Summary
Hier beschrijven we een algemeen protocol en ontwerp dat kan worden toegepast om sporenhoeveelheden en minder belangrijke bestanddelen te identificeren in de complexe natuurlijke productformuleringen (matrixen) in de Tibetaanse geneeskunde.
Abstract
Tibetaanse medicijnen zijn complex en bevatten tal van onbekende verbindingen, waardoor diepgaand onderzoek naar hun moleculaire structuren cruciaal is. Vloeistofchromatografie-elektrospray ionisatie time-of-flight massaspectrometrie (LC-ESI-TOF-MS) wordt vaak gebruikt om Tibetaanse geneeskunde te extraheren; Er blijven echter veel onvoorspelbare onbekende verbindingen over na het gebruik van de spectrumdatabase. Dit artikel ontwikkelde een universele methode voor het identificeren van componenten in de Tibetaanse geneeskunde met behulp van ionenval massaspectrometrie (IT-MS). De methode omvat gestandaardiseerde en geprogrammeerde protocollen voor monstervoorbereiding, MS-instelling, LC-prerun, methode-instelling, MS-acquisitie, meertraps MS-bewerking en handmatige gegevensanalyse. Twee representatieve verbindingen in de Tibetaanse geneeskunde Abelmoschus manihot zaden werden geïdentificeerd met behulp van meervoudige fase fragmentatie, met een gedetailleerde analyse van typische samengestelde structuren. Daarnaast bespreekt het artikel aspecten zoals ionmodusselectie, mobiele faseaanpassing, optimalisatie van het scanbereik, botsingsenergieregeling, omschakeling van botsingsmodus, fragmentatiefactoren en beperkingen van de methode. De ontwikkelde gestandaardiseerde analysemethode is universeel en kan worden toegepast op onbekende verbindingen in de Tibetaanse geneeskunde.
Introduction
De kwalitatieve analyse van sporencomponenten in de traditionele Chinese geneeskunde (TCM) is een cruciaal onderwerp geworden in het onderzoek. Vanwege het grote aantal verbindingen in TCM is het moeilijk om ze te isoleren voor analyse van nucleaire magnetische resonantiespectrometer (NMR) of röntgendiffractometer (XRD), waardoor op massaspectrometrie (MS) gebaseerde methoden die alleen lage monstervolumes vereisen steeds populairder worden. Bovendien is vloeistofchromatografie (LC) in combinatie met MS de afgelopen jaren veel gebruikt in TCM-onderzoek voor de verbeterde scheiding van complexe monsters en kwalitatieve analyse van chemische verbindingen1. Een veelgebruikte methode is vloeistofchromatografie-elektrospray ionisatie time-of-flight massaspectrometrie (LC-ESI-TOF-MS), die veel wordt gebruikt in kwalitatief onderzoek naar Tibetaanse geneeskunde2. Met deze methode worden complexe componenten verrijkt en gescheiden in een LC-kolom en wordt de massa-ladingsverhouding (m/z) van de adductionen waargenomen met behulp van een MS-detector. Het doorzoeken van tandem MS (MS/MS of MS2) databases is momenteel de snelste aanpak voor betrouwbare samengestelde annotaties in small molecule analyse met behulp van quadrupole time-of-flight (Q-TOF) MS en Orbitrap MS3. De slechte kwaliteit van databases en de aanwezigheid van verschillende isomeren belemmeren echter de identificatie van onbekende verbindingen. Bovendien is de informatie die door de MS/MS-database wordt verstrekt, beperkt 4,5,6,7. Het is belangrijk om de chemische verbindingen in elke TCM te onderzoeken met behulp van een algemeen protocol dat op grote schaal kan worden toegepast op andere TCM.
