Hydroxyl Safflower Yellow A (HSYA) mildert Kniearthrose, indem es die Autophagie und Proliferation der Chondrozyten verbessert und gleichzeitig die Apoptose und Entzündung über die Hemmung des HIF-1α/BNIP3-Signalwegs unterdrückt.
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Forschungsartikel
Hydroxyl Safflower Yellow A (HSYA) mildert Kniearthrose, indem es die Autophagie und Proliferation der Chondrozyten verbessert und gleichzeitig die Apoptose und Entzündung über die Hemmung des HIF-1α/BNIP3-Signalwegs unterdrückt.
Die Verringerung der Autophagie im Knorpelgewebe ist eng mit der Entwicklung der Kniearthrose (KOA) verbunden, doch die Mechanismen, durch die Hydroxyldistelgelb A (HSYA) schützende Wirkungen ausübt, sind noch unvollständig verstanden. In dieser Studie wurden humane KOA-Chondrozyten isoliert und verschiedenen Behandlungsgruppen zugeordnet, darunter Normalkontrolle, Blindmodell, HSYA, Hypoxie-induzierbarer Faktor-1α (HIF-1α)-Inhibitor, Autophagie-Induktor, HSYA in Kombination mit HIF-1α-Inhibitor und HSYA in Kombination mit Autophagie-Induktor. Proinflammatorische Zytokine (IL-1β, TNF-α, IL-6) wurden mittels ELISA quantifiziert, die Proteinexpression von HIF-1α, BNIP3 und Autophagie-bezogenen Markern wurde mittels Western Blot untersucht, und autophagische Vesikel in Mitochondrien wurden mittels Monodansylcadaverin-Färbung und Transmissionselektronenmikroskopie bewertet. Im Vergleich zur normalen Kontrolle zeigte die Blind-Modellgruppe signifikant erhöhte Spiegel von IL-1β, TNF-α, IL-6 und HIF-1α, begleitet von höheren Apoptoseraten, verminderter Proliferation und Herunterregulierung von Autophagie-verwandten Proteinen (P < 0,05). Die Behandlung mit HSYA, HIF-1α-Inhibitor oder Autophagie-Induktor führte zu einer signifikanten Hochregulierung der Autophagie-bezogenen Proteinexpression und reduzierten die entzündlichen Zytokinspiegel. Darüber hinaus führte HSYA in Kombination mit einem HIF-1α-Inhibitor oder Autophagie-Induktor zu den ausgeprägtesten Effekten, mit einer deutlichen Verringerung der Zytokinfreisetzung und Apoptose, zusammen mit einer erhöhten Chondrozytenproliferation und mitochondrialen autophagischen Vesikelbildung (P < 0,05). Diese Ergebnisse zeigen, dass HSYA bei KOA zumindest teilweise chondroprotektive Wirkungen ausübt, indem es den HIF-1α/BNIP3-Signalweg hemmt, wodurch die Autophagie gefördert und die entzündliche Schädigung der Chondrozyten abgeschwächt wird.
Als weit verbreitete chronische orthopädische Erkrankung betrifft Kniearthrose (KOA) Menschen mittleren Alters und ältere Menschen und beeinträchtigt deren Lebensqualität erheblich 1,2. Trotz ihres weit verbreiteten Auftretens sind die genaue Ätiologie und die pathophysiologischen Mechanismen, die der KOA zugrunde liegen, nach wie vor unvollständig verstanden. Darüber hinaus unterstreicht sowohl für die Prävention als auch für die kurative Behandlung die Dringlichkeit, die komplizierten pathologischen Grundlagen dieser Erkrankung zu enträtseln. Ein Bereich von aufkommendem Interesse ist die Rolle der Autophagie bei der Knorpelhomöostase, wobei sich die Hinweise häufen, dass eine reduzierte Autophagie im Knorpelgewebe zu dessen Degeneration bei KOA beiträgt 3,4.
Die Autophagie, ein zellulärer Abbauprozess, der für die Aufrechterhaltung der zellulären Homöostase unerlässlich ist, ist von großer Bedeutung für die Erhaltung und Reparatur des Knorpels. In der hypoxischen Mikroumgebung, die im Gelenkknorpel vorherrscht, zeigt sich der Hypoxie-induzierbare Faktor 1α (HIF-1α)/Adenovirus E1B 19 kDa interacting protein 3 (BNIP3) Signalweg als zentraler Regulator der Autophagie. Bei KOA-Patienten wurde eine erhöhte HIF-1α-Expression beobachtet, was darauf hindeutet, dass eine Dysregulation dieses Signalwegs zu einer gestörten Autophagie und einer anschließenden Knorpeldegeneration beitragen kann 5,6,7.
