Standardisierung des Transfers zwischen Laboren zwischen Durchflusszytometern zum Nachweis von Lymphozyten bei mit japanischer Enzephalitis geimpften Kindern

Zusammenfassung

In dieser Studie wurde eine Methode entwickelt, um den Transfer von Versuchssettings und Analyseschablonen zwischen zwei Durchflusszytometern in zwei Laboratorien zum Nachweis von Lymphozyten bei mit Japanischer Enzephalitis geimpften Kindern zu erleichtern. Die Standardisierungsmethode für die Durchflusszytometer-Experimente wird es ermöglichen, Forschungsprojekte in mehreren Zentren effektiv durchzuführen.

Zusammenfassung

Immer mehr Labore müssen Daten von mehreren Durchflusszytometern sammeln, insbesondere für Forschungsprojekte, die in mehreren Zentren durchgeführt werden. Zu den Herausforderungen bei der Verwendung von zwei Durchflusszytometern in verschiedenen Labors gehören das Fehlen standardisierter Materialien, Software-Kompatibilitätsprobleme, Inkonsistenzen bei der Geräteeinrichtung und die Verwendung unterschiedlicher Konfigurationen für verschiedene Durchflusszytometer. Um ein standardisiertes Durchflusszytometrie-Experiment zu etablieren, um die Konsistenz und Vergleichbarkeit der experimentellen Ergebnisse über mehrere Zentren hinweg zu erreichen, wurde eine schnelle und praktikable Standardisierungsmethode etabliert, um Parameter über verschiedene Durchflusszytometer hinweg zu übertragen.

Die in dieser Studie entwickelten Methoden ermöglichten den Transfer von Versuchssettings und Analyseschablonen zwischen zwei Durchflusszytometern in verschiedenen Laboratorien zum Nachweis von Lymphozyten bei Kindern, die mit Japanischer Enzephalitis (JE) geimpft wurden. Eine konsistente Fluoreszenzintensität wurde zwischen den beiden Zytometern unter Verwendung von Fluoreszenz-Standardkügelchen erhalten, um die Zytometereinstellungen festzulegen. Vergleichbare Ergebnisse wurden in zwei Laboratorien mit unterschiedlichen Instrumententypen erzielt. Mit dieser Methode können wir die Analyse zur Bewertung der Immunfunktion von JE-geimpften Kindern in verschiedenen Labors mit unterschiedlichen Instrumenten standardisieren, die Unterschiede in den Daten und Ergebnissen zwischen Durchflusszytometern in mehreren Zentren verringern und einen praktikablen Ansatz für die gegenseitige Akkreditierung von Laborergebnissen bieten. Die Standardisierungsmethode von Durchflusszytometer-Experimenten wird die effektive Durchführung von Forschungsprojekten über mehrere Zentren hinweg sicherstellen.

Einleitung

Die Standardisierung der Durchflusszytometrie ist nützlich für die Vergleichbarkeit von Ergebnissen, die von verschiedenen Zytometern in verschiedenen Labors und Studienzentren erhalten wurden, und fördert die gegenseitige Anerkennung von Ergebnissen, um die Arbeitseffizienz zu verbessern. Immer mehr Szenarien erfordern eine Standardisierung. Während des Arzneimittelentwicklungsprozesses ist die Standardisierung der Durchflusszytometrie wichtig, da ein entwickelter und validierter Assay den gesamten Arzneimittelentwicklungsprozess von der präklinischen bis zur klinischen Analyse unterstützt. Durchflusszytometrische Methoden werden häufig zwischen der pharmazeutischen ....

