Hydroxysafflor Yellow A schwächt die LPS-induzierte Toxizität in dopaminergen Neuronen des Zebrafisches ab, indem es den TLR4/NF-ĸB-Signalweg reguliert

Zusammenfassung

Ziel dieses Protokolls ist es, zu testen, ob Hydroxysafflorgelb A (HSYA) die LPS-induzierte Neurotoxizität beim Zebrafisch abschwächt. Die motorische Funktion wurde mit Hilfe eines Visual Vision Systems bewertet. Die dopaminerge Nervenschädigung wurde immunhistochemisch untersucht. Moleküle, die am TLR4/NF-κB-Signalweg beteiligt sind, wurden mittels Western Blot analysiert.

Zusammenfassung

Lipopolysaccharid (LPS)-induzierte Entzündungen spielen eine entscheidende Rolle bei der Auslösung und Aufrechterhaltung der neurodegenerativen Erkrankungen, einschließlich der Parkinson-Krankheit (PD). Hydroxysafflorgelb A (HSYA) ist der Hauptbestandteil von Carthamus tinctorius L.. In dieser Studie soll beobachtet werden, ob HSYA die LPS-induzierte Toxizität in dopaminergen Neuronen von Zebrafischen verbessern kann. Zebrafische wurden LPS ausgesetzt und dann mit HSYA behandelt. Es wurden Verhaltenstests durchgeführt, um die motorische Funktion von Zebrafischen zu bewerten. Untersucht wurden die dopaminerge neuronale Schädigung und der Dopaminspiegel. TLR4, NF-κB, IL-1β und TNF-α wurden ebenfalls gemessen. Es zeigte sich, dass LPS (60 μg/ml, Endkonzentration) Toxizität im Zebrafisch induzierte und motorische Dysfunktionen und Schäden an Tyrosinhydroxylase (TH)-positiven Neuronen verursachte. Die LPS-Exposition verringerte nicht nur den Dopamingehalt, sondern erhöhte auch die Spiegel von IL-1β, TNF-α und die Expression von TLR4 und NF-κB. HSYA verbesserte die LPS-induzierte motorische Dysfunktion. Darüber hinaus schwächte HSYA den Verlust von TH-positiven Neuronen ab, was mit einem Anstieg des Dopamingehalts einherging. Die HSYA-Behandlung hemmte auch die Expression von TLR4, NF-κB und die Produktion von IL-1β, TNF-α. Zusammenfassend zeigt diese Studie, dass HSYA entzündungsinduzierte Schädigungen in dopaminergen Neuronen des Zebrafisches abschwächt, indem es den TLR4/NF-κB-Signalweg reguliert, was eine experimentelle Grundlage für die Prävention von entzündlichen Schädigungen bei Parkinson bietet.

Einleitung

Die Pathogenese der Parkinson-Krankheit (PD) ist die Verschlechterung der motorischen Aktivität aufgrund einer Verletzung dopaminerger Neuronen im Gehirn. Zu den Manifestationen der Parkinson-Krankheit gehören motorische Dysfunktionen, einschließlich Ruhetremor, Bradykinesie, Haltungsinstabilität und Muskeltonus. Entzündungen sind ein markantes pathologisches Kennzeichen der Parkinson-Krankheit. Die Zytokinspiegel in der Zerebrospinalflüssigkeit und in postmortalen nigrostriatalen Hirnregionen von Personen mit Parkinson sind im Vergleich zu altersgleichen gesunden Kontrollpersonen erhöht¹. Die Mechanismen, durc....

Protokoll

Die Versuche wurden in Übereinstimmung mit den Richtlinien der National Institutes of Health für die Verwendung von Labortieren (Veröffentlichung 86-23, überarbeitet 1986) durchgeführt. Und diese Studie wurde vom Animal Care and Use Committee der Yantai University (YTDX20220623) genehmigt. Die in dieser Studie verwendeten Reagenzien und Geräte sind in der Materialtabelle aufgeführt.

