Ein Abonnement von JoVE ist erforderlich, um diesen Inhalt anzuzeigen. Melden Sie sich an oder beginnen Sie noch heute mit einer kostenlosen Testphase.

Methodenartikel

Herstellung eines modifizierten autologen konditionierten Serums und ex vivo Beurteilung des Heilungspotentials im murinen Hornhautepithel

3.3K Aufrufe

⸱

DOI:

10.3791/64911

⸱

24. März 2023

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Education, Chang Gung Memorial Hospital Linkou, 2School of Medicine, Chang Gung University, 3Department of Chemical Engineering and Biotechnology, National Taipei University of Technology, 4Cell Therapy Center, Tri-Service General Hospital, 5Department of General Surgery, Bo-Ai Clinic, 6Department of Ophthalmology, Chang Gung Memorial Hospital Linkou, 7Institute of Clinical Medicine, National Yang Ming Chiao Tung University

* These authors contributed equally

In diesem Artikel

Zusammenfassung

In diesem Artikel wird ein Protokoll beschrieben, um den Prozess zu vereinfachen und die Herstellung von autologem konditioniertem Serum (ACS) kostengünstiger zu machen. Es werden keine speziellen Spritzen oder oberflächenbeschichteten Glasperlen benötigt. Darüber hinaus hat das modifizierte ACS (mACS) bei der Hornhautwundheilung von murinen Augen ex vivo Wettbewerbsvorteile gegenüber herkömmlichem autologem Serum.

Zusammenfassung

Topische Therapien aus menschlichem Blut waren in den letzten Jahrzehnten ein Segen für Kliniker. Autologes Serum (AS) und plättchenreiches Plasma (PRP) sind mit epitheliotropen Wachstumsfaktoren angereichert, die für die Wundheilung der Hornhaut unerlässlich sind. Im Gegensatz zu AS basiert PRP auf einem differentiellen Zentrifugationssystem, das mehr Wachstumsfaktoren aus Thrombozyten liefert. Autologes konditioniertes Serum (ACS) konserviert nicht nur die Herstellung von AS und PRP, sondern konzentriert sich auch auf immunmodulierende Eigenschaften, die bei entzündlichen Erkrankungen wichtig sind.

Das Fehlen standardisierter Protokolle und hohe Präparationskosten sind Einschränkungen für die klinische Anwendung von ACS. Dieses Videoexperiment demonstriert ein Standardverfahren zur Herstellung von modifizierten autologen konditionierten Serums (mACS) Augentropfen. Zunächst wurde Glycerin als Stabilisator der Blutzellen während der hypoxischen Inkubation in Heparinspritzen gegeben. Um die Blutzellen zu aktivieren, wurde eine 4-stündige Inkubation bei 37 °C eingeleitet. Anschließend wurden die Blutproben bei 3.500 × g für 10 min bei Raumtemperatur zentrifugiert. Nach der Filtration des Überstandes durch einen 0,22 μm Filter waren die mACS-Augentropfen vollständig aufbereitet.

Eine vorläufige Erprobung der therapeutischen Wirkung von mACS zeigte, dass es bei der Wundheilung der Hornhaut in ex vivo Mäuseaugen Wettbewerbsvorteile gegenüber konventionellem AS haben könnte. Das in dieser Studie verwendete AS wurde nach veröffentlichten Studien und der klinischen Praxis in unserem Krankenhaus erstellt. Daher könnte die Wirksamkeit von mACS bei Erkrankungen der Augenoberfläche in zukünftigen Forschungen durch in vivo Tierstudien und klinische Studien evaluiert werden.

