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Forschungsartikel

Hydroxysafflor Yellow A schwächt die LPS-induzierte Toxizität in dopaminergen Neuronen des Zebrafisches ab, indem es den TLR4/NF-ĸB-Signalweg reguliert

620 Ansichten

DOI:

10.3791/68314

18. Juli 2025

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Ziel dieses Protokolls ist es, zu testen, ob Hydroxysafflorgelb A (HSYA) die LPS-induzierte Neurotoxizität beim Zebrafisch abschwächt. Die motorische Funktion wurde mit Hilfe eines Visual Vision Systems bewertet. Die dopaminerge Nervenschädigung wurde immunhistochemisch untersucht. Moleküle, die am TLR4/NF-κB-Signalweg beteiligt sind, wurden mittels Western Blot analysiert.

Zusammenfassung

Lipopolysaccharid (LPS)-induzierte Entzündungen spielen eine entscheidende Rolle bei der Auslösung und Aufrechterhaltung der neurodegenerativen Erkrankungen, einschließlich der Parkinson-Krankheit (PD). Hydroxysafflorgelb A (HSYA) ist der Hauptbestandteil von Carthamus tinctorius L.. In dieser Studie soll beobachtet werden, ob HSYA die LPS-induzierte Toxizität in dopaminergen Neuronen von Zebrafischen verbessern kann. Zebrafische wurden LPS ausgesetzt und dann mit HSYA behandelt. Es wurden Verhaltenstests durchgeführt, um die motorische Funktion von Zebrafischen zu bewerten. Untersucht wurden die dopaminerge neuronale Schädigung und der Dopaminspiegel. TLR4, NF-κB, IL-1β und TNF-α wurden ebenfalls gemessen. Es zeigte sich, dass LPS (60 μg/ml, Endkonzentration) Toxizität im Zebrafisch induzierte und motorische Dysfunktionen und Schäden an Tyrosinhydroxylase (TH)-positiven Neuronen verursachte. Die LPS-Exposition verringerte nicht nur den Dopamingehalt, sondern erhöhte auch die Spiegel von IL-1β, TNF-α und die Expression von TLR4 und NF-κB. HSYA verbesserte die LPS-induzierte motorische Dysfunktion. Darüber hinaus schwächte HSYA den Verlust von TH-positiven Neuronen ab, was mit einem Anstieg des Dopamingehalts einherging. Die HSYA-Behandlung hemmte auch die Expression von TLR4, NF-κB und die Produktion von IL-1β, TNF-α. Zusammenfassend zeigt diese Studie, dass HSYA entzündungsinduzierte Schädigungen in dopaminergen Neuronen des Zebrafisches abschwächt, indem es den TLR4/NF-κB-Signalweg reguliert, was eine experimentelle Grundlage für die Prävention von entzündlichen Schädigungen bei Parkinson bietet.

Einleitung

Die Pathogenese der Parkinson-Krankheit (PD) ist die Verschlechterung der motorischen Aktivität aufgrund einer Verletzung dopaminerger Neuronen im Gehirn. Zu den Manifestationen der Parkinson-Krankheit gehören motorische Dysfunktionen, einschließlich Ruhetremor, Bradykinesie, Haltungsinstabilität und Muskeltonus. Entzündungen sind ein markantes pathologisches Kennzeichen der Parkinson-Krankheit. Die Zytokinspiegel in der Zerebrospinalflüssigkeit und in postmortalen nigrostriatalen Hirnregionen von Personen mit Parkinson sind im Vergleich zu altersgleichen gesunden Kontrollpersonen erhöht1. Die Mechanismen, durch die dopaminerge neuronale Schädigungen durch Entzündungen verursacht werden, sind gut bekannt. Bei Parkinson reagieren dopaminerge Neuronen des Mittelhirns empfindlich auf Zytokine wie den Tumornekrosefaktor (TNF)-ɑ2. Lipopolysaccharid (LPS) ist ein Bestandteil von Bakterien. LPS wird als Ligand des Toll-like-Rezeptors 4 (TLR-4) identifiziert. Sobald LPS an TLR-4 bindet, führt es zu einer Entzündungsreaktion und zeigt Toxizität für das Gewebe. TLR-4 befindet sich auf Mikroglia im Zentralnervensystem. LPS aktiviert TLR-4 und produziert daher TNF-α und IL-1β. Die zentrale oder periphere Exposition gegenüber LPS führt zu einer Toxizität für das Zentralnervensystem. Es gibt Hinweise darauf, dass LPS-induzierte Toxizität eine Rolle bei der Auslösung und Aufrechterhaltung der neurodegenerativen Erkrankungen, einschließlich PD 3,4,5, spielt.

