Name: Mausmodell der hinteren Gliedmaßen Ischämie (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-01-21T00:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 51 s
Description: Lernen Sie die chirurgische Induktion einer einseitigen Hintergliedmaßenischämie bei Mäusen durch Femoralarterienligatur. Dieses zuverlässige Modell ermöglicht die Untersuchung peripherer arterieller Verschlusskrankheit und vaskulärer Regeneration.

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Die Autoren danken Andrea Axtell, Satoshi Itoh, MD, Jeff Velotta, MD, Grant Hoyt, Robert C. Robbins, MD, Jin Yu, MD, Tim Doyle, PhD, und die Stanford Small Animal Imaging Core für die technische Unterstützung. Die Autoren danken AM Bickford, Inc. für die Unterstützung der tierärztlichen Einrichtungen. Diese Arbeit wurde durch Forschungsstipendien der National Institutes of Health (R01 HL-75774, R01 CA098303, R21 HL085743, 1K12 HL087746), der California Tobacco Related Disease Research Program der University of California (15IT-0257 und 1514RT-0169) unterstützt und das California Institute for Regenerative Medicine (RS1-00183). NH wird durch ein Stipendium der American Heart Association unterstützt.

1. Induktion von Einseitige Hinterlauf Ischämie <ol><li> Die chirurgische Instrumente für diese Operation erforderlich sind: feine spitzen Pinzette, spitzen Pinzette, Schere Frühjahr, chirurgische Scheren, Nadelhalter und Haken. Wir machen unsere eigene Retraktor mit einer Büroklammer, da es kleiner als handelsübliche Haken ist. Sterilisieren diese Tools vor der Operation durch ein Autoklav oder ein Hot-Bead-Sterilisator. Ein Kauter Werkzeug und sterile feinen spitzen Wattestäbchen wird auch für diese Operation erforderlich sein. Es wird empfohlen, dass die Werkzeuge an den Spitzen als während des Verfahrens benötigt erneut sterilisiert werden. </li><li> Wenn die Werkzeuge bereit sind, platzieren Sie den Mauszeiger in die Narkose Kammer mit 1-3% Isofluran in 100% Sauerstoff bei einer Durchflussrate von 1l/min. </li><li> Lassen Sie die Maus in die Induktion Kammer, bis es reagiert auf äußere Reize ist. Dann entfernen Sie das Tier von der Induktion Kammer. Es wird empfohlen, das Narkosemittel aus dem Karton vor bündig mit der Deckelöffnung, zur Verringerung der Exposition zu Isofluran zu verringern. </li><li> Dann legen Sie das Tier in Rückenlage auf den pre-OP-Tisch und verbinden Sie es mit einem kontinuierlichen Fluss von Isofluran. Mit einem elektrischen Rasierer, entfernen Sie die Haare aus dem hinteren Gliedmaßen. Bewerben Enthaarungscreme gründlich zu entfernen Haare. </li><li> Platzieren Sie die Maus in Rückenlage über einen drapiert Heizkissen auf dem OP-Tisch, und verbinden Sie es mit einem kontinuierlichen Fluss von Isofluran. Erweitern und sichere das Hinterbein mit einem Stück Klebeband. Sobald das Hinterbein ist sicher, wischen Sie die Haut mit drei wechselnden betadine und Alkohol scheuert. Für den Rest des chirurgischen Eingriffs, verwenden Sie einen Dissektionsmikroskop bei 10X oder 20X Vergrößerung, um eine vergrößerte Ansicht der Hinterlauf Region zu erhalten. </li><li> Mit feinen Pinzetten und chirurgische Schere, einen Einschnitt der Haut, ca. 1 cm lang, vom Knie zum medialen Oberschenkel. </li><li> Mit Phosphat-gepufferter Kochsalzlösung (PBS)-befeuchteten feinen spitzen Wattestäbchen vorsichtig wegzuwischen subkutane Fettgewebe um die Oberschenkelmuskulatur. </li><li> Next gelten die Brenneisen quer zur incise und sezieren durch das subkutane Fettgewebe die zugrunde liegenden Oberschenkelarterie offenbaren. </li><li> Verwenden Sie einen Haken, um die Wunde zu öffnen und einen besseren Blick auf die untere Extremität Gefäßsystem zu erhalten. </li><li> Mit feinen Zange und einem feinen zeigte Wattestäbchen vorsichtig durchstoßen die membranöse femoral Mantel der neurovaskulären Bündel freizulegen. </li><li> Dann mit einem sauberen Satz von feinen Pinzette und Wattestäbchen, sezieren und trennen Sie die Femoralarterie aus der V. femoralis und Nerven am proximalen Lage in der Nähe der Leiste. Nach der Präparation, übergeben Sie einen Strang von 7-0 Seidenfaden unter dem proximalen Ende der Femoralarterie. Verschließen den proximalen A. femoralis mit doppelseitigem Knoten. Legen Sie die Krawatte auf dem Schiff als proximal in die Wunde wie möglich, um Länge für die zweite Krawatte und eine dazwischen liegende Segment, das durchtrennt werden zu lassen. </li><li> Trennen Sie die Femoralarterie aus der V. femoralis am distalen Lage in der Nähe des Knies. Pass ein Strang von 7-0 Naht unterhalb des distalen Endes der Femoralarterie proximal der A. poplitea. Verschließen das Gefäß mit doppelten Knoten. </li><li> Verschließen distalen A. femoralis mit einem zweiten Satz der doppelten Knoten genau proximal der erste Satz von Knoten. Dieser zweite Satz der Nähte wird zum Greifen der Arterie während der Transaktion Verfahren verwendet werden. </li><li> Auch zum Greifen Zwecke, verschließen den proximalen A. femoralis mit einem zweiten Satz der doppelten Knoten unmittelbar distal der erste Satz von Knoten. </li><li> Transect Segment der Femoralarterie zwischen den distalen und proximalen Knoten mit