Einleitung

Die therapeutische Wirkung von autologem Serum (AS) bei Erkrankungen des trockenen Auges wurde erstmals in den 1980er Jahren von Fox et al.1 beschrieben. Es wird angenommen, dass sowohl die schmierende Eigenschaft als auch die essentiellen epitheliotropen biochemischen Komponenten in AS, die natürliche Tränen nachahmen, die Proliferation von Hornhautepithelzellen begünstigen. Auf dieser Grundlage wurden in den letzten Jahrzehnten mehrere Studien durchgeführt. Zu den trophischen Komponenten gehören der epidermale Wachstumsfaktor (EGF), Vitamin A, der transformierende Wachstumsfaktor β (TGF-β) und andere Zytokine. Interessanterweise ist das Serum reich an TGF-β und Vitamin A, von denen angenommen wird, dass sie eine zentrale Rolle bei der epidermalen Proliferation spielen 2,3,4,5. Darüber hinaus haben mehrere Studien bei der Behandlung von Patienten mit Erkrankungen der Augenoberfläche einige Vorteile von AS-Augentropfen in Bezug auf die von den Patienten berichteten Ergebnisse, andere objektive Parameter des trockenen Auges 6,7 und mikroskopische Befunde wie die Zelldichte8 gezeigt. Metaanalysestudien zeigten, dass es einige Vorteile bei der Verbesserung der Patientensyndrome durch die Behandlung mit AS-Augentropfen geben könnte, aber es fehlen noch Langzeitergebnisse und Beobachtungen 9,10.

Im Gegensatz zu AS wird plättchenreiches Plasma (PRP) durch Zugabe eines Antikoagulans während der Präparation mit weiterer differentieller Zentrifugation und chemischer Aktivierung der Blutplättchen gewonnen. Im Vergleich zu AS sind in PRP zahlreiche Chemikalien und Wachstumsfaktoren wie TGF-β, vaskulärer endothelialer Wachstumsfaktor (VEGF) und EGF enthalten. Es wurde auch bei Erkrankungen der Augenoberfläche mit klinischem Nutzen bei der Linderung von Symptomen angewendet11.

Die Querverknüpfung zwischen Epitheldefekten und Entzündungen ist komplex. Insbesondere die Immunpathophysiologie ist ein weiteres wichtiges Thema bei Erkrankungen der Augenoberfläche. Es wird angenommen, dass proinflammatorische Zytokine wie IL-1β und IFN-γ zentrale Mediatoren in Entzündungskaskaden sind12. Auf diese Weise eröffnen sich neue Behandlungswege, die auf dem Verständnis des Immunmechanismus basieren. Strategien zur Stoppung dieses Entzündungsprozesses, einschließlich der Produktion von Interleukin-1-Rezeptor-Antagonisten (IL-1Ra) und anderen entzündungshemmenden Zytokinen, könnten auch bei Erkrankungen der Augenoberfläche eine wichtige Rolle spielen13,14,15.

Seit 1998 wird Orthokin, ein kommerzialisiertes autologes konditioniertes Serum (ACS), klinisch bei orthopädischen Patienten eingesetzt, die an Arthrose (OA), rheumatoider Arthritis (RA) und Wirbelsäulenerkrankungen leiden13. Im Vergleich zu AS und PRP sind die Behandlung mit chemisch beschichteten Glasperlen und die hypoxische Inkubation zur Aktivierung von Monozyten die Besonderheiten von ACS16. Theoretisch können mehr entzündungshemmende Faktoren ausgeschüttet werden, indem den Zellen Überlebensstress hinzugefügt wird, was zu einer höheren Konzentration essentieller immunmodulierender Komponenten, einschließlich IL-1Ra, führt. Der verbesserte therapeutische Nutzen von ACS bei Arthrose im Vergleich zu AS wurde ebenfalls berichtet17. Erkrankungen der Augenoberfläche haben in mancher Hinsicht einen ähnlichen Immunhintergrund wie orthopädische Entzündungserkrankungen. Aufgrund der erfolgreichen Ergebnisse der Therapie mit menschlichem Blut im orthopädischen Bereich könnte ACS daher Vorteile gegenüber konventionellen Behandlungen in der klinischen Praxis durch epitheliotrope und immunmodulierende Eigenschaften haben. Obwohl ACS bei orthopädisch-entzündlichen Erkrankungen weit verbreitet ist, müssen seine klinischen Anwendungen in der Augenheilkunde noch erforscht werden, was durch die hohen Kosten, die mangelnde Literaturunterstützung und die mangelnde Standardisierung des Präparationsprozesses behindert werden kann, was zu unterschiedlichen Leistungen führt.