In jüngster Zeit wird der Zebrafisch häufig als Modell für die Untersuchung von Erkrankungen des Nervensystems verwendet. Zebrafisch und Mensch haben eine genetische Homologie von 80 %. Und Zebrafische haben fast die gleiche Anzahl an Chromosomen wie der Mensch. Darüber hinaus ähneln die Hauptstruktur des Gehirns des Zebrafisches und seine Signalwege denen von Säugetieren. Zebrafische können auch eine große Anzahl transparenter Embryonen produzieren, sich schnell entwickeln und sind anfällig für genetische Manipulationen6. Diese Vorteile machen den Zebrafisch zu einem hervorragenden Modell für die Untersuchung der Pathogenese der Parkinson-Krankheit und die Entwicklung eines Hochdurchsatz-Wirkstoffscreenings bei der Parkinson-Krankheit.

Hydroxysafflorgelb A (HSYA) ist ein Hauptbestandteil von Carthamus tinctorius L. Frühere Studien haben gezeigt, dass HSYA entzündungshemmende Eigenschaften hat. In primären mesencephalen Kulturen zeigte HSYA bei 20 μM bis 640 μM keine Toxizität. Und HSYA-Konzentrationen im Bereich von 40 μM bis 640 μM reduzierten LPS-induzierte dopaminerge neuronale Schäden7. C57BL/6J-Mäuse wurden 6-Hydroxydopamin ausgesetzt, um ein Modell der Parkinson-Krankheit zu induzieren. HSYA schwächt nicht nur eine beeinträchtigte neurologische Funktion ab, sondern schützt auch dopaminerge Neuronen im Gehirn. Darüber hinaus reduzierte HSYA die Expression von Cyclooxygenase-2, induzierbarer Stickstoffmonoxid-Synthase und NF-κB in der Substantia nigra8.

Bisher gibt es keine Berichte, die die Eigenschaft von HSYA belegen, die Toxizität von LPS in vivo zu reduzieren. Es zeigte sich, dass HSYA die LPS-induzierte Toxizität in vitro abschwächte 7. Die zellbasierte Bewertung bildet jedoch nicht alle Schritte des komplexen Prozesses der Neurotoxizität ab. Zebrafische erweisen sich als besonders wertvoll, um den Mechanismus der Toxizität zu entschlüsseln. In den letzten Jahren wurde auch gezeigt, dass HSYA in der Lage ist, die Aktivierung des NF-κB-Entzündungswegs zu hemmen, indem es die Expression der Proteinkinase B verringert, wodurch die Entzündungsreaktion verbessert wird, und dass HSYA auch den Aktivatorprotein-1-assoziierten Entzündungssignalweg hemmt, der die Zellproliferation und die Tumornekrosefaktor α-induzierte Entzündungsschädigung beeinflusst9, 10. Urheberrecht In dieser Studie soll untersucht werden, ob HYSA die LPS-induzierte Toxizität in dopaminergen Neuronen von Zebrafischen verbessern kann.

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Protokoll

Die Versuche wurden in Übereinstimmung mit den Richtlinien der National Institutes of Health für die Verwendung von Labortieren (Veröffentlichung 86-23, überarbeitet 1986) durchgeführt. Und diese Studie wurde vom Animal Care and Use Committee der Yantai University (YTDX20220623) genehmigt. Die in dieser Studie verwendeten Reagenzien und Geräte sind in der Materialtabelle aufgeführt.

1. Pflege des Zebrafisches

Zebrafische des Stammes AB (Danio rerio) wurden in einem Umlaufwassersystem bei einer Wassertemperatur von 27-28,5 °C (pH 7,0) in einem 14/10 h Hell-Dunkel-Zyklus gehalten. Die Zebrafische wurden zweimal täglich mit Garnelen gefüttert. Nach der natürlichen Paarung wurden befruchtete Embryonen in Petrischalen gesammelt, die E3-Medium mit deionisiertem Wasser, KCl, NaCl, MgSO4·7H2O und CaCl2 enthielten.