IT-MS vangt een breed scala aan ionen op door verschillende radiofrequentie (RF) spanningen toe te passen op de ringelektroden8. IT-MS kan tijdreeksen meertraps MS-scans uitvoeren in verschillende chronologische volgordes, waarbij fragmentatie van ingrediënten meervoudige fase MS (MS n) wordt verkregen, waarbijn het aantal productionstadia9 is. Lineaire IT-MS wordt beschouwd als het beste voor structuuridentificatie omdat het kan worden gebruikt voor sequentiële MSn-experimenten 10. Gerichte ionen kunnen worden geïsoleerd en geaccumuleerd in lineaire IT-MS1. De MS n (n ≥ 3) in IT-MS biedt meer fragmentinformatie dan MS/MS in Q-TOF-MS. Omdat IT-MS het doelion en zijn fragmentionen niet kan vergrendelen, is het een krachtig hulpmiddel voor de structuuropheldering van onbekende verbindingen, waaronder isomeren1. MSn-technologie is op grote schaal toegepast op de structurele analyse van onbekende eiwitten, peptiden en polysacchariden11,12. Het abundantieniveau van fragmentionen in MSn biedt meer moleculaire fragmentinformatie over gerichte verbindingen in complexe monsters dan MS / MS in Q-TOF-MS. Daarom is het toepassen van MSn-technologie op structurele identificatie in TCM essentieel.
Tibetaanse geneeskunde is een belangrijk onderdeel van TCM13, en deze geneesmiddelen zijn voornamelijk afgeleid van dieren, planten en mineralen gevonden in het plateaugebied14. Het Tibetaanse medicijn Abelmoschus manihot zaden (AMS) is het zaad van Abelmoschus manihot (linn.) medicus. AMS is een traditioneel kruidengeneesmiddel dat wordt gebruikt voor de behandeling van aandoeningen zoals atopische dermatitis, reuma en lepra. Het bevat chalcone, dat antibacteriële, schimmelwerende, antikanker-, antioxidatieve en ontstekingsremmende effecten bezit15. In de huidige studie werden MS n-procedures verbeterd en werd een gedetailleerde methode ontwikkeld om samengestelde structuren in de Tibetaanse geneeskunde AMS te identificeren met behulp van IT-MS en MSn. Bepaalde MS-parameters, waaronder de ionenmodus, het scanbereik en de botsingsmodus, werden geoptimaliseerd om problemen bij het identificeren van sporenverbindingen te overwinnen. Deze studie heeft tot doel de gestandaardiseerde structuuridentificatie van sporenverbindingen in TCM te bevorderen.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. Monstervoorbereiding
- Weeg 1 g van het AMS-monster nauwkeurig af en plaats het in een erlenmeyer met 30 ml 80% methanol. Breng het mengsel over naar een ultrasone badsonicator gedurende 30 minuten extractie bij 25 °C. Centrifugeer het monster gedurende 5 minuten op 14.000 x g .
OPMERKING: De frequentie van de ultrasone badsonicator is 40 KHz. - Bereid een injectiespuit en een microporeus membraanfilter (0,22 μm, alleen biologisch). Filtreer het supernatant in een monsterfles van 2 ml.
2. MS-instelling
- Zet de schakelaar van de vacuümpomp aan. Open de hoofdklep van de argoncilinder en het partiële drukventiel en stel de druk in op ongeveer 0,3 MPa. Open de stikstofklep.
OPMERKING: Wacht ten minste 8 uur om ervoor te zorgen dat er voldoende vacuümgraad is voor de experimentele omstandigheden. Controleer vóór de analyse of de gasdruk van argon en stikstof hoog genoeg is. - Start de MS-besturingssoftware. Klik op Verwarmde SEI-bron in het softwarepaneel en voer de MS-parameters in, waaronder de verwarmingstemperatuur (350 °C), het mantelgasdebiet (35 arb), het aux-gasdebiet (15 arb), de sproeispanning (3,8 KV voor de positieve modus, −2,5 KV voor de negatieve modus) en de capillaire temperatuur (275 °C). Klik op de knop Toepassen om de ionenbron te activeren.
3. LC-prerun, methode-instelling en MS-acquisitie
- Bereid mobiele fase A en mobiele fase B met respectievelijk 0,1% mierenzuur waterige oplossing en zuiver acetonitril. Ontgast ze in een ultrasone badsonicator gedurende ten minste 15 minuten. Verbind de oplossingen met respectievelijk de A- en B-vloeistofpassages (figuur 1A). Bereid een methanol-water (1:9 v/v) oplossing en vul deze vervolgens met de hand in de reinigingsvloeistofflessen van de pomp en injector.
OPMERKING: De frequentie van de ultrasone badsonicator is 40 KHz. - Start de LC-MS-besturingssoftware.