In diesem Videoartikel wurde eine neuartige, kostengünstige und bequeme Methode zur Erzeugung des modifizierten ACS (mACS) oder wachstumsfaktorreichen Plasmas (PRGF) demonstriert, wodurch eine Augentropfenlösung mit einem vergleichbaren praktischen Wert wie kommerzialisierte ACS hergestellt wird. Die Schlüsselideen, Antikoagulanzien hinzuzufügen und die Blutzellen durch Stressinkubation zur Sekretion von entzündungshemmenden Zytokinen anzuregen, wurden beibehalten, aber im Gegensatz zu den chemisch induzierten Methoden, wie z. B. solchen, die auf CrSO 4-beschichteten Glasperlen und kommerziellen Kits basieren, wird der kritische Stressstatus bei dieser Methode physikalisch durch hypoxische Inkubation induziert. Darüber hinaus wurde Glycerin hinzugefügt, um zusätzliche Vorteile zu bieten, darunter eine Erhöhung der Stabilität der Membran der Blutzellen, die Aufrechterhaltung eines angemessenen osmotischen extrazellulären Flüssigkeitsdrucks18 und eine geeignete Nährstoffquelle unter hypoxischen Bedingungen, die eine Überlastung der Zellen vermeiden.

Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.

Protokoll

Die Recherche wurde in Übereinstimmung mit den institutionellen Richtlinien zu Beginn des Protokollabschnitts durchgeführt. Alle Protokolle und Verfahren wurden in Übereinstimmung mit der Deklaration von Helsinki durchgeführt und vom Institutional Review Board der Chang Gung Medical Foundation geprüft und genehmigt. Alle Probanden wurden über die Art dieser Studie informiert und unterschrieben vor der Aufnahme eine Einverständniserklärung. Die für den gesamten Versuchsablauf benötigten Verbrauchsmaterialien sind in Abbildung 1 und Abbildung 2 sowie in der Materialtabelle dargestellt.

1. Vorbereitung der Materialien, die für die Herstellung von mACS-Augentropfen benötigt werden

  1. Bereiten Sie 250 ml 10%ige Glycerinlösung vor und halten Sie ein 21-g-Infusionsset mit Schmetterlingsflügeln, eine 3-ml-Spritze ohne Nadel und sechs 10-ml-Vacutainer-Röhrchen mit Heparin 158 USP-Einheiten bereit (Abbildung 1).
  2. Verbinden Sie die 21 g Blutentnahmenadel mit der 3-ml-Spritze und entnehmen Sie 3 ml 10%ige Glycerinlösung in die vorbereitete Spritze.
    Anmerkungen: Alle Materialien müssen sterilisiert werden, bevor die Nadel eingeführt wird.
  3. Verteilen Sie die 10%ige Glycerinlösung nacheinander in den Vacutainer-Röhrchen, wobei jeweils ca. 0,5 ml 10%ige Glycerinlösung enthalten sind (Abbildung 3A).
    Anmerkungen: Aufgrund des Unterdrucks im Reagenzglas muss die Nadel sofort nach dem Einstecken herauskommen, um 3 ml Glycerinlösung gleichmäßig auf die sechs Reagenzgläser zu verteilen.
  4. Sterilisieren Sie die Haut des Patienten mit sterilen Wattestäbchen mit 75% Alkohol. Punktieren Sie die oberflächliche Vene der oberen Gliedmaßen des Patienten mit der 18-G-Blutentnahmenadel. Entnahme von insgesamt 60-70 ml venösem Blut aus der oberflächlichen Vene.