einer feinen spitzen Wattestäbchen und ein Paar Frühling Schere. Seien Sie vorsichtig, nicht zu durchbohren die Vena femoralis Wand. </li><li> Entfernen Sie den Haken und schließen Sie den Schnitt mit 5-0 Vicryl Nahtmaterial. Diese Nähte müssen nicht zu einem späteren Zeitpunkt entfernt werden, da sie sich auflösen auf eigene Faust. </li><li> Sobald der Schnitt wird geschlossen, statt das Tier auf einem drapierten Heizkissen in die Erholung Käfig und überwachen kontinuierlich bis wach. </li><li> Nach Tier 1 Stunde wieder, mit der Laser-Doppler-Durchblutung Schritt fort, um die Ischämie-Induktion zu bestätigen. </li></ol> 2. Laser-Doppler-Durchblutung <ol><li> Zu Beginn der Laser-Doppler-Perfusion Schritt legen Sie die Maus in die Narkose Kammer mit 1-3% Isofluran in 100% Sauerstoff bei einer Durchflussrate von 1l/min. </li><li> Lassen Sie die Maus in die Induktion Kammer, bis es reagiert auf äußere Reize ist. Dann entfernen Sie das Tier von der Induktion Kammer. Es wird empfohlen, das Narkosemittel aus dem Karton vor bündig mit der Deckelöffnung, zur Verringerung der Exposition zu Isofluran zu verringern. </li><li> Legen Sie das Tier auf der Pre-OP-Tisch verbunden kontinuierlichen Fluss von Isofluran. Dann entfernen Sie die Haare aus dem hinteren Gliedmaßen mit einem elektrischen Rasierer von Enthaarungscreme als notwendig an. </li><li> Nach dem Entfernen der Haare,Ort des Tieres auf einem 37 ° C erwärmten Oberfläche für 5 Minuten unter kontinuierlichem Fluss von Isofluran. Überwachen Sie die Kerntemperatur euthermia zu gewährleisten, wie Temperaturschwankungen deutlich beeinflussen wird Perfusion. </li><li> Nach 5 Minuten, legen Sie das Tier in Rückenlage auf eine nicht reflektierende Licht absorbierende Oberfläche, z. B. grün-buntes Tuch, verbunden mit einem kontinuierlichen Fluss von Isofluran. Verlängern Sie die Hinterbeine. </li><li> Als nächstes auf der Laser-Doppler-Imager und die Erfassungs-Software ab und initialisiert die Software. Geben Sie die Größe des Sichtfeldes und Auflösung. Am besten ist es immer das Sichtfeld und Pixeldichte konsequente zwischen Tieren, damit eine spätere Analyse zu erleichtern. </li><li> Öffnen Sie eine neue Datei. Drücken Sie Start, um mit dem Erwerb der Bilddaten. Im Allgemeinen die Imager erkennt automatisch die Entfernung von der Maus, aber wenn Sie dazu aufgefordert werden, geben die Entfernung des Tieres auf die Imager. Der Laser zeigt die Grenzen des Gesichtsfeldes und starten Sie dann Daten erfasst. </li><li> Nach Übernahme abgeschlossen ist, wird das Bild zunächst auf eine Reihe von Farben, die bezeichnend für das Niveau der Durchblutung der Beine zu zeigen. Die Farben können auf einen bestimmten Perfusion Bereich eingestellt werden, um besser vergleichen Daten zwischen den Tieren. </li><li> Wenn die Datenerfassung abgeschlossen ist, speichern Sie die Datei. </li><li> Dann wieder das Tier zur Erholung Käfig und Überwachung der Tiere kontinuierlich bis wach. </li><li> Um die Daten analysieren, verwenden Sie die Schwelle Anpassung in der Analyse-Software, um alle Hintergrundgeräusche zu subtrahieren. Ein Schwellenwert von 0,2 ist in der Regel ein vernünftiger Wert. Wählen Sie 2-Regionen von Interesse, oder ROIs, dass jedes Hinterbein Bereich abdecken. Eine Vielzahl von Sehenswürdigkeiten können Sie den ROI zwischen Gliedmaßen und Tieren zu standardisieren. Dann die mittlere Perfusion und der Variabilität in den ROI. Die Perfusion Differenz und Perfusion Verhältnis zwischen der ischämischen Extremität und Kontrolle des Körpers können dann leicht bestimmt werden. </li><li> Dieser Vorgang kann wiederholt werden, um Veränderungen in der hinteren Gliedmaßen Perfusion im Laufe der Zeit zu folgen. Bei einem gewünschten Zeitpunkt kann das Tier für die Beurteilung von Gewebe-Funktion und der Vergleich mit Perfusion Bilddaten eingeschläfert werden. </li></ol> 3. Repräsentative Ergebnisse: Die Anatomie der Hinterlauf Gefäßsystem ist in Abbildung 1 2 gezeigt. Eine repräsentative Darstellung der Hinterlauf nach Femoralarterie Explantation ist in Abbildung 2 dargestellt. Um zu bestätigen, die Induktion der Ischämie auf die hinteren Gliedmaßen, zeigt Laser-Doppler-Perfusion Bildanalyse eine drastische Reduzierung der Durchblutung der ischämischen Extremität, im Vergleich zu der Kontrolle des Körpers, wie in Abbildung 3 dargestellt. <img src="/files/ftp_upload/old/1035_2009_1_26_9/figure1_1035.png" alt="Abbildung 1" width="600" height="406" /> Abbildung 1. Anatomy of the Hinterlauf Gefäßsystem. Sternchen zeigen die Standorte der Ligation für die Induktion der hinteren Gliedmaßen Ischämie. <img src="/files/ftp_upload/old/1035_2009_1_20_7/Niiyama_HLI_Fig2.png" alt="Bild 2" width="600" height="450" /> Abbildung 2. Representative Diagramm, welches die Anatomie der Hinterlauf nach Unterbindung der A. femoralis am proximalen und distalen Seiten, die nach der Entfernung der Femoralarterie. <img src="/files/ftp_upload/old/1035_2009_1_20_8/Niiyama_HLI_Fig3.png" alt="Abbildung 3" width="600" height="256" /> Abbildung 3. Laser-Doppler-Bildern, die zeigen Blutfluss, bevor und nachdem die Induktion von Ischämie der linken Hinterlauf (durch Pfeil gekennzeichnet).