Akupunktur, Moxibustion, Kräuter und Massage sind vier klassische Methoden der traditionellen chinesischen Medizin zur Behandlung von Kniearthrose. Die derzeitigen Behandlungen, wie z. B. nichtsteroidale entzündungshemmende Medikamente, Hyaluronsäure-Injektionen und Endoprothesen, haben sich als hilfreich erwiesen, sind aber auch mit bestimmten Nebenwirkungen verbunden8. Darüber hinaus gibt es keine empfohlene Routinebehandlung für Kniearthrose. Im Laufe der Zeit hat die Traditionelle Chinesische Medizin (TCM) als gängige ergänzende Therapie für KOA zahlreiche pflanzliche Heilmittel entwickelt, die bei der Behandlung von KOAvielversprechend sind 9. Unter diesen hat Hydroxyldistelgelb A aufgrund seiner entzündungshemmenden und autophagiemodulierenden Eigenschaften große Aufmerksamkeit erregt10,11. Die genauen Mechanismen, durch die HSYA seinen therapeutischen Einfluss auf die Kniearthrose (KOA) ausübt, insbesondere im Hinblick auf die Regulation der Autophagie über den HIF-1α/BNIP3-Signalweg, bleiben jedoch ungewiss. Daher untersuchen wir den Mechanismus der therapeutischen Wirkung von HSYA bei KOA, indem wir uns auf ihren Einfluss auf die Chondrozyten-Autophagie und ihre Interaktion mit dem HIF-1α/BNIP3-Signalweg konzentrieren. Wir vermuten, dass HSYA die Kniearthrose abschwächt, indem es die Autophagie und Proliferation der Chondrozyten verbessert und gleichzeitig die Apoptose und Entzündung über die Hemmung des HIF-1α/BNIP3-Signalwegs unterdrückt.
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Alle Verfahren, bei denen menschliche Proben verwendet werden, wurden von der Ethikkommission des Zhanjiang Central People's Hospital genehmigt (Zulassungs-Nr. KY-YS-2021-09). Vor der Probenentnahme wurde von allen Teilnehmern eine schriftliche Einverständniserklärung eingeholt. Die verwendeten Reagenzien und die verwendeten Geräte sind in der Materialtabelle aufgeführt.
1. Patienten und Studiendesign
Es wurden dreißig Patienten rekrutiert, bei denen Kniearthrose (KOA) diagnostiziert wurde und die sich einer Knie-Totalendoprothetik unterzogen. Die Kohorte umfasste 14 Männer und 16 Frauen im Alter von 52 bis 75 Jahren (mittlere ± SD: 64,3 ± 12,6 Jahre), die alle die KOA-Kriterien des American College of Rheumatologyerfüllten 12. Patienten wurden ausgeschlossen, wenn sie innerhalb von 2 Wochen vor der Operation nichtsteroidale Antirheumatika oder Steroide oder intraartikuläre Injektionen innerhalb von 1 Monat erhalten hatten.
2. Primäre Chondrozytenkultur
Der Gelenkknorpel wurde unmittelbar nach der Operation unter sterilen Bedingungen entnommen und in kaltes PBS gelegt. Mit sterilen Skalpellen wurde der Knorpel auf einer eiskalten Glasplatte in ~1 mm³ große Fragmente geschnitten und in ein 50 mL Zentrifugenröhrchen mit 10 mL 0,25% Trypsin-EDTA überführt. Das Röhrchen wurde 30 Minuten lang in einem 37 °C heißen Schüttelwasserbad bei 80 U/min inkubiert und alle 5 Minuten vorsichtig umgedreht, um die Verdauung zu erleichtern. Der Überstand wurde aspiriert, und das Gewebepellet wurde einmal mit PBS gewaschen und bei 200 × g für 5 min zentrifugiert. Das Pellet wurde dann in 10 ml 0,02 % Typ-II-Kollagenase resuspendiert und bei 37 °C für 4 h unter Schütteln verdaut. Die Suspension wurde alle 30 Minuten auf und ab pipettiert, um die Dissoziation zu fördern, durch ein 70-μm-Sieb geleitet und erneut bei 200 × g für 5 Minuten zentrifugiert. Das resultierende Pellet wurde in DMEM, ergänzt mit 10 % FBS, 100 μg/ml Penicillin und 100 μg/ml Streptomycin, resuspendiert und in T25-Kolben ausgesät. Die Zellen wurden bei 37 °C mit 5 % CO2 inkubiert, das Medium wurde alle 2-3 Tage ausgetauscht und Zellen aus den Passagen 1-2 wurden für Experimente verwendet. Zu den Versuchsgruppen gehörten die Normalkontrolle, das Blindmodell, HSYA (100 μmol/L), der HIF-1α-Inhibitor YC-1 (10 μmol/L), Rapamycin (10 nmol/L), HSYA + YC-1 und HSYA + Rapamycin.