- Klik op de knop Direct Control om het LC-bedieningspaneel te openen. Open de spoelklep tegen de klok in op de pompmodule (figuur 1B).
- Klik op de knop Meer optie om de pompinstelling te openen en stel de spoelparameters gedurende 3 minuten in op 5 mlmin−1 . Klik op de knop Leegmaken om het verwijderen van de bubbel te starten. Sluit vervolgens de spoelklep.
- Klik op de knoppen Prime Syringe, Wash Buffer Loop en Wash Needle Externally om de spuit gedurende drie cycli, de lus voor één cyclus en de naald voor één cyclus te spoelen. Plaats de monsterfles in de monsternemer (figuur 1C).
- Klik op de knop Instrument instellen om het venster voor het bewerken van methoden te openen. Klik op de knop Nieuw om een nieuwe LC-MS-instrumentmethode te maken.
- Stel een totale uitvoeringstijd vast voor de LC-methode. Voer vervolgens waarden in om de druklimiet, het totale debiet, de stroomgradiënt, de monstertemperatuur, de kolomtemperatuur en de gereedstaande temperatuurdelta in te stellen in het venster voor het bewerken van methoden.
OPMERKING: Het standaard totale debiet van de mobiele fase is constant op 0,3 ml/min met 50% A en 50% B en zonder kolomtemperatuur bij afwezigheid van een chromatografische kolom. De standaardwaarden van de monstertemperatuur en de parate temperatuurdelta zijn respectievelijk 15 °C en 0,1 °C. Andere instellingen zijn afhankelijk van het type vloeistofchromatografiekolom dat wordt gebruikt. - Selecteer het type Algemeen MS of MSn experiment voor de MS-methode. Voer waarden in om de acquisitietijd, polariteit, massabereik, omleidingswaardegetal en omleidingswaardeduur te configureren. Klik op de knop Opslaan om de instellingen als instrumentmethode te configureren.
OPMERKING: De standaardinstellingen zonder chromatografiekolom zijn als volgt: acquisitietijd, 2 min; polariteit, positief of negatief; massabereik, 100 tot 1.200; omleidingswaardenummer, 2; en omleidingswaarde duur, 1,99 min.
4. Bediening van meertraps massaspectrometrie
- Klik op de knop Sequence Setup om de sequentietabel te openen.
- Voer in de tabel de volgende informatie in: monstertype, bestandsnaam, pad, voorbeeld-id, instrumentmethode, positie en injectievolume.
- Klik op de knop Opslaan om de volgordetabel op te nemen en klik vervolgens op de knop Analyse starten om de instellingen te implementeren en de MS-acquisitie te starten.
OPMERKING: Het standaardvoorbeeldtype is geselecteerd als onbekend. De instrumentmethode is de methode die is opgeslagen in stap 3.6. De monsterfles wordt op zijn unieke locatie in de monsterruimte geplaatst. RA1 is bijvoorbeeld de eerste locatie in de eerste rij van het rode gebied in de monsterruimte. Het standaard injectievolume is meestal 2 μL, wat afhankelijk is van de concentratie van het monster.
- Dubbelklik op het raw-bestand in verkenner om de MS-gegevens in de gegevensverwerkingssoftware te laden. Selecteer in het basispiekchromatogram (BPI) het gebied met het maximale gebied onder de curve (AUC) door met de muis te klikken en te slepen. De bijbehorende MS-spectra worden in hetzelfde venster weergegeven.
- Selecteer een gericht ion voor de volgende MS/MS-analyse.
- Open het venster voor het bewerken van methoden opnieuw. Stel in de instellingstabel MSn de m/z van het beoogde ion in op één decimaal in de kolom Bovenliggende massa .
- Selecteer Botsingsmodus en voer de waarde voor botsingsenergie (CE) in. Stel het MS/MS-scanbereik in. Klik op de knop Opslaan om de MS-methode op te nemen en voer een nieuwe bestandsnaam in de volgordetabel in. Klik op de knop Start om de MS/MS-acquisitie te starten.
OPMERKING: Het MS/MS-scanbereik was 40%-130% van het beoogde ouderion. De standaard CE-waarde in de CID-modus (collision-induced dissociation) is 35%.
- Dubbelklik op het raw-bestand in verkenner om het MS/MS raw-bestand in de gegevensverwerkingssoftware te laden.