2. Vorbereitung für mACS Augentropfen

  1. Injizieren Sie nacheinander 10 ml des entnommenen venösen Blutes in jedes der sechs Vacutainer-Röhrchen (Abbildung 3B).
    Anmerkungen: Dieser Schritt beruht auf dem Unterdruck des Vakuums, um die Röhrchen zu füllen. Um eine Zerstörung der Blutzellen und eine Hämolyse zu vermeiden, üben Sie keinen Überdruck aus.
  2. Legen Sie die sechs Vacutainer-Röhrchen mit einer konstanten Temperatur von 37 °C für 4 h in den Inkubator (Abbildung 3C).
    Anmerkungen: Der hypoxische Status wird durch den verbleibenden Unterdruck in einem verschlossenen Röhrchen, das Glycerin aufgenommen hat, aufrechterhalten und stabilisiert.
  3. Nehmen Sie die Röhrchen nach 4 h aus dem Inkubator und zentrifugieren Sie sie bei 3.500 × g für 10 min bei Raumtemperatur.
  4. Bereiten Sie zu diesem Zeitpunkt die Materialien für die mACS-Extraktion vor, einschließlich der sterilisierten Augentropfenflaschen, einer 3-ml-Spritze mit der Nadel, eines 0,22-μm-Filters, einer 18-g-Nadel und eines Paares steriler Handschuhe (Abbildung 2).
    Anmerkungen: Der Operationstisch sollte mit 75%igem Alkohol abgewischt werden, um eine aseptische Umgebung zu gewährleisten. Der Überstand ist nach der Zentrifugation bereits ein Halbzeug von mACS.
  5. Legen Sie die sechs Röhrchen auf das Röhrchengestell und öffnen Sie die Kappen nach vollständiger Zentrifugation (Abbildung 3D).
    Anmerkungen: Sterilität ist in diesem Schritt nicht erforderlich.
  6. Ziehen Sie sterile Handschuhe an und ziehen Sie das mACS nacheinander mit einer 3-ml-Spritze und einer 18-G-Nadel heraus.
    Anmerkungen: Achten Sie darauf, während dieses Schritts nicht die untere Blutkörperchenschicht zu zeichnen (Abbildung 3E).
  7. Ziehen Sie die Nadel heraus, schließen Sie sie an den 0,22-μm-Filter an und verbinden Sie die 23-G-, 1,5-Zoll-Blutentnahmenadel mit der ursprünglichen 3-ml-Spritze mit dem Auslass unten (Abbildung 3F).
  8. Schieben Sie die Nadel vorsichtig durch den 0,22 μm Filter in die vorbereiteten sterilen Augentropfenflaschen (Abbildung 3G).
  9. Wiederholen Sie die obigen Schritte, bis alle mACS gefiltert und in Augentropfenflaschen aufbewahrt wurden (Abbildung 3H).
  10. Lagern Sie die mACS-Augentropfen bei 4 °C zur sofortigen Anwendung. Zur Langzeitkonservierung bei -20 °C lagern.
    HINWEIS: Nicht länger als 2 Wochen bei 4 °C oder länger als 3 Monate bei -20 °Caufbewahren 9,19.

3. Ex vivo Wundheilungsmodell des murinen Hornhautepithels

HINWEIS: Das folgende ex vivo Tiermodell basiert auf früheren Erfahrungen von Hung et al. zu mechanischen Verletzungen des Hornhautepithels20. Die folgenden Schritte sollten unter dem Mikroskop durchgeführt werden, um eine gut umschriebene und konsistente Hornhautepithelwunde zu erzeugen.