<ol><li>Huang, N. F., Niiyama, H., De, A., Cooke, J. P., , <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplantation+and+non-invasive+tracking+of+embryonic+stem+cell-derived+endothelial+cells+for+treatment+of+hindlimb+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Transplantation and non-invasive tracking of embryonic stem cell-derived endothelial cells for treatment of hindlimb ischemia.</a> J Vis Exp. , (2008).</li>
<li>Cook, M. J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCook%2C+MJ+%22The+anatomy+of+the+laboratory+mouse%22">The anatomy of the laboratory mouse</a>. , Academic Press. New York. (1976).</li>
<li>Niiyama, H., Kai, H., Yamamoto, T., Shimada, T., Sasaki, K., Murohara, T., Egashira, K., Imaizumi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Roles+of+endogenous+monocyte+chemoattractant+protein-1+in+ischemia-induced+neovascularization%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Coll.+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Roles of endogenous monocyte chemoattractant protein-1 in ischemia-induced neovascularization.</a> J. Am. Coll. Cardiol. 44, 661-666 (2004).</li>
<li>Dokun, A. O., Keum, S., Hazarika, S., Li, Y., Lamonte, G. M., Wheeler, F., Marchuk, D. A., Annex, B. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+quantitative+trait+locus+%28LSq-1%29+on+mouse+chromosome+7+is+linked+to+the+absence+of+tissue+loss+after+surgical+hindlimb+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">A quantitative trait locus (LSq-1) on mouse chromosome 7 is linked to the absence of tissue loss after surgical hindlimb ischemia.</a> Circulation. 117, 1207-1215 (2008).</li>
</ol>