2. LPS-induzierte Toxizität beim Zebrafisch

Zebrafischembryonen 24 h nach der Befruchtung (hpf) wurden entnommen und mit 60 Embryonen in jeder Gruppe der Kontroll- und LPS-Gruppen zugeteilt. Das LPS-Pulver wurde gewogen und zu einer bestimmten Menge PBS-Lösung (pH = 7,4) zur Auflösung gegeben, die als 2 mg/ml LPS-Stammlösung hergestellt und zur Lagerung und zum Standby-Modus in -20 °C gebracht wurde. Während des Experiments wurde die LPS-Reservelösung auf 30 μg/ml, 60 μg/ml und 90 μg/ml LPS-Lösung verdünnt. LPS-Lösung in einer Endkonzentration von 30 μg/ml, 60 μg/ml oder 90 μg/ml wurde in Petrischalen gegeben, die 24 hpf-Zebrafischembryonen enthielten; Das Lösungsvolumen für jede experimentelle Vertiefung betrug 3 ml. In der Kontrollgruppe wurden Zebrafischembryonen in E3-Medium ohne LPS kultiviert. Petrischalen wurden in eine Inkubationskammer mit konstanter Temperatur bei 28 °C gestellt. Die Exposition gegenüber LPS wurde nach dem oben genannten Verfahren an fünf aufeinanderfolgenden Tagen wiederholt.

3. Wirkung des TLR4-Inhibitors auf die LPS-induzierte Toxizität beim Zebrafisch

Zebrafischembryonen mit 24 hpf wurden Kontroll-, LPS- und TAK-242-Gruppen zugeordnet. Es wurde eine Reihe von Studien durchgeführt, um die regulatorische Wirkung von TAK-242 bei einer Endkonzentration von 1 μM auf die Regulation des TLR4-Signalwegs zu validieren, darunter einige Studien, die gezeigt haben, dass TAK-242 durch die Hemmung der LPS-induzierten Zellproliferation und der Freisetzung von Entzündungsfaktoren einen neuen Weg zur Lösung der Probleme im Zusammenhang mit der Verringerung des Glaukoms in der postoperativen Phase bietet11. In der TAK-242-Gruppe wurde TAK-242 (1 μM, Endkonzentration) in eine Petrischale mit 24 hpf-Zebrafischembryonen gegeben; Das Lösungsvolumen für jede experimentelle Vertiefung betrug 3 ml. Nach 30 min wurde LPS (60 μg/ml, Endkonzentration) zugegeben, um Toxizität zu induzieren, und die LPS-Konzentrationen führten nicht zum Tod von Zebrafischen. Die Embryonen in der Kontrollgruppe wurden nur in E3-Medium gehalten. Petrischalen wurden in eine Inkubationskammer mit konstanter Temperatur bei 28 °C gestellt. Das obige Verfahren wurde an fünf aufeinanderfolgenden Tagen wiederholt.

4. Wirkung von HSYA auf die LPS-induzierte Toxizität beim Zebrafisch

Zebrafischembryonen mit 24 hpf wurden Kontroll-, LPS- und HSYA-Gruppen zugeordnet. HSYA in einer Endkonzentration von 20 μM, 40 μM oder 80 μM wurde in Petrischalen mit 24 hpf-Zebrafischembryonen gegeben; Das Lösungsvolumen für jede experimentelle Vertiefung betrug 3 ml. Nach 30 min wurde LPS (60 μg/ml, Endkonzentration) zugegeben. Die Embryonen in der Kontrollgruppe wurden nur in E3-Medium gehalten. Petrischalen wurden in eine Inkubationskammer mit konstanter Temperatur bei 28 °C gestellt. Das obige Verfahren wurde an fünf aufeinanderfolgenden Tagen wiederholt.

5. Bewertung des Verhaltens

Die Zebrafische wurden in die mittleren 60 Vertiefungen einer 96-Vertiefungsplatte umgesiedelt, wobei pro Vertiefung eine Zebrafischlarve zu sehen war. In jede Vertiefung wurde E3-Kulturmedium (250 μl) gegeben, um ein freies Schwimmen zu ermöglichen. Die lokomotorische Aktivität wurde mit Hilfe eines Bildverarbeitungssystems erfasst. In die dunkle Box (30 cm × 40 cm × 60 cm) wurde reines Wasser gegeben, die auf einen Heizzustand mit einer auf 28 °C eingestellten Temperatur versetzt wurde.