Protokoll

Die Studie wurde von der Ethikkommission des Beijing Children's Hospital, Capital Medical University, genehmigt (Zulassungsnummer: 2020-k-85). Auf die Einverständniserklärung der Probanden wurde verzichtet, da in dieser Studie nur Restproben nach klinischen Tests verwendet wurden. An dieser Studie sind zwei Labore beteiligt. Im Transferlabor wurde die standardisierte Methode mit einem Durchflusszytometer entwickelt. Das Zytometer in diesem Labor wird im Folgenden als Zytometer A bezeichnet. Das Prüfverfahrenslabor ist das Labor, das Verfahren unter Verwendung eines anderen Durchflusszytometers erhält, und das Zytomete....

Ergebnisse

Abbildung 1 zeigt ein globales Arbeitsblatt der Zielwertvorlage für die hellen CST-Perlen. Unter Verwendung eines FSC/SSC-Diagramms wird ein Polygon-Gate gezeichnet, um die hellen CST-Perlen auszuwählen. Histogrammdiagramme von 10 Fluoreszenzkanälen wurden für die hellen CST-Beads erhalten: FITC, PE, BB700, PE-Cy7, APC, R718, APC-H7, BV421, V500 und BV605. Der Zielwert für jeden Parameter wird angezeigt, indem der Median innerhalb der Histogrammgatter in Tabelle 2 angezeigt .......

Diskussion

Die Immunphänotypisierung von Untergruppen peripherer Blutlymphozyten kann helfen, die Veränderungen der zellvermittelten adaptiven Immunität nach der Impfung bei Kindern zu verstehen. In klinischen Anwendungen treten unerwartete Situationen auf, wie z. B. das Versäumnis, Proben rechtzeitig zu erkennen, oder der Austausch eines Durchflusszytometers; Daher sind schnell standardisierte Methoden erforderlich, die den Transfer zwischen Durchflusszytometern in verschiedenen Labors erleichtern

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
BD CompBeads Anti-Mouse Ig, κ/Negative Control Compensation Particles Set	BD	552843	Kompensation
BD FACSCanto	BD	FACSCanto	Durchflusszytometrie A im überweisenden Labor
BD FACSDiva CS& T Research Beads	BD	655051	Definition der Ausgangswerte des Durchflusszytometers und zur Verfolgung der Zytometerleistung
BD Horizon BV421 Maus Anti-Human-CD127	BD	562436	Fluoreszierender Antikörper
BD Horizon BV605 Maus Anti-Human CD27	BD	562656	Fluoreszierender Antikörper
BD Horizon V500 Maus Anti-Human CD45	BD	560777	Fluoreszierender Antikörper
BD LSRFortessa	BD	LSRFortessa	Durchflusszytometrie B im Testmethodenlabor
BD OptiBuild BB700 Maus Anti-Human CD19	BD	745907	Fluoreszierender Antikörper
BD OptiBuild R718 Maus Anti-Human CD8	BD	751953	Fluoreszierender Antikörper
BD Pharmingen APC Maus Anti-Human CD45RA	BD	550855	Fluoreszierender Antikörper
BD Pharmingen APC-H7 Maus Anti-Human-CD3	BD	560176	Fluoreszierender Antikörper
BD Pharmingen FITC Maus Anti-Human CD4	BD	566320	Fluoreszierender Antikörper
BD Pharmingen PE Maus Anti-Human CD25	BD	555432	Fluoreszierender Antikörper
BD Pharmingen PE-Cy7 Maus Anti-Human IgD	BD	561314	Fluoreszierender Antikörper
Brilliant Staining Buffer Plus	BD	566385	Färbepuffer
Zentrifuge	Eppendorf	5810	Zellzentrifugation
Zentrifugenröhrchen	BD Falcon	BD-35209715	15 mL Zentrifugenröhrchen
CS& T IVD Beads	BD	662414	Standardkügelchen zum Einrichten von Zytometereinstellungen in verschiedenen Durchflusszytometern
Lysing Solution 10x Konzentrat	BD	349202	lysierende rote Blutkörperchen
Phosphatgepufferte Kochsalzlösung (PBS)	Gibco	10010-023	PBS
Reagenzglas mit rundem Boden	BD Falcon	352235	5 mL Reagenzglas