Hier zeigen wir ein Verfahren zur Induktion und Aufzeichnung des Fortschritts einer verzögerten Typ-Überempfindlichkeit (DTH)-Reaktion bei der Ratte Ohr. Dies wird durch eine Demonstration der Vorbereitung der Ratte Ohrgewebe für Zwei-Photonen-Imaging der Effektor / Memory T-Zell-Antwort folgte.
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Methodenartikel
Imaging Effektor-Memory-T-Zellen im Ohr nach Induktion der Adoptive DTH
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Verzögerte Überempfindlichkeitsreaktionen (DTH) ist eine Immun-Reaktion, bei der die wichtigsten Akteure sind CCR7 - Effektor / Memory T-Lymphozyten. Hier zeigen wir ein Verfahren zur Induktion und Aufzeichnung des Fortschritts einer DTH-Reaktion bei der Ratte Ohr. Effektor / Memory T-Zell-Antwort - Dies ist eine Demonstration der Zubereitung von Ratten Ohrgewebe für Zwei-Photonen-Imaging der CCR7 gefolgt.
Effektor / Memory T-Zell-Linie (Beeton, C J. Visualisierte Experimente, Issue 8) - Ein Adoptiv-DTH wird durch die intraperitoneale Injektion von GFP-markierten Ova-spezifische CCR7 induziert. Die Zellen werden dann erlaubt, bei der Ratte für 48 Stunden ruhen, bevor Herausforderung durch die Injektion von einem Ohr mit Kochsalzlösung (Kontrollgruppe Ohr) und die andere mit einem 1:1-Mischung von Eizellen und Ova konjugiert Texas-Red (Ova-TR) zur Visualisierung ermöglichen der ansässigen Antigen-präsentierenden Zellen.
Wir beschreiben eine Methode, Gewebe Vorbereitung nützlich für die Bildgebung die Motilität von Zellen in den tiefen Hautschichten während einer Immunantwort in Verbindung mit Visualisierung von Kollagenfasern durch Erzeugung der zweiten Harmonischen. Ear Gewebe in 5 x 5 mm Quadrate (etwas größer ist besser) geschnitten und auf Kunststoff Deckgläser mit Vetbond ™, die dann gesichert werden mit Silikonfett in einem bildgebenden Kammer und superfundiert durch Sauerstoff-Blasen Gewebekultur-Medium bei 37 ° C .
Protokoll
Induktion von Adoptive DTH
Bitte beachten Sie JoVE Artikel: Induktion und Überwachung von Adoptive Allergien vom verzögerten Typ in Ratten
Christine Beeton, George K. Chandy
Institut für Physiologie und Biophysik, University of California, Irvine
J. Visualisierte Experimente, Issue 8
Hier haben wir dieses Protokoll mit Antigen (Ovalbumin), konjugiert mit Texas-Red in einem Verhältnis von 1:1 mit unmarkiertem Antigen um zur Visualisierung von Phagozyten Antigen-präsentierenden Zellen können modifiziert werden.
Ohrge....
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Referenzen
- Koo, G. C., et al. Blockade of the voltage-gated potassium channel Kv1.3 inhibits immune responses in vivo. J Immunol. 158, 5120-5128 (1997).
- Gaga, M., Frew, A. J., Varney, V. A., Kay, A. B.
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Nachdrucke und Genehmigungen