Es gibt einige Quellen der Variabilität zu berücksichtigen bei der Planung und Durchführung Hinterlauf Ischämie-Modellen. Erstens kann das Niveau der Ischämie nach dem Standort der Ligation in Bezug auf die von Seitenästen variieren. Daher ist für die Konsistenz des Modells sollten die Tiere erleiden das gleiche Maß an Arterienligatur. Eine weitere Quelle der Variabilität in ischämischen Erholung auf das Alter der Tiere ist im Zusammenhang mit jungen Tieren (6-8 Wochen alt) mit schneller und vollständiger Verwertungsquoten als ältere Tiere (8-10 Monate alt), geändert durch hämodynamische (dh beurteilt Laser-Doppler-Perfusion) oder funktionelle (dh Laufband Test) misst. Für Studien, in der man der Beurteilung eines Angiogenese-Medikament, kann es vorteilhaft sein, ältere Tiere zu verwenden, da ein größerer Unterschied zwischen den Gruppen mit einer therapeutischen Intervention beobachtet werden können. Umgekehrt gilt für Studien, in der man die Beurteilung einer anti-angiogenen Faktor ist, kann es vorteilhaft sein, jüngere Tiere zu verwenden, um Wirkung der Größe 3 zu maximieren. Wenn richtig ausgeführt, sollte es minimal Komplikationen wie Blutungen, Infektionen oder Sterblichkeit. Kommt es zu Blutungen durch zufällige Störungen der V. femoralis oder andere Schiffe, unter leichten Druck mit einem sterilen Wattestäbchen oder Mull auf der Website von Blutungen angewendet werden sollte, bis die Blutung aufhört. Tiere mit Anzeichen einer Infektion sollte mit Antiinfektiva behandelt werden. Tiere, die signifikante Gangrän kann beeuthanized müssen. Diese Komplikation ist häufiger bei älteren Tieren, und in einigen Stämmen, wie BALB c Mäusen 4. Darüber hinaus kann das Hinterbein Ischämie-Modell zu leichten bis mäßig starken Schmerzen. Daher sollten Analgetika wie Buprenorphin oder Carprofen verabreicht, wie für die Behandlung von Schmerz benötigt werden, entsprechend den Empfehlungen des IACUC. Zusammenfassend haben wir eine einfache und reproduzierbare Methode zur Untersuchung PAD in einem Mausmodell der hinteren Gliedmaßen Ischämie demonstriert. Die hinteren Gliedmaßen Ischämie-Modell mit Laser-Doppler-Imaging-Analyse ist ein ausgezeichnetes System zur Untersuchung von Gefäßerkrankungen und für die Beurteilung der therapeutischen Kandidaten.

<table><tbody><tr><td>Chirurgische Instrumente</td><td>Instrument</td><td>Fine Science Tools</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Constix Wattestäbchen</td><td>Instrument</td><td>Contec</td><td>SC-4</td><td></td></tr><tr><td>Betadine (Povidon-Jod)</td><td>Reagenz</td><td>PDI</td><td></td><td></td></tr><tr><td>70 % Alkohol</td><td>Reagenz</td><td>Kendall</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Phosphatgepufferte Kochsalzlösung</td><td>Reagenz</td><td>Invitrogen</td><td></td><td></td></tr><tr><td>7-0 Seidennaht</td><td>Instrument</td><td>Genzyme</td><td></td><td></td></tr><tr><td>5-0 Vicryl-Naht</td><td>Instrument</td><td>Ethicon Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Elektrischer Rasierer</td><td>Instrument</td><td>GE Healthcare</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Elektrokauter</td><td>Instrument</td><td>Baxter International Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Laser-Doppler- und PeriScan PIM 3-System</td><td>Gerät</td><td>Perimed</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

mausmodell der hinteren gliedmaßen ischämie

Murine Model of Hindlimb Ischemia 

In den Vereinigten Staaten betrifft periphere arterielle Verschlusskrankheit (pAVK) etwa 10 Millionen Menschen und ist auch weltweit verbreitet. Medizinische Therapien für symptomatische Linderung sind begrenzt. Chirurgische oder endovaskuläre Interventionen sind für einige Einzelpersonen nützlich, aber die langfristigen Ergebnisse sind oft enttäuschend. Als Ergebnis gibt es einen Bedarf für die Entwicklung neuer Therapien zur Behandlung von PAD. Die murine Hinterlauf Ischämie Vorbereitung ist ein Modell der PAD, und ist nützlich für die Erprobung neuer Therapien. Im Vergleich zu anderen Modellen der Gewebeischämie wie koronare oder zerebrale Arterienligation Vergleich bietet Femoralarterie Ligation für ein einfacheres Modell von ischämischem Gewebe. Weitere Vorteile dieses Modells sind die Leichtigkeit des Zugangs zu den Femoralarterie und niedrige Sterberate. In diesem Video zeigen wir die Methodik für die murine Modell der einseitigen hindimb Ischämie. Die spezifischen Materialien und Verfahren für die Erstellung und Auswertung des Modells beschrieben werden, einschließlich der Beurteilung der Extremitäten-Perfusion mittels Laser-Doppler-Bildgebung. Dieses Protokoll kann auch für die Transplantation und nicht-invasive Tracking von Zellen, die von Huang et al demonstriert. 1 genutzt werden.

Das chirurgische Verfahren zur Induktion einer einseitigen Hinterlauf Ischämie nachgewiesen wird, mit der Bestätigung der Ischämie durch Laser-Doppler-Perfusion.