  1. Betäuben Sie die C57BL/6-Mäuse mit 3%-4% Isofluran. Drücke die Hautbiopsie-Stanze über die zentrale Hornhaut der Maus und lasse einen flachen Kreis auf dem Epithel als gleichmäßigen Wundrand zurück.
    Anmerkungen: Seien Sie vorsichtig, um einen Riss des Augapfels zu vermeiden.
  2. Debride des Hornhautepithels innerhalb des bestätigten Bereichs bis zur Bowman-Schicht mit einem Hornhautrostentferner, der mit einem 0,5-mm-Grat ausgestattet ist.
  3. Um das ex vivo Tiermodell der mechanischen Hornhautwunde zu erstellen, entnehmen Sie den Augapfel und bereiten Sie die Kultur gut vor.
    1. Schläfern Sie die Mäuse zuerst ein; Drücken Sie dann sanft auf die oberen und unteren Augenhöhlenränder der Mäuse, führen Sie die Spitze der Pinzette über den retrobulbären Raum und den Augapfel heraus und halten Sie ihn an der Pinzette fest.
    2. Schneiden Sie den Sehnerv und das periorbitale Weichgewebe mit einer Hornhautschere durch, um den Augapfel perfekt zu isolieren.
    3. Bereiten Sie eine 96-Well-Platte mit geschmolzenem Wachs vor. Erzeugen Sie schnell ein rundes Loch mit den Spitzen der Pinzette und warten Sie dann, bis es erstarrt ist.
  4. Bereiten Sie die zu testenden Medien vor: 0,5 % mACS, 0,5 % AS zum Vergleich, normale Kochsalzlösung als Negativkontrolle und modifiziertes Eagle-Medium (DMEM) von Dulbecco.
    HINWEIS: mACS wird mit dem oben genannten Protokoll erhalten.
  5. Für die Ex-vivo-Kultur legen Sie den geernteten Augapfel auf die vorbereitete 96-Well-Platte. Geben Sie 200 μl jedes Mediums in die 96-Well-Platte.
  6. Legen Sie die 96-Well-Kulturplatte bei 37 °C mit 5 % CO2 in den Inkubator. Stellen Sie sicher, dass das Nährmedium alle 24 Stunden gewechselt wird.
  7. Um den sequentiellen Wundheilungseffekt zu bestätigen, wird der epitheliale Wundbereich alle 8 h durch Fluoresceinfärbung unter dem Mikroskop überwacht.
    1. Lösen Sie das Fluorescein auf dem Fluoresceinpapier mit normaler Kochsalzlösung auf.
    2. Lassen Sie den Fluoresceinfarbstoff auf die zentrale Hornhaut der Maus tropfen und beobachten und dokumentieren Sie ihn unter dem Mikroskop. Ein typisches Ergebnis ist in Abbildung 4 dargestellt.
      HINWEIS: Ein Tropfen (ca. 0,05 ml) Fluoresceinfarbstoff reicht für die Beobachtung aus.

Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.

Ergebnisse

Abbildung 1 und Abbildung 2 zeigen die für das Experiment benötigten Materialien, und Abbildung 3 zeigt die aufeinanderfolgenden Schritte und die erfolgreichen Zwischenprodukte während der Herstellung von mACS. Zunächst wurden 0,5 ml 10%ige Glycerinlösung in jedes sterile 10-ml-Reagenzglas gegeben (Abbildung 3A). Dann wurden dem Patienten 60-70 ml venöses Blut entnommen und 10 ml Blut in jedes Röhrchen ...

Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.

Diskussion

In dieser Arbeit wird ein Protokoll zur Herstellung von mACS beschrieben und der Nutzen von mACS-Augentropfen bei der Wundheilung von Tiermodellen weiter aufgezeigt. Die entscheidende Modifikation dieses mACS-Protokolls ist die Zugabe von ca. 0,5 ml 10%iger Glycerinlösung in jedes Reagenzglas, wodurch während der 4-stündigen Inkubation bei 37 °C geeignete hypoxische Bedingungen geschaffen werden. Diese Einstellung versorgt den AS mit angemessenem Stress und veranlasst die Zellen, die notwendigen Wachstumsfaktoren abzuso...

Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.

Offenlegungen

Alle Autoren erklären, dass kein Interessenkonflikt besteht.