- Identificeer het sterkste fragmention in het MS/MS-spectrum en voer de m/z-waarde in de MSn-methodelijst in. Stel in de MS n-instellingstabel de MS3-parameters in, waaronder botsingsmodus, CE-waarde en scanbereik.
- Klik op de knop Opslaan om de MS-methode op te nemen en voer een nieuwe bestandsnaam in de volgordetabel in. Klik op de knop Start om de MS3-acquisitie te starten.
- Dubbelklik op het raw-bestand in verkenner om het MS3 raw-bestand in de gegevensverwerkingssoftware te laden. Herhaal stap 4.4 om het MS4-spectrum te verkrijgen.
- Voltooi het MSn-experiment wanneer er geen stabiele fragmentionen in het spectrum worden waargenomen.
5. Handmatige MSn data-analyse
- Dubbelklik op de raw-bestanden om alle massaspectra van MS naar MSn te openen. Bereken handmatig de m/z-verschilwaarden tussen het ion en de bijbehorende fragmentionen.
OPMERKING: De m/z-verschilwaarde tussen het ion (m/z 617,25) en de overeenkomstige fragmentionen (m/z 571,28) was bijvoorbeeld 45,97 in MS/MS, de m/z-verschilwaarde tussen het ion (m/z 571,28) en de overeenkomstige fragmentionen (m/z 525,38) was 45,90 in MS3, en de m/z-verschilwaarden tussen het ion (m/z 525,38) en de overeenkomstige fragmentionen (m/z 344,93 en 273,16) waren 180,45 en 252,22 in MS4, respectievelijk. - Teken handmatig de "core" -structuur volgens MS4-resultaten (het laatste niveau van MSn). Leid handmatig de oorspronkelijke structuur af met behulp van functionele groepen of moleculaire segmenten op basis van de m/z-verschilwaarde. Teken handmatig de moleculaire splitsingspaden volgens elke moleculaire structuur in MSn. Voorbeelden van handmatige moleculaire afleiding worden beschreven in de sectie representatieve resultaten.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Cellobiose werd gebruikt als model om de haalbaarheid van MSn in positieve ionmodus te verifiëren. Zoals te zien is in figuur 2A, produceerde de ESI-MS (positieve ionenmodus) van cellobiose [C 12 H22O11]+ het geprotoneerde molecuul [M+H]+ bij m/z 365. De product ion scan (CID-MS/MS) van [M+H]+ bij m/z 365 resulteerde in het tweede fragmention bij m/z 305 (figuur 2B), dat verder werd geanalyseerd met behulp van MS3 en MS4 analyses (figuur 2C,D). MS3-analyse resulteerde in het derde fragmention bij m/z 254 en de MS4-analyse resulteerde in het vierde fragmention bij m/z 185. Uit de MS/MS-analyse (figuur 2E) bleek dat het verloren fragmention bij m/z 60 wees op een opeenvolging van ionenfragmentatie bij m/z 365, namelijk ringopeningshydrolyse (blauw gemarkeerd), C-C-bindingssplitsing (rood gemarkeerd) en dehydratie (groen gemarkeerd). Evenzo bleek uit de MS3-analyse dat het verloren fragmention bij m/z 60 de C-C-bindingssplitsing (rood gemarkeerd) van een ion bij m/z 305 aangaf. De MS4-analyse toonde aan dat het verloren fragmention bij m/z 60 hydrolyse (blauw gemarkeerd) en uitdroging (groen gemarkeerd) impliceerde, resulterend in de splitsing van het ion met m/z 245 in een ion met m/z 185. De stapbreuk in de MSn-analyse gaf aan dat deze methode haalbaar was om de structuur van koolhydraten te onderzoeken.