Mausmodell der hinteren Gliedmaßen Ischämie

In den Vereinigten Staaten sind etwa 10 Millionen Menschen von der peripheren arteriellen Verschlusskrankheit (pAVK) betroffen, die auch weltweit weit verbreitet ist. Medizinische Therapien für ...

In den Vereinigten Staaten betrifft die periphere arterielle Verschlusskrankheit (PAD) etwa 10 Millionen Menschen, insbesondere Raucher, Diabetiker und Personen über 70 Jahre. Das Gesamtziel dieses chirurgischen Eingriffs besteht darin, eine Ischämie der Hintergliedmaßen durch Ligatur der proximalen und distalen Abschnitte der Arteria femoralis zu erzeugen. Das Verfahren beginnt mit der Anästhesie, der Rasur und der Positionierung der Maus auf dem Operationstisch in Rückenlage.Danach wird ein Hautschnitt vom Knie in Richtung des medialen Oberschenkels gemacht, wodurch die darunterliegende Arteria femoralis freigelegt wird. Anschließend wird die Arteria femoralis vorsichtig von der Vena femoralis abpräpariert. An der distalen Ligaturstelle sowie an der proximalen Ligaturstelle werden doppelte Knoten angelegt.Das Segment der Femoralarterie wird anschließend entfernt. Die Schnittstelle wird durch Nähte verschlossen, und das Tier darf sich von der Anästhesie erholen. Um die Induktion einer Hintergliedmaßen-Ischämie zu bestätigen, wird die anästhesierte Maus in Rückenlage positioniert.Danach werden beide Hintergliedmaßen mit dem Laser-Doppler gescannt. Das Bild wird anschließend gespeichert und auf die Perfusion hin beurteilt. Hallo, ich bin John Cook.Ich bin Professor für Medizin in der Abteilung für kardiovaskuläre Medizin an der Stanford University. Unser Labor beschäftigt sich mit Angiogenese und vaskulärer Regeneration. In diesem Video stellen Ihnen zwei meiner Postdoktoranden, Dr. Nan Wong und Hir Niyama, die Murine-Hintergliedmaßen-Ischämie-Präparation vor, ein wichtiges Modell für periphere arterielle Verschlusskrankheit, das in unserem Labor häufig verwendet wird, um die Wirkungen von Wachstumsfaktoren und Zelltherapien auf die Angiogenese zu untersuchen.Wir verwenden diese Verfahren in unserem Labor, um die Wirkung von aus Stammzellen abgeleiteten endothelialen Zellen auf die vaskuläre Reparatur zu untersuchen. Beginnen wir also. Die chirurgischen Instrumente, die für diesen Eingriff benötigt werden, umfassen feine spitze Pinzetten, spitze Pinzetten, Feder-Scheren, chirurgische Scheren, eine Nadelhalterin und einen Retraktor.Wir stellen unseren eigenen Retraktor aus einer Büroklammer her, da er kleiner ist als kommerziell erhältliche Modelle. Diese Instrumente müssen vor der Operation mit einem Heißperlen-Sterilisator sterilisiert werden; außerdem werden ein Kautergerät und sterile, feine Wattestäbchen für diesen Eingriff benötigt. Sobald die Instrumente bereitliegen, wird die Maus in die Narkoseinduktionskammer gegeben, die ein bis drei Prozent Isofluran in hundertprozentigem Sauerstoff bei einer Flussrate von einem Liter pro Minute enthält.Belassen Sie die Maus in der Induktionskammer, bis sie nicht mehr auf äußere Reize reagiert. Anschließend entfernen Sie das Tier aus der Induktionskammer. Danach bringen Sie das Tier in Rückenlage auf den Vorbereitungstisch und schließen es an einen kontinuierlichen Fluss von Isofluran an.Entfernen Sie mit einem elektrischen Rasierer die Haare vom Hinterbein. Tragen Sie Enthaarungscreme auf, um die Haare vollständig zu entfernen. Strecken und fixieren Sie nach dem Rasieren der Maus das Hinterbein mit einem Stück Klebeband.Wenn der Hinterlauf sicher fixiert ist, wischen Sie die Haut mit drei abwechselnden Betadine- und Alkoholabreibungen ab. Verwenden Sie feine Pinzette und chirurgische Schere, um einen etwa einen Zentimeter langen Schnitt in die Haut von der Kniegegend in Richtung medialer Oberschenkel vorzunehmen, wobei Sie