Extraktion von Gift aus der parasitoiden Wespe Trichogramma dendrolimi mit Hilfe eines künstlichen Wirts

Zusammenfassung

Hier stellen wir ein Protokoll zur Extraktion von Gift aus Trichogramma dendrolimi unter Verwendung eines künstlichen Wirts vor, der mit Polyethylenfilm und Aminosäurelösung hergestellt wurde.

Zusammenfassung

Parasitoide Wespen sind eine vielfältige Gruppe von Hautflüglerinsekten, die als unschätzbare Ressourcen für die biologische Schädlingsbekämpfung dienen. Um einen erfolgreichen Parasitismus zu gewährleisten, injizieren parasitoide Wespen Gift in ihre Wirte, um die Immunität ihrer Wirte zu unterdrücken und die Entwicklung, den Stoffwechsel und sogar das Verhalten der Wirte zu modulieren. Mit über 600.000 geschätzten Arten übertrifft die Vielfalt der parasitoiden Wespen die anderer giftiger Tiere wie Schlangen, Kegelschnecken und Spinnen. Parasitoides Wespengift ist eine wenig erforschte Quelle bioaktiver Moleküle mit potenziellen Anwendungen in der Schädlingsbekämpfung und Medizin. Das Sammeln von parasitoidem Gift ist jedoch eine Herausforderung, da es nicht möglich ist, direkte oder elektrische Stimulation zu verwenden, und die Dissektion aufgrund ihrer geringen Größe schwierig ist. Trichogramma ist eine Gattung winziger (~0,5 mm) Ei-Parasitoid-Wespen, die zur biologischen Bekämpfung von Lepidoptera-Schädlingen sowohl in der Landwirtschaft als auch in der Forstwirtschaft weit verbreitet sind. Hier berichten wir über eine Methode zur Extraktion von Gift aus T. dendrolimi unter Verwendung künstlicher Wirte. Diese künstlichen Wirte werden mit Polyethylenfolie und Aminosäurelösungen erzeugt und dann mit Trichogramma-Wespen gegen Parasitismus geimpft. Das Gift wurde anschließend aufgefangen und konzentriert. Diese Methode ermöglicht die Extraktion großer Mengen von Trichogramma-Gift und vermeidet gleichzeitig eine Kontamination durch andere Gewebe, die durch die Dissektion verursacht wird, ein häufiges Problem bei Giftreservoir-Dissektionsprotokollen. Dieser innovative Ansatz erleichtert die Untersuchung des Giftes von Trichogramma und ebnet den Weg für neue Forschungen und potenzielle Anwendungen.

Einleitung

Schlupfwespen sind parasitäre Hautflüglerinsekten, die wichtige Ressourcen für die biologische Bekämpfung darstellen¹. Es gibt eine große Vielfalt an parasitoiden Wespen mit schätzungsweise über 600.000 Arten². Die Vielfalt der Schlupfwespen übersteigt die anderer giftiger Gliederfüßer wie Schlangen, Kegelschnecken, Spinnen, Skorpione und Bienen bei weitem. Gift ist ein wichtiger parasitärer Faktor bei Schlupfwespen. Für einen erfolgreichen Parasitismus wird Gift in den Wirt injiziert, wodurch das Verhalten, die Immunität, die Entwicklung und der Stoffwechsel des Wirts moduliert^{werden 3}. Darüber h....

Protokoll

1. Insektenzucht

1. Corcyra cephalonica auf Maismehl bei einer Temperatur von 26 ± 1°C und einer relativen Luftfeuchtigkeit von 40% ± 10% füttern.
2. Züchten Sie den Stamm T. dendrolimi aus dem Jilin-Insektarium in Innenräumen, indem Sie die Eier von Corcyra cephalonica als Wirte verwenden. Füttern Sie erwachsene Wespen mit 10 % Saccharosewasser in Drosophila-Röhrchen bei einer Temperatur von 26 ± 1 °C, relativer Luftfeuchtigkeit von 70 % ± 10 %, hell (L): dunkel (D) Periode von 14 h: 10 h.

2. Vorbereitung von Eierkarten aus Polyethylen-Kunststofffolie<....

Ergebnisse

Die Proteinkonzentration repräsentativer Giftproben wurde mit dem Protein-Assay-Kit gemessen, wobei die Ergebnisse in Tabelle 1 dargestellt sind. Die Ergebnisse zeigten, dass die Konzentration des mit dieser Methode gesammelten Giftproteins zwischen 0,35 μg/μl und 0,46 μg/μl lag, während die Negativkontrolle der Aminosäurelösung nur eine Proteinkonzentration von 0,03 μg/μl bis 0,05 μg/μl aufwies. Die Konzentration des Giftproteins, das mit dieser Methode gesammelt wird, ist viel höher als die der Negativ.......

Diskussion

In dieser Arbeit stellen wir eine Methode zur Extraktion von Gift aus T. dendrolimi unter Verwendung künstlicher Wirte vor. Die wichtigsten Punkte im Experiment mit der Giftsammlung sind folgende. (1) Während der Herstellung muss T. dendrolimi schnell mit einer geeigneten Konzentration von_CO2 betäubt werden. Ist die CO_{2 -} Konzentration zu niedrig, reicht sie nicht aus, um das Trichogramma schnell zu betäuben. Umgekehrt, wenn die Konzentration zu hoch ist, kann Trichogr.......

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
10 μ m Nylon Net	Millipore	NY1002500	Zum Filtern der Eier
10% Polyvinylalkohol	Aladdin	P139533	Zum Anlocken von T. dendrolimi  zur Eiablage
10% Saccharosewasser	Sinopharm Chemisches Reagenz	10021463	Feed Trichogramma dendrolimi
4x LDS Ladepuffer	Ace Hardware	B23010301	SDS-PAGE
Auffangbox	Deli	8555	Behälter für T. dendrolimi parasitism
Future PAGE  4– 12% (12 Vertiefungen)	Ace Hardware	J70236502X	SDS-PAGE
GenScript eStain L1 Proteinfärbegerät	GenScript	L00753	SDS-PAGE
Glasschleifstab	Applygen	tb6268	Halbkreisförmige Vorsprünge
L-Leucin	Solarbio	L0011	Künstliche Wirtskomponenten
L-Histidin	Aladdin	A2219458	Künstliche Wirtskomponenten
L-Phenylalanin	Solarbio	P0010	Künstliche Wirtskomponenten
Mini-Zentrifugen	Scilogex	D1008	Zentrifuge
MOPS-SDS Running Buffer	Ace Hardware	B23021	SDS-PAGE
Omni-Easy Instant BCA-Protein-Assay-Kit	Shanghai Yamay Biomedical Technology	ZJ102	Zur Bestimmung der Giftproteinkonzentration
PCR-Plattenlayout von 96 Löchern	Thermo Fisher	AB1400L	Halbkreisförmige Vorsprünge
Polyethylen-Kunststofffolie	Suzhou Aopang Trading	001c5427	Karte mit künstlichem Ei
Vorgefärbter Proteinmarker (10– 180 kDa)	YiFeiXue Biotech	YWB007	SDS-PAGE
Gummiband	Guangzhou qianrui biologie wissenschaft und technologie	009	Ziehen Sie die Kunststofffolie und die Auffangbox
Silikonkautschuk-Septenmatte, 96-Well, rundes Loch	Sangon Biotech	F504416-0001	Halbkreisförmige Vorsprünge