De voorlopige kwalitatieve analyse van AMS met behulp van LC-Q-TOF-MS onthulde de aanwezigheid van tal van onbekende verbindingen. Een daarvan, een ion bij m/z 617, werd geselecteerd voor MSn-analyse in negatieve modus. De product ionenscan (CID-MS/MS) van de [M-H]− bij m/z 617 in AMS leverde een tweede fragmention op bij m/z 571. De MS3-analyse van dit fragmention produceerde een derde fragmention bij m/z 525 en de MS4-analyse produceerde vierde fragmentionen bij m/z 345 en 273 (figuur 3A-D). De MS3 van m/z 571 leverde een fragmention op bij m/z 525 door het verlies van het CH2OH-gedeelte als methanol (−32 Da) en het OH-gedeelte (−18 Da) als water. Deze MS4-resultaten werden gebruikt voor de handmatige identificatie van de "kernstructuur" van de verbinding, en de oorspronkelijke structuur werd bepaald door de m/z-waarden van het ion en zijn fragmentionen te vergelijken. De moleculaire structuur van de verbinding bij m/z 617 en de splitsingspaden in MSn zijn weergegeven in figuur 3E. Een andere onbekende verbinding bij m/z 365 werd in positieve modus geanalyseerd met behulp van MSn. De productionenscan (CID-MS/MS) van het [M+H]+ ion bij m/z 365 in AMS produceerde tweede fragmentionen bij m/z 299, m/z 329 en m/z 347. De MS3-analyse van deze fragmentionen leverde een derde fragmention op bij m/z 231 (figuur 4A-C). De moleculaire structuur en het splitsingsmechanisme van de verbinding bij m/z 365 zijn weergegeven in figuur 4E.
Figuur 1: Identificatie van onbekende samengestelde structuren in de Tibetaanse geneeskunde met behulp van IT-MS en meertraps massaspectrometrie-analyse . (A) De mobiele fase voor vloeistofchromatografie. (B) De vloeistofchromatografiepomp. C) De monsterruimte. (D) De ionenbron voor MS. (E) De interne structuur van de ionenvangmodule in MS. (F) Het MS4-spectrum . (G) De moleculaire structuurinformatie uit de MS4-resultaten . Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Figuur 2: Meertrapsfragmentatie van cellobiose via IT-MS in positieve ionmodus . (A) Oorspronkelijk massaspectrum van cellobiose. B) Fragmentionen in het MS/MS-spectrum. (C) Fragmentionen in het MS3-spectrum . D) Fragmentionen in het MS4-spectrum . (E) Het splitsingsmechanisme en de moleculaire structuur van cellobiose. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Figuur 3: Meertraps fragmentatie en structurele analyse van het onbekende AMS-samengestelde ion bij m/z 617 via IT-MS in negatieve ionmodus . (A) Gedeeltelijk massaspectrum van AMS. B) Fragmentionen in het MS/MS-spectrum. (C) Fragmentionen in het MS3-spectrum . D) Fragmentionen in het MS4-spectrum . (E) Het splitsingsmechanisme en de moleculaire structuur van het AMS-verbindingsion bij m/z 617. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Figuur 4: Meertraps fragmentatie structurele analyse van het onbekende AMS-samengestelde ion bij m/z 365 via IT-MS in positieve ionmodus . (A) Gedeeltelijk massaspectrum van AMS. B) Fragmentionen in het MS/MS-spectrum. (C) Fragmentionen in het MS3-spectrum . (D) Het splitsingsmechanisme en de moleculaire structuur van het AMS-verbindingsion bij m/z 365. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
IT-MS en zijn MSn-technologie bieden een nieuwe benadering voor het identificeren van de structuur van trace TCM-verbindingen. In tegenstelling tot Q-TOF-MS, dat de fragmentionen niet diep kon identificeren, blinkt IT-MS met MSn-technologie uit door zijn vermogen om ionen te isoleren en te accumuleren. Dit artikel schetst een methode voor het identificeren van sporenverbindingen in de Tibetaanse geneeskunde met behulp van de IT-MS en MSn techniek. De methode gebruikt de n-waarde in MSn om de hoeveelheid verstrekte fragmentioninformatie te bepalen. De cruciale stappen in deze methode omvatten het selecteren van het juiste scanbereik en het aanpassen van de CE-waarde, wat leidt tot de identificatie van waardevolle fragmenten.