Sobald die Temperatur der Darkbox 28 °C erreicht hatte, wurde die 96-Well-Platte mit dem Zebrafisch hineingelegt und das Visual Vision-System aktiviert, um die Bewegungsaktivität aufzuzeichnen. Es wurde ein neuer Ordner erstellt, in dem die Daten gespeichert werden. Als Videoquelle wurde die hausgemachte Videodatei ausgewählt, um die Benutzeroberfläche für die experimentellen Einstellungen aufzurufen. Im Abschnitt "Experimenteinstellungen " wurde die Anzahl der Beobachtungszonen auf 60 festgelegt, so dass 60 Zebrafische gleichzeitig beobachtet werden konnten. In den Arena-Einstellungen erschien das Bild der 96-Well-Platte, das vom Objektiv aufgenommen wurde, zusammen mit Positionierungskreisen auf dem Bildschirm. Die Module in der Benutzeroberfläche "Arenen arrangieren " wurden so angepasst, dass der Linsenerfassungsbereich an den einzelnen Vertiefungen ausgerichtet ist. Im Arena-Hardware-Mapping wurde das Darkbox-Licht auf Licht an gesetzt.

In den Einstellungen für die Versuchssteuerung wurde ein neues Programm mit einer Vorbereitungszeit von 10 Minuten und einer Nachweisdauer von 10 Minuten erstellt, das dann auf alle parallelen Experimente angewendet wurde. Die Erkennungseinstellungen wurden verwendet, um zu bestätigen, dass die Objektivaufnahmefunktion normal funktioniert. In der Versuchsliste wurden Daten von 60 Zebrafischen in jeder Gruppe angezeigt. Die Anzahl der Versuche in der Symbolleiste wurde verwendet, um eine Datentabelle mit allen Versuchsgruppen zu erstellen, um die Vollständigkeit der Daten zu gewährleisten.

Alle Einstellungen wurden bestätigt und die Temperatur der Dark Box bei 28 °C gehalten. Nachdem überprüft worden war, dass jede Vertiefung einen Zebrafisch mit Vitalparametern enthielt, wurde das Experiment eingeleitet. Während des Experiments zeichnete die Linse des Verhaltensinstruments die Bewegungsbahn, die Dauer und die damit verbundenen Parameter auf. Nach 20 Minuten nach der ersten Aufzeichnung beendete sich das System automatisch und bereitete sich auf den nächsten Versuch vor. Die dunkle Box wurde geöffnet und die 96-Well-Platte durch eine neue mit Zebrafischen für das nachfolgende Experiment ersetzt.

Am Ende des Experiments wurde die Option Ergebnisse aus dem Analysemodul ausgewählt. Experimentelle Parameter wie Durchschnittsgeschwindigkeit, Abstand, maximale Beschleunigung und absoluter Lenkwinkel wurden aus dem Ergebnismodul extrahiert und exportiert. Die Daten wurden dann für die Analyse von Verhaltensunterschieden zwischen Zebrafischgruppen zusammengestellt12.

6. Messung von proinflammatorischen Zytokinen

Zebrafische wurden gesammelt. Die Proben wurden gewogen und PBS (0,01 M, pH = 7,4) in einem gravimetrischen Verhältnis von 1:9 zugegeben und bei 4 °C homogenisiert (5000 U/min, 30 s). Die Homogenate wurden bei 4 °C, 5000 x g, 20 min zentrifugiert und die Überstände geerntet. IL-1β und TNF-α wurden mit Fisch-ELISA-Kits gemäß den Anweisungen des Herstellers untersucht.

7. Immunhistochemie

Zebrafische wurden mit 5 mL 4% (v/v) Paraformaldehyd fixiert. In Paraffin eingebettet und 5 μm dicke Abschnitte schneiden. Die Schnitte wurden mit Citratpuffer (200 μl) in der Mikrowelle für 10 min inkubiert. Sie wurden 30 Minuten lang in 0,3%iger Wasserstoffperoxid- und Methanollösung inkubiert, um endogene Peroxidasen zu blockieren. 3 mal mit PBS gewaschen, jeweils 5 Minuten. Das nicht-immune Serum wurde 30 Minuten lang bei 37 ºC inkubiert. Der primäre Anti-TH-Antikörper (1:100) wurde 30 Minuten lang bei 37 ºC inkubiert. 3-mal mit PBS gewaschen. Inkubiert mit einem Sekundärantikörper in Verbindung mit Meerrettichperoxidase (1:200) bei 37 ºC für 30 Minuten. Dann wurde 3,3'-Diaminodbenzidin zugegeben. Die Schnitte wurden mit einem Hellfeldmikroskop abgebildet.

