In Vivo 2-Photon Calcium Imaging in Layer 2 / 3 der Mäuse

Zusammenfassung

Um zu verstehen, Netzwerk-Dynamik Mikroschaltungen in den Neocortex, ist es wichtig, gleichzeitig aufzeichnen die Aktivität einer großen Anzahl von Neuronen. In-vivo Zwei-Photonen-Kalzium-Imaging ist die einzige Methode, dass man, um die Aktivität eines dichten neuronalen Population mit Single-Cell-Auflösung aufzeichnen können.

Zusammenfassung

Um zu verstehen, Netzwerk-Dynamik Mikroschaltungen in den Neocortex, ist es wichtig, gleichzeitig aufzeichnen die Aktivität einer großen Anzahl von Neuronen. In-vivo Zwei-Photonen-Kalzium-Imaging ist die einzige Methode, dass man, um die Aktivität eines dichten neuronalen Population mit Single-Cell-Auflösung aufzeichnen können. Die Methode besteht in der Implantation eines Schädel-Bildgebung Fenster Injektion einer fluoreszierenden Kalzium-Indikator-Farbstoff, die sich durch eine große Anzahl von Neuronen genommen werden kann und schließlich die Aufnahme der Aktivität von Neuronen mit Zeitraffer-Kalzium-Imaging mit einem in-vivo Zwei-Photonen-Mikroskop. Co-Injektion von Astrozyten-spezifische Farbstoffe ermöglicht es, Neuronen aus Astrozyten differenzieren. Die Technik kann in Mäusen, die fluoreszierende Moleküle in bestimmten Subpopulationen von Neuronen zum besseren Verständnis der Netzwerk-Interaktionen der verschiedenen Gruppen von Zellen durchgeführt werden.

Protokoll

1. Bereiten Sie die fluoreszierenden Kalzium-Indikator-Lösung. Wir verwenden Acetoxymethylester Farb-oder AM Farbstoffe für kurze. Dies sind Farbstoffe, die von den Zellen aufgenommen werden können, wenn sie injiziert extrazellulär. Wir verwenden in der Regel Oregon-Green BAPTA-1 AM-oder Fluo-4 AM in einer Konzentration von 1 mM. AM Farbstoffe können von Invitrogen in 50 Mikrogramm Fläschchen erhältlich. Wir bereiten Sie zunächst eine 20% ige Lösung von Pluronic F-127 in DMSO. Wir erwärmen die Lösung vor Gebrauch jeden Tag bis zu seiner klar. Wir lösen das Kalzium-Indikator von 20% Pluronic F-127/DMSO für 15-20 Minuten zu einer Konzentration von 10 mM. Wir haben dann verdünnt die Lösun....

Diskussion

Der Vorteil dieser Methode gegenüber elektrophysiologischen Ableitungen ist, dass sie weniger invasiv ist und erlaubt die Aufnahmen der Aktivität in neuronalen dichten neuronalen Netzen. Wenn Sie dieses Verfahren es ist wichtig, daran zu erinnern, extreme Vorsicht beim Ausführen der Kraniotomie nicht auf die Dauer beschädigen. Schon eine kleine Menge von subduralen Blutungen mit stark hinwegtäuschen Bildgebung.

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Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Oregon Green BAPTA1-AM	Reagenz	Invitrogen	O-6807
Fluo 4- AM	Reagenz	Invitrogen	F-14201
Sulforhodamin 101	Reagenz	Invitrogen	S-359
Pluronic F-127 in DMSO	Reagenz	Invitrogen	P-3000MP
Zentrifugalfilter (0,45 Mikrometer)	Reagenz	EMD Millipore	UFC3 0HV 0S