Danksagungen

Die Autoren bedanken sich bei Ya-Lan Chien und Chia-Ying Lee für die hervorragende technische Unterstützung und bei der Firma OnLine English für die sprachliche Ausgabe. Diese Studie wurde zum Teil durch das Chang Gung Medical Research Project finanziert (Grant No. CMRPG3L1491).

Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
  96-Well-KulturplatteMerck KGaA, DeutschlandCLS3997
Barraquer Deckel SpekulumKatenaK1-535515 mm
Barraquer NadelhalterKatenaK6-3310ohne Lock 
Barron Vacuum Punch 8,0 mmKatenaK20-2108zum Schneiden von Filterpapier
BD 10,0 mL Vacutainer-Röhrchen mit Heparin 158 USP EinheitenBecton,Dickinson and Company, US367880Mindestens 6 Röhrchen, notwendig zur Blutentnahme für nachfolgende Experimente und zur Vermeidung von Blutverklebung
BD 21 G Schmetterlingsflügel-InfusionssetBecton,Dickinson and Company, US367281Für eine gleichmäßige Verteilung der Glycerinlösung
C57BL/6 Mäuse National Laboratory Animal CenterRMRC11005für Mausmodell
Castroviejo Pinzette 0,12 mmKatena K5-2500
ZentrifugeEppendorf, Deutschland58110004283.500 x g für 10 min
Cheng Yi 10,0 mL sterilisierte TropfflascheCheng Yi Chemical,Taiwan CP405141Muss steril sein und als Aufbewahrungsbehälter für das Endprodukt
Hornhautrost-Ring-Entferner mit 0,5 mm GratAlgerbrush IITM; Alger Equipment Co., Inc. Lago Vista, TXCHI-675für das Debridement des Hornhautepithels
Dulbecco's modifiziertes minimales essentielles MediumMerck KGaA, DeutschlandD6429
Filterpapier Verifizierter Lieferant - Toyo Roshi Kaisha, Ltd.1.11
Fluorescein-Natrium-Ophthalmikstreifen U.S.POPTITECH OPTFL100Färbung bei Hornhautepitheldefekten 
InkubatorFirstek, TaiwanS300S37 ° C für 4 h
Kanam sterile HandschuheKanam Latex Industries, IndienEN455Für den aseptischen Betrieb
Merck 0,22 µ m FilterMerck KGaA, DeutschlandPR05359Mindestens 2 Filter für die mACS-Filtration
Nang Kuang 250 mL 10% GlycerinlösungNang Kuang Pharmaceutical, Taiwan19496Um einen geeigneten Membranstabilisierungseffekt und extrazellulären osmotischen Druck für Blutzellen anzubieten
Normale KochsalzlösungTAIWAN BIOTECH CO., LTD.100-120-1101
Hautbiopsie-Stanze 2mmSTIEFEL22650
StereomikroskopCarl Zeiss Meditec, Dublin, CASV11Mikroskop für die Chirurgie
Terumo 18 G NadelTerumo, TaiwanSMACF0120-18BX3,0 mL Spritze mit 18 G Nadel zur Extraktion des Überstands nach der Zentrifugation
Terumo 20,0 mL SpritzeTerumo,Taiwan MDSS20ESKann verwendet werden, um Serum nach der ersten Zentrifugation zu sammeln und für die Sekundärzentrifugation zu verwenden.
Terumo 3,0 mL Spritze mit der 23 G NadelTerumo, TaiwanMDSS03S23253,0 mL Spritze wird verwendet, um den Überstand nach der Zentrifugation zu extrahieren. Verbinden Sie dann den Filter und die 23 G Nadel zur Injektion in die Augentropfenflaschen.
Westcott Tenotomieschere MediumkatenaK4-3004