8. Neurotransmitter

Zur Bestimmung des Dopaminspiegels wurde HPLC-ECD eingesetzt. Dopaminhydrochlorid wurde in 0,1 M Perchlorsäure (HClO4) gelöst, um eine Konzentrationsgradientenlösung bei 3,90625 ng/ml, 7,8125 ng/ml, 15,625 ng/ml, 31,25 ng/ml, 62,5 ng/ml und 125 ng/ml zu erhalten. Eine Reihe von Dopamin-Standardlösungen wurde mittels HPLC-ECD analysiert. Die lineare Regression wurde unter Verwendung der Dopaminkonzentration und der Dopamin-Peakfläche durchgeführt. Es wurde eine Standardkurve gezeichnet. Zebrafischgewebe wurden mit 0,1 M HClO413 homogenisiert. Die Homogenate wurden bei 4 °C, 20.000 x g, 15 min zentrifugiert. Anschließend wurden die Proben auf einer ODS2-Säule (E2118047; 4,6 × 250 mm, 5 μm) getrennt. Es wurde ein Puffer hergestellt: 25 mmol/l Natriumacetat, 25 mmol/l Zitronensäure, 0,01 mmol/l Ethylendiamintetraessigsäure, Dinatriumsalz, 1 mmol/l Natrium-1-octansulfonat und Essigsäure, pH-Wert eingestellt auf 3,35. Die mobile Phase war Acetonitril: Puffer (1:9, v/v). Nach der Vakuumfiltration mit einer 0,22 μm Filtermembran wurde die Probe durch Ultraschallentgasung für 10 min entgast. Die Temperatur des Säulenofens betrug 30 °C. Die Flussrate betrug 1 mL/min. Die Probe wurde mit einem Volumen von 20 μl injiziert. Der elektrochemische Detektor wurde mit einer Spannung von 1000 mV und einem Bereich von 10 μA betrieben. Die Menge an Dopamin im Gewebe von Zebrafischen wurde auf der Grundlage der Regressionsgleichung berechnet.

9. Westlicher Blot

Die Proteine wurden aus dem Gewebe des Zebrafisches extrahiert und die Konzentration bestimmt (Endkonzentration: 10 mg/ml). Proteine (50 μg/5 μl) wurden einer 8%igen Natriumdodecylsulfat-Polyacrylamid-Gelelektrophorese unterzogen. Die Transfermembran wurde 1 h lang bei 110 V geführt. Die Membranen wurden 1 h lang mit 5 % Milch verstopft. Inkubiert bei 4 °C mit primären Antikörpern: Kaninchen-Anti-TLR4 (1:1000), Kaninchen-Anti-NF-κB (1:2000), Kaninchen-Anti-Lamin B1 (1:2000) oder Kaninchen-Anti-GAPDH (1:1000). Nach dem Waschen mit TBST (3 mal für je 5 min) wurden die Membranen 1 h lang mit Sekundärantikörpern inkubiert. Die Banden wurden mit einem ECL-Chemilumineszenz-Substrat-Kit visualisiert und mit einem Gel-Imaging-System quantifiziert. Als Ladekontrollen wurden Lamin B1 und GAPDH verwendet.

10. Statistische Auswertung

Alle Daten wurden als mittlere ± SD ausgedrückt und mit einer Statistiksoftware analysiert. Die statistischen Analysen wurden mit Hilfe der Einweg-Varianzanalyse (ANOVA) durchgeführt, gefolgt von dem Tukey-Test. Ein P-Wert von <0,05 war statistisch signifikant.

