hartes, dichtes Bindegewebe besteht Knochen hauptsächlich aus einer anorganischen Phase, Wasser und organischem Material, das hauptsächlich aus Kollagenfasernbesteht 2

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Protokoll

1. Herstellung von Knochentinte

  1. Synthese von α-Tricalciumphosphat
    1. Calciumhydrogenphosphat (CaHPO4) und Calciumcarbonat (CaCO 3) Pulver werden in einem molaren Verhältnis von3:2 Ca:P abgewogen. Mit einem Spatel die beiden Pulver gründlich homogenisieren.
    2. Geben Sie das Calciumhydrogenphosphat-Calciumcarbonat-Pulvergemisch in einen Zirkonoxidtiegel, so dass es nicht mehr als 75% gefüllt ist.
      HINWEIS: Um eine Kontamination zu vermeiden, verwenden Sie einen neuen Tiegel oder einen Tiegel, der zuvor zur Herstellung desselben Materials verwendet wurde. Zum Reinigen mit 100% Ethanol abspülen und in einem Ab....

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Ergebnisse

COBICS druckt komplexe, biologisch relevante Konstrukte ohne Opfermaterialien oder harte Nachbearbeitungsschritte (z.B. Strahlungs- und Hochtemperatursintern), die zwei der größten Herausforderungen bei der additiven Fertigung von knochenmimetischen Konstrukten darstellen. Um die COBICS-Bildung komplexer Knochenstrukturen und den Co-Druck von Zellen in Mikrogelsuspensionen zu demonstrieren, wurden repräsentative Bilder von knochenartigen Kompositen aus der Knochentinte aufgenommen und eine semiquantitative Analyse der AD.......

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Diskussion

Die 3D-Drucktechnik COBICS wurde entwickelt, um die Herstellung mineralisierter knochenähnlicher Strukturen durch Extrusion zu einer vernetzbaren Mikrogel-Suspension mit lebenden Zellen zu ermöglichen. Die Technik wurde auf eine abbaubare Mikrogelsuspension angewendet, und die Zellen zeigen eine gute Lebensfähigkeit, Ausbreitung und osteogene Differenzierungsfähigkeit innerhalb des Systems11. Eine Schlüsseldeterminante für den Erfolg von Konstrukten, die mit dieser Technik erstellt werden, ist die.......

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Offenlegungen

Die Autoren erklären, dass sie keine Interessenkonflikte offenzulegen haben.

Danksagungen

Die Autoren danken dem National Health and Medical Research Council (Grant-Nr. GNT1111694 und GNT1141602) und dem Australian Research Council (Grant-Nr. FT180100417, FL150100060 und CE14100036). Die Autoren danken der Biomedical Imaging Facility an der University of New South Wales. Die Abbildungen wurden mit Biorender.com, Adobe Photoshop und Adobe Illustrator erstellt und im Rahmen eines kostenpflichtigen Abonnements exportiert.

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Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
3D-Drucker ExtruderHyrel3DEMO-25
50 mL ZentrifugenröhrchenFalconBDAA352070
Absolute Ethanol 100% denaturiertChem-Supply
AcetonChem-Supply154871
Aluminiumoxid-TiegelCoors
Ammoniumphosphat zweibasisch (NaHPO4)SigmaA5764
Autodesk Fusion 360Autodesk
Biosicherheitswerkbank Stufe 2
CalciumcarbonatSigma239216
Calciumhydrogenphosphat (CaHPO4)SigmaC7263
ZellkulturkolbenCorningverschiedene verwendete Volumina
Cellulose-Dialyseröhrchen, 14 kDa abgeschnittenSigmaD9777
ZentrifugeEppendorf5430R
ZentrifugeSigma3-16KL
Dosierspitze, 23 gNordson7018302
DMEM, niedriger Glukosegehalt, PyruvatThermo FIsher11885084
DPBS, kein Calcium, kein MagnesiumThermo FIsher
AufzugsofenLabec
Motor HR MehrkopfdruckerHyrel3D
Fötales KälberserumBovogen
Gelatine Typ A, aus SchweinehautSigmaG2500
Allzweck Edelstahl SpitzenNordson EF
GlycerolSigmaG9012
Aus menschlichem Fett gewonnene StammzellenATCCPCS-500-011
LSM 800 KonfokalmikroskopZEISS
Lyophilisator (Alpha 1-4 LDplus)Christ101541
Magnetische Heizplatte und Rührer
MethacrylanhydridSigma276685
Mini 2 Desktop-3D-DruckerLulzBot
Parafilm VersiegelungsfolieParafilmPM996
Penicillin-StreptomycinThermo FIsher15140122
Planetenkugelmühle
Planetenkugelmühle Glas
Polyoxyethylenorbitanmonooleat Tween-80SigmaP6224
Scannen ElektronenmikroskopFEI Nova NanoSEM 450 FE-SEM
Science Kimwipes Delicate Task WischerKimtech18813156
Edelstahl Standard-Reagenzsieb
SonnenblumenölCommunity
Co Trypsin-EDTA 0,25% phenolrotThermo FIsher25200056
ZEN Mikroskop SoftwareZEISS
Lebend-/tot-Viabilitäts-/Zytotoxizitätskit für Säugetierzellen InvitrogenL3224
DMEM, niedriger Glukosegehalt, kein Phenolrot ThermoFisher 11054020
14190144

Referenzen

  1. Bates, P., Ramachandran, M. Bone injury, healing and grafting. Basic Orthopaedic Sciences. The Stanmore Guide. , CRC Press. Boca Raton, FL. 123-134 (2007).
  2. Lin, X., et al. The bone extracellular matrix in bone formation and regeneration. Frontiers in Pharmacology. 11, 757(2020).
  3. <....

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Nachdrucke und Genehmigungen

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Schlagwörter

Keramisches BioprintingCalciumphosphat TinteGelMA MikrogelsKnochenregenerationmesenchymale StammzellenUV VernetzungMikrogel Suspension

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