Referenzen

  1. Fox, R. I., Chan, R., Michelson, J. B., Belmont, J. B., Michelson, P. E. Beneficial effect of artificial tears made with autologous serum in patients with keratoconjunctivitis sicca. Arthritis and Rheumatology. 27 (4), 459-461 (1984).
  2. Noble, B. A., et al. Comparison of autologous serum eye drops with conventional therapy in a randomised controlled crossover trial for ocular surface disease. The British Journal of Ophthalmology. 88 (5), 647-652 (2004).
  3. Bradley, J. C., Bradley, R. H., McCartney, D. L., Mannis, M. J. Serum growth factor analysis in dry eye syndrome. Clinical & Experimental Ophthalmology. 36 (8), 717-720 (2008).
  4. Alshammari, T. M., Al-Hassan, A. A., Hadda, T. B., Aljofan, M. Comparison of different serum sample extraction methods and their suitability for mass spectrometry analysis. Saudi Pharmaceutical Journal. 23 (6), 689-697 (2015).
  5. Tsubota, K., et al. Treatment of dry eye by autologous serum application in Sjögren's syndrome. The British Journal of Ophthalmology. 83 (4), 390-395 (1999).
  6. Urzua, C. A., Vasquez, D. H., Huidobro, A., Hernandez, H., Alfaro, J. Randomized double-blind clinical trial of autologous serum versus artificial tears in dry eye syndrome. Current Eye Research. 37 (8), 684-688 (2012).
  7. Cui, D., Li, G., Akpek, E. K. Autologous serum eye drops for ocular surface disorders. Current Opinion in Allergy and Clinical Immunology. 21 (5), 493-499 (2021).
  8. Jirsova, K., et al. The application of autologous serum eye drops in severe dry eye patients; subjective and objective parameters before and after treatment. Current Eye Research. 39 (1), 21-30 (2014).
  9. Pan, Q., Angelina, A., Marrone, M., Stark, W. J., Akpek, E. K. Autologous serum eye drops for dry eye. Cochrane Database of Systematic Reviews. 2 (2), (2017).
  10. Wang, L., et al. Autologous serum eye drops versus artificial tear drops for dry eye disease: a systematic review and meta-analysis of randomized controlled trials. Ophthalmic Research. 63 (5), 443-451 (2020).
  11. Soni, N. G., Jeng, B. H. Blood-derived topical therapy for ocular surface diseases. The British Journal of Ophthalmology. 100 (1), 22-27 (2016).
  12. Solomon, A., et al. anti-inflammatory forms of interleukin-1 in the tear fluid and conjunctiva of patients with dry-eye disease. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 42 (10), 2283-2292 (2001).
  13. Meijer, H., Reinecke, J., Becker, C., Tholen, G., Wehling, P. The production of anti-inflammatory cytokines in whole blood by physico-chemical induction. Inflammation Research. 52 (10), 404-407 (2003).
  14. Bielory, B. P., Shah, S. P., O'Brien, T. P., Perez, V. L., Bielory, L. Emerging therapeutics for ocular surface disease. Current Opinion in Allergy and Clinical Immunology. 16 (5), 477-486 (2016).
  15. Stevenson, W., Chauhan, S. K., Dana, R. Dry eye disease: an immune-mediated ocular surface disorder. Archives of Ophthalmology. 130 (1), 90-100 (2012).
  16. Yang, J., Guo, A., Li, Q., Wu, J. Platelet-rich plasma attenuates interleukin-1β-induced apoptosis and inflammation in chondrocytes through targeting hypoxia-inducible factor-2α. Tissue and Cell. 73, 101646(2021).
  17. Shakouri, S. K., Dolati, S., Santhakumar, J., Thakor, A. S., Yarani, R. Autologous conditioned serum for degenerative diseases and prospects. Growth Factors. 39 (1-6), 59-70 (2021).
  18. Gull, M., Pasek, M. A. The role of glycerol and its derivatives in the biochemistry of living organisms, and their prebiotic origin and significance in the evolution of life. Catalysts. 11 (1), 86(2021).