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Ergebnisse

Auswirkungen von LPS auf die motorische Funktion des Zebrafisches
Die mittlere Geschwindigkeit, die Gesamtstrecke und die maximale Beschleunigung des Zebrafisches in der LPS-Gruppe (60 μg/ml und 90 μg/ml) waren im Vergleich zur Kontrollgruppe reduziert (P < 0,01). Die motorische Dysfunktion äußerte sich auch in häufigen Änderungen der Bewegungsrichtung. Der absolute Drehwinkel des Schwimmens von Zebrafischen in den Gruppen LPS 60 μg/mL und LPS 90 μg/mL war ...

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Diskussion

Heilpflanzen haben eine lange Erfolgsgeschichte bei entzündungshemmenden und neuroprotektiven Anwendungen14. Unsere früheren Studien zeigten, dass HSYA in Tiermodellen, die durch neurotoxische Wirkstoffe induziert wurden, eine schützende Wirkung hatte. Unter Verwendung der LPS-induzierten Toxizität im Zebrafisch zeigt diese Studie, dass HSYA die entzündungsinduzierte Schädigung in dopaminergen Neuronen des Zebrafisches abschwächt, indem es den TLR4/NF-κB-Signalweg...

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Offenlegungen

Die Autoren erklären, dass keine Interessenkonflikte bestehen.

BEITRAG DES AUTORS:
Konzeptualisierung: Guirong Zhang, Bing Han. Akquise von Fördermitteln: Guirong Zhang, Bing Han. Ermittlungen: Huilin Zhang. Methodik: Huilin Zhang, Mingyue Li, Xiaohan Zhang, Yang Li. Betreuung: Guirong Zhang, Bing Han. Schreiben - ursprünglicher Entwurf: Mingyue Li, Xiaohan Zhang, Yang Li. Schreib-Review & Bearbeitung: Huilin Zhang, Guirong Zhang, Bing Han.

Danksagungen

Wir danken Rachel James für die Bearbeitung dieses Manuskripts. Diese Forschung wurde von der Natural Science Foundation der Provinz Shandong finanziert (Grant No. ZR2020MH377).

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Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
BCA-Proteinkonzentration
-Messkit
Beyotime BiotechnologyP0012S
Chemilumineszenz-BildgebungssystemBeijing Sage Venture Technology Co.ChampChemi 910
DopaminhydrochloridSigma– AldrichPHR1090
Elektronische WaageShanghai OHAUS Instrument Co.AR-2140
ELISA-Kits für IL-1βCOIBO BiotechnologyCB10018-FI
ELISA-Kits für TNF-αCOIBO BiotechnologieCB10148-FI
GAPDH AntikörperZellsignalisierungstechnologie5174S
GraphPad Prism 5.0GraphPad statistische Software, Boston,
MA, USA, www.graphpad.com
Prism 5.0
Hochleistungs-Flüssig
Chromatographie– Elektrochemisch
Detektion (HPLC– ECD)
GL Sciences, Ibaraki, JapanED723
Hochgeschwindigkeits-GefrierzentrifugeBeijing Dalong Xingchuang
Experimental Instrument Co.
D3024R
HPLC– ECDGL SciencesED723
HSYALuye Pharma Group Ltd.
Image QuantGE Healthcare, Tokio, JapanLAS 4000
Lamin B1 AntikörperZellsignaltechnologie13435S
LPSSigma– AldrichL2630
MikroskopLeica, WetzlarDM1000LED
MikroskopLeica, DeutschlandDM1000LED
Multifunktionaler EnzymmarkiererShanghai Meigu Molecular Instrument Co.SpectraMax Paradigm
NF-κ B AntikörperZellsignaltechnologie8242S
Noldus Visual Vision XT SystemBeijing Noldus Biotechnology Co., Ltd.EthoVision XT15
Nuklear- und Zytoplasma
Proteinextraktionskit
Beyotime BiotechnologyP0028
PMSFBeyotime BiotechnologyST506
TAK-242Merck614316
ThermostatShenzhen Galaxy Instrumentation Co.
TLR4-AntikörperAbcamab13556
ZebrafischNördliches Zentrum für National
Zebrafisch Model Animals
AB Stamm
Zebrafisch-KreislaufwassersystemBeijing Aisheng Biotechnology Co., Ltd.ESEN-AW-S1
LY20220612810129

Referenzen

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Nachdrucke und Genehmigungen

Schlagwörter

Zebrafisch ModellTLR4 SignalisierungNF KappaB SignalwegParkinson KrankheitNeuroinflammationDopaminspiegelmotorische Dysfunktion
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