3. siRNA-vermittelter HIF-lα, BNIP3-Knockdown
Primäre Chondrozyten wurden in 6-Well-Platten mit 2-5 × 105 Zellen/Well ausgesät und bei 37 °C kultiviert, bis sie eine Konfluenz von 30 % bis 50 % erreichten. Für jede Vertiefung wurden 5 μl 20 μM siRNA in 250 μl Opti-MEM verdünnt, und 5 μl lipidbasiertes Transfektionsreagenz wurden separat in 250 μl Opti-MEM verdünnt. Die beiden Lösungen wurden schonend gemischt und 15-20 min bei Raumtemperatur zu Komplexen inkubiert. Das Kulturmedium wurde durch 1,5 mL frisches DMEM mit 10 % FBS ersetzt, und der siRNA-Lipid-Komplex (500 μL) wurde tropfenweise entlang der Well-Wand unter sanftem Schwenken zugegeben. Die Zellen wurden 6 Stunden lang inkubiert, das Medium wurde durch vollständiges Medium ersetzt und die Kultur wurde für 48-72 Stunden fortgesetzt. Die Knockdown-Effizienz wurde durch qRT-PCR und Western Blot vor weiteren Behandlungen verifiziert.
4. ELISA
Zellkulturüberstände wurden gesammelt, 5 Minuten lang bei 200 × g zentrifugiert und bei Bedarf 1:2 in Assay-Puffer verdünnt. Es wurden ELISA-Kits für IL-1β, TNF-α und IL-6 gemäß dem Protokoll des Herstellers verwendet. Standards, Blindproben und Proben wurden in dreifacher Ausfertigung durchgeführt. Nach der Substratreaktion wurde die Absorption bei 450 nm mit einem Mikroplatten-Reader innerhalb von 15 min gemessen.
5. MTT-Assay
Chondrozyten wurden in 96-Well-Platten mit 5.000 Zellen/Well in 100 μl vollständigem Medium ausgesät und für 0 h, 24 h, 48 h oder 72 h inkubiert. Zu jedem Zeitpunkt wurden 20 μl MTT-Lösung (5 mg/ml in PBS) direkt in jede Vertiefung gegeben, und die Platten wurden 30 Minuten lang bei 37 °C inkubiert, bis violette Formazankristalle am Boden der Vertiefungen sichtbar wurden. Der Überstand wurde vorsichtig aspiriert, ohne die Kristalle zu stören, 150 μl DMSO wurden in jede Vertiefung gegeben, und die Platten wurden 10 Minuten lang bei 100 U/min auf einen Schüttler gelegt, um die Kristalle vollständig aufzulösen. Die Extinktion wurde bei 490 nm mit einem Mikroplatten-Reader gemessen. Die kurze Inkubationszeit wurde gewählt, um eine Signalsättigung in hochmetabolisch aktiven Zellen zu vermeiden.
6. Durchflusszytometrie
Die Zellen wurden durch Trypsinisierung geerntet, 5 Minuten lang bei 200 × g zentrifugiert und zweimal mit kaltem PBS gewaschen. Sie wurden in 500 μl Bindungspuffer bei ~1 × 106 Zellen/ml resuspendiert, und es wurden 5 μl Annexin V-FITC und 5 μl PI hinzugefügt. Nach schonendem Mischen wurden die Zellen 15 Minuten lang bei Raumtemperatur im Dunkeln inkubiert. Die Proben wurden auf einem Durchflusszytometer analysiert, wobei mindestens 10.000 Ereignisse pro Probe erfasst wurden (Anregung 488 nm, Emission FITC 530/30 nm, PI > 600 nm). Apoptotische Zellen wurden mit Hilfe von Standardsoftware quantifiziert.