phosphatgepufferte Kochsalzlösung verwenden. Mit PBS angefeuchtete und definierte spitze Wattestäbchen.Bürsten Sie vorsichtig das umgebende subkutane Fettgewebe des Oberschenkelmuskels weg. Anschließend führen Sie die Elektrokauterisierung quer in geeigneten Größen durch und dissezieren das subkutane Fettgewebe, um die darunterliegende A. femoralis freizulegen. Danach verwenden Sie einen Retraktor, um die Wunde zu öffnen und eine bessere Sicht auf die Gefäße der unteren Extremität zu erhalten.Unter Verwendung feiner Pinzette und eines fein zugespitzten Wattestäbchens wurde vorsichtig durch die membranöse Femoralhülle gestochen, um das neurovaskuläre Bündel freizulegen. Anschließend wurden mit einem sauberen Satz feiner Pinzette und Wattestäbchen die A. femoralis von der V. femoralis und dem Nervus femoralis an der proximalen Stelle nahe der Leiste präpariert und getrennt. Nach der Präparation wurde ein Faden aus sieben-ohm Seidensuture unter dem proximalen Ende der A. femoralis hindurchgeführt.Verschließen Sie die proximale A. femoralis durch doppelte Knoten. Platziern Sie die Ligatur so proximal wie möglich in der Wunde, um ausreichend Länge für die zweite Ligatur und ein dazwischenliegendes Segment, das durchtrennt wird, freizulassen. Trennen Sie die A. femoralis an der distalen Lokalisation nahe dem Knie von der V. femoralis ab.Führen Sie einen Faden aus 7-0-Nahtmaterial unterhalb des distalen Endes der Arteria femoralis proximal zur Arteria poplitea ein. Verschließen Sie das Gefäß durch Doppelknoten. Verschließen Sie die distale Arteria femoralis mit einem zweiten Satz Doppelknoten unmittelbar proximal zum ersten Knotensatz.Dieser zweite Satz von Nähten wird während des Transaktionsverfahrens zum Greifen der Arterie verwendet. Ebenfalls zum Greifen dient das Abklemmen der proximalen A. femoralis mit dem zweiten Satz doppelter Knoten unmittelbar distal zum ersten Knotensatz. Durchtrennen Sie das Segment der A. femoralis zwischen den distalen und proximalen Knoten mit einem fein-spitzigen Wattestäbchen und einer Feder-Schere. Achten Sie darauf, die Wand der Vena femoralis nicht zu durchbohren. Entfernen Sie den Retraktor und verschließen Sie den Schnitt mit fünf Einzelknopfnähten. Sobald der Schnitt verschlossen ist, bringen Sie das Tier in den Erholungskäfig zurück und überwachen Sie es, bis es wach ist. Nach einer Erholungszeit von einer Stunde führen Sie die Laser-Doppler-Perfusionsmessung durch. Schritt zur Bestätigung der Ischämieinduktion. Um den Laser-Doppler-Perfusionschritt zu beginnen, stellen Sie die Maus in eine Narkoseinduktionskammer mit ein bis 3 % Isofluran in hundertprozentigem Sauerstoff bei einer Strömungsrate von einem Liter pro Minute. Lassen Sie die Maus so lange in der Induktionskammer, bis sie nicht mehr auf äußere Reize reagiert.Entfernen Sie dann das Tier aus der Induktionskammer und legen Sie es auf den Vorbereitungstisch, der an einen kontinuierlichen Fluss von Isofluran angeschlossen ist. Entfernen Sie anschließend die Behaarung des Hinterbeins mit einem elektrischen Rasierer und gegebenenfalls zusätzlich mit Enthaarungscreme. Nach der Enthaarung wird das Tier für fünf Minuten auf eine auf 37 Grad Celsius beheizte Unterlage gelegt, während weiterhin Isofluran zugeführt wird.Nach fünf Minuten das Tier in Rückenlage auf eine nicht reflektierende, lichtabsorbierende Oberfläche bringen, beispielsweise ein grünes Tuch, das an einen kontinuierlichen Fluss von Iso-Fluorin angeschlossen ist. Die Hintergliedmaßen ausstrecken. Anschließend das Laser-Doppler-Imaging-Gerät und die Aufnahmesoftware einschalten und die Software initialisieren.Geben Sie die Größe des Sichtfelds und die Auflösung an. Es ist am besten, das Sichtfeld und die Pixeldichte zwischen den Tieren konsistent zu halten. Um die spätere