  19. Drew, V. J., Tseng, C. L., Seghatchian, J., Burnouf, T. Reflections on dry eye syndrome treatment: therapeutic role of blood products. Frontiers in Medicine. 5, 33(2018).
  20. Hung, K. H., Yeh, L. K. Ex vivo and in vivo animal models for mechanical and chemical injuries of corneal epithelium. Journal of Visualized Experiments. (182), e63217(2022).
  21. Geerling, G., Maclennan, S., Hartwig, D. Autologous serum eye drops for ocular surface disorders. The British Journal of Ophthalmology. 88 (11), 1467-1474 (2004).
  22. Rutgers, M., Saris, D. B., Dhert, W. J., Creemers, L. B. Cytokine profile of autologous conditioned serum for treatment of osteoarthritis, in vitro effects on cartilage metabolism and intra-articular levels after injection. Arthritis Research & Therapy. 12 (3), R114(2010).
  23. Antebi, B., et al. Short-term physiological hypoxia potentiates the therapeutic function of mesenchymal stem cells. Stem Cell Research & Therapy. 9 (1), 265(2018).
  24. Chen, Y. M., Wang, W. Y., Lin, Y. C., Tsai, S. H., Lou, Y. T. Use of autologous serum eye drops with contact lenses in the treatment of chemical burn-induced bilateral corneal persistent epithelial defects. BioMed Research International. 2022, 6600788(2022).
  25. Diaz-Valle, D., et al. Comparison of the efficacy of topical insulin with autologous serum eye drops in persistent epithelial defects of the cornea. Acta Ophthalmologica. 100 (4), e912-e919 (2022).
  26. Metheetrairut, C., et al. Comparison of epitheliotrophic factors in platelet-rich plasma versus autologous serum and their treatment efficacy in dry eye disease. Scientific Reports. 12 (1), 8906(2022).
  27. NaPier, E., Camacho, M., McDevitt, T. F., Sweeney, A. R. Neurotrophic keratopathy: current challenges and future prospects. Annals of Medicine. 54 (1), 666-673 (2022).
  28. Garcia-Conca, V., et al. Efficacy and safety of treatment of hyposecretory dry eye with platelet-rich plasma. Acta Ophthalmologica. 97 (2), e170-e178 (2019).
  29. Gholian, S., et al. Use of autologous conditioned serum dressings in hard-to-heal wounds: a randomised prospective clinical trial. Journal of Wound Care. 31 (1), 68-77 (2022).
  30. Raeissadat, S. A., Rayegani, S. M., Jafarian, N., Heidari, M. Autologous conditioned serum applications in the treatment of musculoskeletal diseases: a narrative review. Future Science OA. 8 (2), 776(2022).
  31. Tokawa, P. K. A., Brossi, P. M., Baccarin, R. Y. A. Autologous conditioned serum in equine and human orthopedic therapy: A systematic review. Research in Veterinary Science. 146, 34-52 (2022).
  32. Evans, C. H., Chevalier, X., Wehling, P. Autologous conditioned serum. Physical Medicine and Rehabilitation. Clinics of North America. 27 (4), 893-908 (2016).
  33. Coskun, H. S., Yurtbay, A., Say, F. Platelet rich plasma versus autologous conditioned serum in osteoarthritis of the knee: clinical results of a five-year retrospective study. Cureus. 14 (4), e24500(2022).

Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.

Nachdrucke und Genehmigungen

Tags

HornhautwundheilungSerum-Augentropfenblutbasierte Therapienplättchenreiches PlasmaErkrankungen der AugenoberflächeZytokinanalysedifferenzielle Zentrifugation
Herstellung eines modifizierten autologen konditionierten Serums und ex vivo Beurteilung des Heilungspotentials im murinen Hornhautepithel
Kontaktieren Sie uns
Der Bibliothek empfehlen

Datenschutz

Nutzungsbedingungen

Richtlinien

Urheberrecht © 2026 MyJoVE Corporation. Alle Rechte vorbehalten.