7. Westliche Blotting
Die Zellen wurden zweimal mit kaltem PBS gespült und in 200 μl RIPA-Puffer mit Proteaseinhibitoren auf Eis für 30 Minuten lysiert. Die Zellen wurden mit einem Kunststoffschaber abgeschabt, auf und ab pipettiert, um die Viskosität zu reduzieren, und 10 Minuten lang bei 4 °C bei 12.000 × g zentrifugiert. Es wurden Überstände gesammelt und die Proteinkonzentrationen mit dem BCA-Assay gemessen. Gleiche Mengen Protein (30 μg) wurden mit 5× Ladepuffer gemischt, 5 min lang auf 95 °C erhitzt und auf 10%-12% SDS-PAGE-Gelen getrennt. Die Elektrophorese wurde bei 80 V für das Stapeln und 120 V für die Trennung durchgeführt, und die Proteine wurden 90 Minuten lang bei 300 mA auf PVDF-Membranen übertragen. Die Membranen wurden in 5 % fettfreier Milch für 1 h bei Raumtemperatur blockiert und über Nacht bei 4 °C mit Primärantikörpern (1:1.000) inkubiert. Nach drei Waschgängen mit TBST wurden die Membranen mit HRP-konjugierten Sekundärantikörpern (1:5.000) für 1 h bei Raumtemperatur inkubiert. Die Proteinbanden wurden mit einem ECL-Substrat sichtbar gemacht und mit einem Chemilumineszenz-Detektionssystem mit einer Exposition von 30-120 s abgebildet. Die Bandenintensitäten wurden mit ImageJ quantifiziert, und GAPDH wurde als Belastungskontrolle verwendet.
8. Färbung von Monodansylcadaverin (MDC)
Unmittelbar vor der Verwendung wurde aus der Stammlösung eine 50 μM MDC-Arbeitslösung hergestellt. Die Zellen wurden 10 Minuten lang bei Raumtemperatur mit 1 ml 4 % Paraformaldehyd fixiert, zweimal mit PBS gewaschen und 30 Minuten lang bei 37 °C im Dunkeln mit 500 μl MDC-Arbeitslösung inkubiert. Nach zwei Waschgängen mit PBS wurden Deckgläser mit Antifading-Eindeckmedium montiert und unter einem Fluoreszenzmikroskop (Anregung 355 nm, Emission 512 nm) betrachtet.
9. Transmissionselektronenmikroskop (TEM)
Die Zellen wurden geerntet und durch Zentrifugation bei 200 × g für 5 min pelletiert und dann über Nacht in 2 % Glutaraldehyd bei 4 °C fixiert. Die Proben wurden dreimal jeweils 5 Minuten lang mit PBS gewaschen und 1 h lang bei 4 °C in einem Abzug in 1 % Osmiumtetroxid nachfixiert. Die Dehydratisierung wurde durch eine abgestufte Acetonreihe von 30 %, 50 %, 70 %, 90 % und 100 % für jeweils 10 Minuten durchgeführt. Die Proben wurden 1 h lang mit 1:1 Aceton/Epoxidharz infiltriert und anschließend über Nacht mit reinem Harz infiltriert. Die Einbettung erfolgte in frisches Harz und polymerisierte bei 60 °C für 48 h. Ultradünne Schnitte von 50-70 nm wurden mit einem Ultramikrotom geschnitten, auf 200-Mesh-Kupfergitter montiert, 30 min lang mit 2 % Uranylacetat gefärbt, gefolgt von Bleicitrat für 15 min, mit destilliertem Wasser gewaschen, an der Luft getrocknet und unter einem Transmissionselektronenmikroskop bei 80 kV untersucht. Als Sicherheitshinweis: Glutaraldehyd und Osmiumtetroxid sind giftig und flüchtig und dürfen nur in einem Abzug mit Handschuhen und Schutzbrille gehandhabt werden. Abfälle sollten in ausgewiesenen gefährlichen Behältern gemäß den institutionellen Sicherheitsprotokollen entsorgt werden.
10. Statistische Auswertung
Alle Experimente wurden in dreifacher Ausfertigung durchgeführt. Die Daten werden als Mittelwert ± SD ausgedrückt. Die statistische Signifikanz wurde mittels Einweg-ANOVA und anschließendem LSD-Post-hoc-Test bewertet, wobei P < 0,05 als signifikant angesehen wurde.