Analyse zu erleichtern, öffnen Sie eine neue Datei.Drücken Sie „Start“, um mit der Erfassung der Bilddaten zu beginnen. Geben Sie bei Aufforderung den Abstand des Tieres zum Bildgeber an. Der Laser zeigt die Grenzen des Sichtfelds an und beginnt anschließend mit der Datenerfassung.Nach Abschluss der Datenaufnahme beginnt das Bild, eine Farbskala anzuzeigen, die auf das Ausmaß der Durchblutung der Beine hinweist. Die Farben können auf einen bestimmten Durchblutungsbereich eingestellt werden. Um die Daten zwischen Tieren besser vergleichen zu können, speichern Sie die Datei, nachdem die Datenaufnahme abgeschlossen ist, bringen Sie das Tier anschließend in den Erholungskäfig zurück und überwachen Sie es kontinuierlich, bis es wieder wach ist.Um die Daten zu analysieren, verwenden Sie die Schwellenwertanpassung in der Analysesoftware, um Hintergrundrauschen zu subtrahieren. Ein Schwellenwert von 0,2 ist gewöhnlich ein angemessener Wert. Wählen Sie zwei interessierende Bereiche oder ROIs aus, die jeweils den Bereich eines Hinterlaufs abdecken.Es können verschiedene anatomische Landmarken verwendet werden, um die ROI zwischen den Gliedmaßen und Tieren zu standardisieren und anschließend die mittlere Perfusion sowie die Variabilität innerhalb der ROI zu bestimmen. Die Perfusiondifferenz und das Perfusionverhältnis zwischen der ischämischen und der Kontrollgegend können dann einfach ermittelt werden. Dieses Verfahren kann wiederholt werden, um Veränderungen der Hintergliedmaßenperfusion zu verfolgen.Über einen gewünschten Zeitraum hinweg kann das Tier zu einem bestimmten Zeitpunkt euthanasiert werden, um die Gewebefunktion zu beurteilen. Im Vergleich zu Perfusionsbilddaten ist hier ein repräsentatives Diagramm des Hinterbeins nach Exstirpation der Arteria femoralis dargestellt. Die Nähte markieren die Positionen der proximalen und distalen Ligaturstellen.Wenn die Operation sorgfältig durchgeführt wird, tritt minimales Bluten auf und die Operation kann in weniger als einer Stunde abgeschlossen werden. Und hier sind die Ergebnisse der Laser-Doppler-Perfusionsbildanalyse. Das Bild links zeigt die Perfusion beider Gliedmaßen vor der ischämischen Induktion.Während das Bild rechts die starke Durchblutung beider Gliedmaßen zeigt, nachdem das linke Hinterglied ischämisch induziert wurde. Die Farbintensität im Bild zeigt die Menge des Blutflusses an.Im Vergleich zum Kontrollgliedmaßen zeigt das ischämische Glied eine deutlich geringere Färbung, was auf eine dramatische Verringerung des Blutflusses hindeutet. Mithilfe dieser Daten kann die Software die mittlere Perfusion in der ischämischen und der Kontrollgliedmaße quantifizieren, um den Perfusionunterschied und das Perfusionverhältnis zu bestimmen. Somit bestätigen diese Ergebnisse die Induktion einer Ischämie an der Hintergliedmaße.Wir haben Ihnen soeben gezeigt, wie man eine einseitige Hintergliedmaßen-Ischämie im Mausmodell induziert und die Induktion der Ischämie mittels Laser-Doppler-Durchblutungsanalyse bestätigt. Das Modell der Hintergliedmaßen-Ischämie in Kombination mit der Laser-Doppler-Bildanalyse ist ein hervorragendes System zur Untersuchung vaskulärer Pathologien und zur Bewertung therapeutischer Kandidaten. Diesem Verfahren kann die Transplantation und nichtinvasive Verfolgung von Zellen folgen, was in einem weiteren JoVE-Video von Huang et al. demonstriert wird.Bei Durchführung dieses Verfahrens ist darauf zu achten, vorsichtig vorzugehen, um bei der Entfernung der Arteria femoralis mit der Pinzette die Wand der Vena femoralis nicht zu verletzen. Verwenden Sie außerdem bei allen Tieren im Experiment denselben Ligationsort, um die Konsistenz des starken Ischämie-Modells zu gewährleisten. Das war's.Vielen Dank fürs Zuschauen und viel Erfolg bei Ihren Experimenten.