Over het algemeen wordt de MSn-analyse van sacchariden het best uitgevoerd in positieve ionmodus16, terwijl fenolzuren en alkaloïden het best worden geanalyseerd in negatieve ionenmodus. De respons van de verbinding in de ESI-bron kan worden verbeterd door de mobiele fase aan te passen met additieven zoals mierenzuur, azijnzuur en ammoniumacetaat17. Een chemische ionisatiebron met atmosferische druk kan worden overwogen voor verbindingen met een zwakke polariteit. Het kiezen van een geschikt scanbereik kan de intensiteit van de fragmentionen verhogen, wat gunstig is voor de volgende fase van MS n vanwege het onvermijdelijke energieverval in elke MSn. De m/z van het fragmention moet zich in het centrale gebied van het scanbereik bevinden om de beste overeenkomstige intensiteit te verkrijgen. Als een ion dubbele of meerdere ladingen heeft, kunnen fragmentionen met hogere m/z-waarden worden verkregen door het ladingsgetal tijdens de fragmentatie te verlagen. In dit geval moet de eindm/z van het scanbereik groter worden ingesteld. De CID-modus is geschikt voor de meeste verbindingen in MSn-analyse 18. Als de intensiteit van het fragmention onvoldoende is, kan de CE-waarde met 5% per keer worden verhoogd. Wanneer er meerdere, complexe fragmentionen in MSn zijn, is een lagere CE-waarde nodig om de ionendissociatie te regelen. De pulsed-Q botsingsgeïnduceerde dissociatiemodus, die geschikt is voor kleine moleculen, biedt meer gedetailleerde informatie over fragmentionen met een laag molecuulgewicht dan CID-modus19. Het elektronenoverdrachtsdissociatie (ETD) model is dominant in peptidefractuur en eiwitidentificatie, maar wordt zelden gebruikt om de TCM-componentente identificeren 20. De ETD-modus kan worden gebruikt om onbekende verbindingen te onderzoeken die disulfidebindingen bevatten21.
Hoewel de MSn-methode veel voordelen heeft voor structurele identificatie in vergelijking met andere MS-technieken, zijn er nog steeds enkele beperkingen. Ten eerste is geen van de botsingsmodi geschikt voor alle TCM-verbindingen. Een redelijke keuze van botsingsmodus en handmatige aanpassing van de botsingsenergie kan de fragmentionen verbeteren. Bovendien is het met de MSn-methode moeilijk om de positie van functionele groepen in grote moleculen met complexe isomeren te onderscheiden. Het identificeren van de functionele groepssites is een uitdagende taak die ervaren onderzoekers vereist. Handmatige post-analyse en lange MS n-gegevensverwerkingstijd zijn ook belangrijke barrières die onderzoekers ontmoedigen om deze technologie te gebruiken. Q-TOF-MS is populair onder onderzoekers vanwege de hoge meetnauwkeurigheid, resolutie en gebruiksgemak met databases. IT-MS is echter een goede oplossing voor niet-geïdentificeerde ionen en sporenionen vanwege het vermogen om ionen te isoleren en te accumuleren en meerdere analysestadia uit te voeren. De integratie van Q-TOF en IT-MS zou een optimale oplossing kunnen bieden voor de volledige kwalitatieve analyse van TCM-monsters. MSn-technologie wordt veel gebruikt op gebieden zoals voedsel, milieuwetenschappen en geneeskunde, en de populariteit en het gebruik ervan op verschillende gebieden zullen naar verwachting toenemen met de verbetering van IT-MS-instrumentatie.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
De auteurs verklaren geen concurrerende financiële belangen te hebben.
Acknowledgments
Dit werk werd gefinancierd door het Xinglin Talent Program van Chengdu University of TCM (nr. 030058191), de Nature Science Foundation of Sichuan (2022NSFSC1470) en de National Natural Science Foundation of China (82204765).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Acetonitrile | Thermo Scientific | CAS 75-05-8 | LC-MS grade |
| Formic Acid | Knowles | CAS 64-18-6 | HPLC grade |
| Linear ion trap mass spectrometer | Thermo Scientific | LTQ XL | |
| liquid chromatograph | Thermo Scientific | U3000 | |
| LTQ Tune | Thermo Scientific | version 2.8.0 | MS control software |
| Methanol | Thermo Scientific | CAS 67-56-1 | LC-MS grade |
| Pure water | Thermo Scientific | CAS 7732-18-5 | LC-MS grade |
| Xcalibur | Thermo Scientific | version 2.0 | LC-IT-MS operational software |
References
- Chen, X. -F., Wu, H. -T., Tan, G. -G., Zhu, Z. -Y., Chai, Y. -F. Liquid chromatography coupled with time-of-flight and ion trap mass spectrometry for qualitative analysis of herbal medicines. Journal of Pharmaceutical Analysis. 1 (4), 235-245 (2011).