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Die Wirkung von HSYA auf die Expression von proinflammatorischen Zytokinen (IL-1β, TNF-α, IL-6) von Chondrozyten
Im Vergleich zur normalen Kontrollgruppe zeigten alle anderen Gruppen signifikant erhöhte Spiegel an proinflammatorischen Zytokinen (IL-1β, TNF-α und IL-6) (P < 0,05, Tabelle 1, Abbildung 1A-G). Die Behandlung mit HSYA, HIF-1α-Inhibitor, Autophagie-Induktor, HSYA + HIF-1α-Inhibitor oder HSYA + Autophagie-Ind...
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Osteoarthritis (OA), eine weit verbreitete chronische Erkrankung, beeinträchtigt die Lebensqualität der Patienten erheblich. Unter den verschiedenen OA-Subtypen ist KOA die häufigste und trägt zur weltweiten Krankheitslast bei. Trotz der hohen Inzidenz sind die genaue Ätiologie und die zugrundeliegenden pathophysiologischen Mechanismen der KOA nach wie vor schwer fassbar. Das komplizierte Zusammenspiel zwischen mechanischen und biochemischen Prozessen im Gelenkknorpel, insbesondere die R...
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Die Autoren erklären, dass keine konkurrierenden Interessen bestehen.
Diese Arbeit wurde vom Büro für Traditionelle Chinesische Medizin der Provinz Guangdong unterstützt
(Grant Nr. 20221446).
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| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| 1 % Osmiumtetroxid | Elektronenmikroskopiewissenschaften | 19150 | Weitere Fixierungen und Färbungsproben für TEM-Analysen |
| 2 % Glutaraldehyd | Sigma-Aldrich | G5882 | Fixiert Zellen für die TEM-Probenvorbereitung |
| 4 % Paraformaldehyd | Servicebio | G1101 | Fixiert Zellen für MDC-Färbung und TEM-Probevorbereitung |
| AG1478 | Selleck Corporation | S1005 | 20 mg/kg intravenöse Injektion, ErbB-Rezeptor-Kinase-Inhibitor im Rattenmodell |
| Annexin V-FITC/PI Apoptose-Detektions-Kit | Biosumpf | BS3030 | Färbt apoptotische Zellen zur Nachweis der Durchflusszytometrie |
| Autophagie-Induktor (RAPA) | Sigma Corporation | R0395 | Rapamycin, Autophagie-Induktor, verwendet bei 10 nmol/L in Chondrozytenexperimenten |
| Beclin1-Antikörper | Santa Cruz Biotechnologie | SC-48341 | Primärer Antikörper für den Nachweis von Autophagie-bezogenen Proteinen im Western-Blot Beclin1 |
| BNIP3-Antikörper | Santa Cruz Biotechnologie | SC-517348 | Primärer Antikörper zur Western-Blot-Detektion von BNIP3 |
| Kohlendioxid-Inkubator | Yiheng | BPN-150CW | für Zellkultur |
| Dimethylsulfoxid (DMSO) | Sigma-Aldrich | D2650 | Löst Formazan-Kristalle im MTT-Test auf |
| DMEM | Beyotime | C0001 | Zellkulturmedium, ergänzt mit 10 % FBS für die Chondrozytenkultur |
| ELISA-Mikroplattenleser | Thermo Fisher Scientific | Multiskan FC | Misst OD-Werte in ELISA- und MTT-Assays |
| Verbessertes Chemilumineszenz-(ECL)-Reagenz | Thermo Fisher Scientific | 32106 | Visualisiert Proteinbänder im Western Blot |
| Epoxidharz (EPON812) | Elektronenmikroskopiewissenschaften | 14120 | Eingebettete Proben für TEM-Sektionierung |
| FBS | Beyotime | C0205 | Fetales Rinderserum, dem DMEM zur Ernährung der Chondrozyten hinzugefügt |
| Durchflusszytometer | Beckman (erwähnt wegen Apoptose) | CytoFLEX S | Erkennt Apoptose-Rate und zelluläre Marker bei Chondrozyten |
| Fluoreszenzmikroskop | Olymp | IX73 | Beobachtet MDC-gefärbte autophagische Vesikel |
| Gel-Bildgebungssystem | Bio-Rad | ChemiDoc XRS+ | Erfasst und quantifiziert Proteinbänder aus dem Westlichen Blot |