Research

Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

Der Mangel an Verständnis der Mechanismen des Rückenmarks Ischämie-Reperfusion Verletzungen hat weitere Zusätze behindert eine Querschnittslähmung nach Aorten-Operationen mit hohem Risiko zu verhindern. Somit ist die Entwicklung von Tiermodellen zwingend. Dieses Manuskript zeigt, reproduzierbare Lähmung der unteren Extremitäten nach Thorax Aortenokklusionsvorrichtung in einem Mausmodell.

Reproduzierbare Paraplegie von thorakalen Aorta Occlusion in einem Mausmodell der Spinal Cord Ischämie-Reperfusion

Wir stellen ein chirurgisches Verfahren, experimentelle Ischämie / Reperfusions (I / R) Schädigung induzieren Myokardinfarkt (MI) in Mausmodellen, die für mehr Klarheit in der Positionierung der Ligation an der linken vorderen absteigenden Arterie (LAD) simulieren können, um die Reproduzierbarkeit zu erhöhen MI Experimente in Mäusen.

Einem Mausmodell der myokardialen Ischämie-Reperfusion Injury durch Ligation des linken vorderen absteigenden Arterie

Die chirurgische Induktion der Ischämie der Hintergliedmaßen bei der Maus ist nützlich, um die Angiogenese zu untersuchen, jedoch ist dies bei bestimmten Inzucht-Mausstämmen, die eine ausgeprägte Ischämie-induzierte Gewebenekrose aufweisen, beeinträchtigt. Es werden Methoden zur Induktion einer subakuten Ischämie der Gliedmaßen unter Verwendung von Ameroid-Konstriktoren beschrieben, um dieses Problem durch die Induktion eines allmählichen arteriellen Verschlusses zu umgehen.

Methoden für die akute und subakute Murine hindlimb Ischemia

Wir beschreiben ein Mausmodell für einen Schlaganfall, der durch den Verschluss der mittleren Hirnarterie mit einer silikonbeschichteten Naht induziert wird. Das Protokoll kann angewendet werden, um einen dauerhaften Verschluss oder eine vorübergehende Ischämie mit anschließender Reperfusion zu induzieren.

Die Induktion von ischämischem Schlaganfall und Ischämie-Reperfusion bei Mäusen die Mittel Artery Occlusion Technik und Visualisierung von Infarktbereich verwenden

Wir beschreiben ein chirurgisches Verfahren, das zur indufären Ischämie bei Kaninchen mit Hyperlipidämie und Diabetes eingesetzt wird. Diese Operation dient als präklinisches Modell für Erkrankungen der peripheren Arterienerkrankung bei Patienten. Die Angiographie wird auch als Mittel zur Messung des Ausmaßes der eingeführten Ischämie und der Wiederherstellung der Perfusion beschrieben.

Präklinische Modell von Hind Limb Ischemia in diabetischen Kaninchen

Hier wird ein kritisches Hinterlimb Ischämie-Experimentalmodell vorgestellt, gefolgt von einer Batterie funktioneller, histologischer und molekularer Tests zur Beurteilung der Wirksamkeit angiogener Therapien.

Beurteilung der therapeutischen Angiogenese in einem Murine-Modell von Hindlimb Ischemia

Hierin beschreiben wir ein chirurgisches Verfahren, das zeigt, wie eine dauerhafte Ligation der links-vorderen absteigenden Herzkranzgefäße bei Mäusen erreicht werden kann. Dieses Modell ist von hoher Relevanz für die Untersuchung der Pathophysiologie des Myokardinfarkts und der damit einhergehenden biologischen Prozesse.

Murine Myokardinfarkt Modell mit permanenten Ligation der linken Anterior absteigende Koronararterie

Dieser Artikel zeigt einen effizienten chirurgischen Ansatz zur Feststellung einer akuten Ischämie bei Mäusen mit einem kleinen Schnitt. Dieser Ansatz kann von den meisten Forschungsgruppen ohne Labor-Upgrades angewendet werden.

A Modified Surgical Model of Hind Limb Ischemia in ApoE-/- Mäuse mit einem Miniaturschnitt

Hier beschreiben wir eine einfache und reproduzierbare Methode, die bei Mäusen durch Präzisionsligation der linken vorderen absteigenden Koronararterie durch Mikromanipulation einen Myokardinfarkt oder eine myokardiale Ischämie-Reperfusionsverletzung induzieren kann.

Induktion von Myokardinfarkt und myokardialer Ischämie-Reperfusionsschädigung bei Mäusen

Das vorliegende Protokoll beschreibt ein einzigartiges, klinisch relevantes Modell der peripheren arteriellen Verschlusskrankheit, das die Elektrokoagulation der Oberschenkelarterie und der Venen mit der Verabreichung eines Stickstoffmonoxid-Synthase-Inhibitors kombiniert, um bei FVB-Mäusen Gangrän der Hintergliedmaßen zu induzieren. Die intrakardiale DiI-Perfusion wird dann für die hochauflösende, dreidimensionale Bildgebung des Gefäßes des Fußpolsters verwendet.

Hochauflösende dreidimensionale Abbildung der Fußpolstervaskulatur in einem murinen Hinterbein-Gangränmodell

Wir beschreiben, wie ein weit verbreitetes chirurgisches Modell der intestinalen Ischämie-Reperfusionsverletzung (IRI) bei Nagetieren erstellt werden kann. Das Verfahren beinhaltet einen Verschluss der Arteria mesenterica superior, gefolgt von der Wiederherstellung des Blutflusses. Dieses Modell ist nützlich für Studien, die okklusive Ursachen der intestinalen IRI sowohl in der Veterinär- als auch in der Humanmedizin untersuchen.

Nagetiermodell der intestinalen Ischämie-Reperfusionsverletzung durch Verschluss der Arteria mesenterica superior

Lernen Sie die chirurgische Induktion einer einseitigen Hintergliedmaßenischämie bei Mäusen durch Femoralarterienligatur. Dieses zuverlässige Modell ermöglicht die Untersuchung peripherer arterieller Verschlusskrankheit und vaskulärer Regeneration.

Mausmodell der hinteren Gliedmaßen Ischämie

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