- Ou, C., et al. Systematically investigating the pharmacological mechanism of Dazhu Hongjingtian in the prevention and treatment of acute mountain sickness by integrating UPLC/Q-TOF-MS/MS analysis and network pharmacology. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 179, 113028 (2020).
- Kind, T., et al. Identification of small molecules using accurate mass MS/MS search. Mass Spectrometry Reviews. 37 (4), 513-532 (2018).
- Phetsanthad, A., Vu, N. Q., Li, L. Multi-faceted mass spectrometric investigation of neuropeptides in Callinectes sapidus. Journal of Visualized Experiments. (183), e63322 (2022).
- Seetaloo, N., Phillips, J. J. Millisecond hydrogen/deuterium-exchange mass spectrometry for the study of alpha-synuclein structural dynamics under physiological conditions. Journal of Visualized Experiments. (184), e64050 (2022).
- Karas, B. F., et al. Dose uptake of platinum-and ruthenium-based compound exposure in zebrafish by inductively coupled plasma mass spectrometry with broader applications. Journal of Visualized Experiments. (182), e6358 (2022).
- Chang, H. -L., et al. Uracil-DNA glycosylase assay by matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry analysis. Journal of Visualized Experiments. (182), e63089 (2022).
- Wang, S., et al. Structural characterization and identification of major constituents in Jitai tablets by high-performance liquid chromatography/diode-array detection coupled with electrospray ionization tandem mass spectrometry. Molecules. 17 (9), 10470-10493 (2012).
- Pang, B., Zhu, Y., Lu, L., Gu, F., Chen, H. The applications and features of liquid chromatography-mass spectrometry in the analysis of traditional Chinese medicine. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine. 2016, 3837270 (2016).
- Ichou, F., et al. Comparison of the activation time effects and the internal energy distributions for the CID, PQD and HCD excitation modes. Journal of Mass Spectrometry. 49 (6), 498-508 (2014).
- Fu, X., et al. Suppression of oligomer formation in glucose dehydration by CO2 and tetrahydrofuran. Green Chemistry. 19 (14), 3334-3343 (2017).
- Fu, X., et al. Solvent effects on degradative condensation side reactions of fructose in its initial conversion to 5-Hydroxymethylfurfural. ChemSusChem. 13 (3), 501-512 (2020).
- Yang, S., Wang, Z., Zhao, H., Ren, X.
- Shang, X., et al. Ethno-veterinary survey of medicinal plants in Ruoergai region, Sichuan province, China. Journal of Ethnopharmacology. 142 (2), Sichuan province, China. 390-400 (2012).
- Su, J., et al. Chalcone derivatives from Abelmoschus manihot seeds restrain NLRP3 inflammasome assembly by inhibiting ASC oligomerization. Frontiers in Pharmacology. 13, 932198 (2022).
- Fu, X., et al. Mapping out the reaction network of humin formation at the initial stage of fructose dehydration in water. Green Energy & Environment. , In Press (2022).
- Hua, Y., Jenke, D. Increasing the sensitivity of an LC-MS method for screening material extracts for organic extractables via mobile phase optimization. Journal of Chromatographic Science. 50 (3), 213-227 (2012).
- Kumar, S., Singh, A., Bajpai, V., Kumar, B. Identification characterization and distribution of monoterpene indole alkaloids in Rauwolfia species by Orbitrap Velos Pro mass spectrometer. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 118, 183-194 (2016).
- Bayat, P., Lesage, D., Cole, R. B. Tutorial: Ion activation in tandem mass spectrometry using ultra-high resolution instrumentation. Mass Spectrometry Reviews. 39 (5-6), 680-702 (2020).
- Wu, S. -L., et al. Mass spectrometric determination of disulfide linkages in recombinant therapeutic proteins using online LC−MS with electron-transfer dissociation. Analytical Chemistry. 81 (1), 112-122 (2009).
- Echterbille, J., Quinton, L., Gilles, N., De Pauw, E. Ion mobility mass spectrometry as a potential tool to assign disulfide bonds arrangements in peptides with multiple disulfide bridges. Analytical Chemistry. 85 (9), 4405-4413 (2013).