| HIF-1α Antikörper | Santa Cruz Biotechnologie | SC-13515 | Primärer Antikörper zur Western-Blot-Detektion von HIF-1 & Alpha; |
| HIF-1α Inhibitor (YC-1) | Selleck Corporation | S1047 | HIF-1α Weginhibitor, verwendet bei 10 & mu; mol/L in Zellexperimenten |
| Hochgeschwindigkeits-Kühlzentrifuge | Eppendorf | 5430R | Verwendet zum Trennen von Komponenten |
| HRP-konjugierter sekundärer Antikörper | Jackson ImmunoResearch | 115-035-003 | Bindet primäre Antikörper für die Signalverstärkung im Western Blot |
| IL-1β ELISA-Trikot | Shenggong-Biologie | C5236 | Quantifiziert IL-1 & Beta; Spiegel in Zellsupernatanten mittels ELISA |
| IL-6 ELISA-Kit | Shenggong-Biologie | C5237 | Quantifiziert IL-6-Spiegel in Zellsupernatanten mittels ELISA |
| LC3-Antikörper | Santa Cruz Biotechnologie | SC-398822 | Primärer Antikörper für den Nachweis von Autophagie-bezogenen Proteinen LC3 im Western-Blot |
| Lipofektamin 3000-Reagenz | Thermo Fisher Scientific | L3000001 | lipidbasiertes Transfektionsreagenz für Tansfektion |
| Monodansylcadaverin (MDC) | Sigma-Aldrich | D4008 | 0,05 mol/L, färbt autophagische Vesikel für die Fluoreszenzmikroskopie |
| MTT-Reagenz | Beyotime | C0009 | 0,5 mg/mL, verwendet im MTT-Test zur Beurteilung der Chondrozytenproliferation |
| NanoDrop 2000 | Thermo Fisher Scientific | ND-1000 | Bestimmung der RNA-Konzentration |
| NRG1 ELISA-Kit | Abcam (Großbritannien) | ab213961 | Misst die NRG1-Konzentration im Herzgewebe mittels ELISA |
| P62-Antikörper | Santa Cruz Biotechnologie | SC-28359 | Primärer Antikörper zur Western-Blot-Detektion des autophagiebezogenen Proteins P62 |
| Phosphorylierter ErbB4 (p-ErbB4) Antikörper | Affinität | AF3445 | Primärer Antikörper zur Western-Blot-Detektion aktivierten ErbB4 |
| PrimeScript RT Reagenz-Kit | Takara | RR047A | RNA-Reverse-Transkription zur Bereitstellung von Vorlagen für das qPCR-Experiment |
| Echtzeit-quantitatives PCR-System | Bio-Rad | CFX96 | für RT-PCR-Detektion |
| Rekombinantes humanes NRG1 (rh-NRG1) | R& D-Systeme | 396-HB | 5 mg/kg intravenöse Injektion zur Aktivierung des NRG1/ErbB4-Weges im Rattenmodell |
| RIPA-Puffer | Meilunbio | MA0151 | Lysepuffer mit Protease-/Phosphataseinhibitoren zur Proteinextraktion |
| Safflower Yellow A (HSYA) | Chengdu Mansit Biotechnology Co., Ltd. | Must-160601 | Bioaktiver Bestandteil von Carthamus tinctorius L., verwendet bei 100 μ mol/L zur Chondrozytenbehandlung |
| SDS-PAGE-Ausrüstung | Bio-Rad | Mini-PROTEAN Tetra | Trennt Proteine nach Molekulargewicht im Western Blot |
| TB Green Premix Ex Taq II | Takara | RR820A | für das qPCR-Experiment |
| TNF-α ELISA-Trikot | Shenggong-Biologie | C5238 | Quantifiziert TNF-& Alpha; Spiegel in Zellsupernatanten mittels ELISA |
| Gesamt-ErbB4-Antikörper | Proteintech | 19943-1-AP | Primärer Antikörper zur Western-Blot-Detektion von Gesamt-ErbB4 |
| Transmissionselektronenmikroskop (TEM) | Hitachi (erwähnt für autophagische Vesikel) | H-7650 | Beobachtet autophagische Vesikel in Mitochondrien auf ultrastruktureller Ebene |
| Trizolreagenz | Thermo Fisher Scientific | 15596026 | für RNA-Extraktion |
| Trypsin-EDTA | Gibco (Thermofischer) | 25200056 | Verwendet zur enzymatischen Verdauung von Gelenkknorpel zur Isolierung von Chondrozyten |
| Typ-II-Kollagenase (0,02 %) | Worthington Biochemical | CLS-2 | Verdaut Knorpelgewebe zur Chondrozytenisolierung |
| β-Catenin-Antikörper | Santa Cruz Biotechnologie | SC-7963 | Interner Referenzantikörper für Westlich-Blot-Normalisierung |
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