1. Pflege des Zebrafisches

Zebrafische des Stammes AB (Danio rerio) wurden in einem Umlaufwassersystem bei einer Wassertemperatur von 27-28,5 °C (pH 7,0) in einem 14/10....

Ergebnisse

Auswirkungen von LPS auf die motorische Funktion des Zebrafisches
Die mittlere Geschwindigkeit, die Gesamtstrecke und die maximale Beschleunigung des Zebrafisches in der LPS-Gruppe (60 μg/ml und 90 μg/ml) waren im Vergleich zur Kontrollgruppe reduziert (P < 0,01). Die motorische Dysfunktion äußerte sich auch in häufigen Änderungen der Bewegungsrichtung. Der absolute Drehwinkel des Schwimmens von Zebrafischen in den Gruppen LPS 60 μg/mL und LPS 90 μg/mL war .......

Diskussion

Heilpflanzen haben eine lange Erfolgsgeschichte bei entzündungshemmenden und neuroprotektiven Anwendungen¹⁴. Unsere früheren Studien zeigten, dass HSYA in Tiermodellen, die durch neurotoxische Wirkstoffe induziert wurden, eine schützende Wirkung hatte. Unter Verwendung der LPS-induzierten Toxizität im Zebrafisch zeigt diese Studie, dass HSYA die entzündungsinduzierte Schädigung in dopaminergen Neuronen des Zebrafisches abschwächt, indem es den TLR4/NF-κB-Signalweg.......

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
BCA-Proteinkonzentration -Messkit	Beyotime Biotechnology	P0012S
Chemilumineszenz-Bildgebungssystem	Beijing Sage Venture Technology Co.	ChampChemi 910
Dopaminhydrochlorid	Sigma– Aldrich	PHR1090
Elektronische Waage	Shanghai OHAUS Instrument Co.	AR-2140
ELISA-Kits für IL-1β	COIBO Biotechnology	CB10018-FI
ELISA-Kits für TNF-α	COIBO Biotechnologie	CB10148-FI
GAPDH Antikörper	Zellsignalisierungstechnologie	5174S
GraphPad Prism 5.0	GraphPad statistische Software, Boston, MA, USA, www.graphpad.com	Prism 5.0
Hochleistungs-Flüssig Chromatographie– Elektrochemisch Detektion (HPLC– ECD)	GL Sciences, Ibaraki, Japan	ED723
Hochgeschwindigkeits-Gefrierzentrifuge	Beijing Dalong Xingchuang Experimental Instrument Co.	D3024R
HPLC– ECD	GL Sciences	ED723
HSYA	Luye Pharma Group Ltd.
Image Quant	GE Healthcare, Tokio, Japan	LAS 4000
Lamin B1 Antikörper	Zellsignaltechnologie	13435S
LPS	Sigma– Aldrich	L2630
Mikroskop	Leica, Wetzlar	DM1000LED
Mikroskop	Leica, Deutschland	DM1000LED
Multifunktionaler Enzymmarkierer	Shanghai Meigu Molecular Instrument Co.	SpectraMax Paradigm
NF-κ B Antikörper	Zellsignaltechnologie	8242S
Noldus Visual Vision XT System	Beijing Noldus Biotechnology Co., Ltd.	EthoVision XT15
Nuklear- und Zytoplasma Proteinextraktionskit	Beyotime Biotechnology	P0028
PMSF	Beyotime Biotechnology	ST506
TAK-242	Merck	614316
Thermostat	Shenzhen Galaxy Instrumentation Co.
TLR4-Antikörper	Abcam	ab13556
Zebrafisch	Nördliches Zentrum für National Zebrafisch Model Animals	AB Stamm
Zebrafisch-Kreislaufwassersystem	Beijing Aisheng Biotechnology Co., Ltd.	ESEN-AW-S1

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