Name: Herstellung von amperometrische Elektroden (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-05-04T00:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 29 s
Description: Lernen Sie die Herstellung von Kohlenstofffaserelektroden zur Detektion von Katecholaminfreisetzung aus Vesikeln in Einzelzellen. Diese Methode ermöglicht präzise neurochemische Messungen mit geringem Rauschen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Wir danken Dr. Aaron P. Fox an der Universität von Chicago, in dessen Labor das Protokoll wurde ursprünglich entworfen, und William Roden (Saint Louis University) für die Weiterentwicklung des Protokolls. Wir danken der Whitehall-Stiftung und National Science Foundation für die Unterstützung.

Teil 1: Carbon Fiber Preparation <ol><li> Cut ein Bündel von Kohlenstoff-Fasern (wir verwenden 7μm Durchmesser) auf eine Länge ~ 1,25 X die Länge der Kapillare Pipette wird. </li><li> Entfernen Sie die Dimensionierung durch Kochen ~ 100 ml Aceton in einen Behälter und Zugabe der Fasern zu den heißen, siedendem Aceton für 30 Minuten oder länger. </li><li> Entfernen Fasern aus dem warmen Aceton, und in ein sauberes Becherglas mit 50-100 ml frischem Aceton. </li><li> Trockene Fasern, indem das Bündel auf einer offenen 150 mm Petrischale und lufttrocken Nacht. </li></ol> Teil 2: Feuerpolieren Glaskapillaren <ol><li> Fire-polnisch jeder Kapillare (wir benutzen Mikro-Hämatokrit-Kapillarröhrchen, 1,5 mm Außendurchmesser, 1,3 mm Innendurchmesser, 7,5 cm lang), indem das Rohr in der Mitte mit einer Pinzette und Freilegen der Ende der flame.Rotate das Rohr über 3-mal, während in der Flamme. </li><li> Kehren Sie die Röhrchen und setzen Sie das andere Ende in die Flamme wieder rotierenden 3-mal. </li><li> Legen Sie die feuerpolierte Rohre in eine Glasschale und Transfer zum Ofen, bis sie bereit sind, mit Carbon-Fasern gefüllt werden sollen. </li></ol> Teil 3: Threading einem Kohlefaser in einer Kapillare <ol><li> Ähnlich wie bei den Beschreibungen von Machado et al. (2008) und Mundroff und Wightman (2002), saugen die Faser in das Glasrohr mit Kunststoffschlauch verbunden, um ein Vakuum mit einem Filter. </li><li> Schneiden Sie die Faser mit Hilfe eines scalpel.Leave ¼ inch der Faser aus dem Rohr. </li></ol> Teil 4: Pulling Pipette-Fiber in einer Elektrode Puller <ol><li> Legen Sie Kapillare in die Elektrode Abzieher (wir verwenden Narishige Japan Modell PP-830) und ziehen Sie die Regler in die Kapillare in Position zu halten. </li><li> Bearbeiten Sie die Schalter auszuführen zwei Züge, setzen Sie auf die optimale puller Einstellungen. </li><li> Nachdem die Pipette in der Hälfte gezogen wird, trennen Sie die zwei Hälften, indem die nackten Faser in der Mitte mit einer Schere. </li><li> Entfernen Sie jede Elektrode Hälfte und Zug auf die hervorstehenden Fasern zu brechen das Glas seal.Trim die Faser mit einer Schere, so dass nur 1 / 8 Zoll von Faser außerhalb der Röhre bleibt. </li><li> Wiederholen Sie die Schritte 1-4, bis etwa 16-Faser-Elektroden gezogen werden. </li></ol> Teil 5: Making Epoxy-Glass Seal <ol><li> Erhitzen Sie eine vorgefertigte Aliquot Epoxy auf einer heißen Platte gesetzt bis 55 ° C für 6 Minuten in einem Abzug. </li><li> Während Epoxidharz Heizung, wrap ~ 16 des gezogenen Elektroden in ein Bündel mit Klebeband. </li><li> Nach dem Epon Resin für 6 Minuten erwärmt ist, fügen Sie 0,7 Gramm XOF MPDA zu den heißen Epon Resin (14%, w / v). Mix durch Schwenken der Flasche. </li><li> Tauchen Sie die Bündel von Elektroden in die heiße Epoxy plus Härter solution.After ca. 20 Sekunden, eine ausreichende Menge an Epoxid wird das Glas Tipps über Kapillarwirkung geben. </li><li> Lösen Sie die Bündel, Ort Elektroden auf Karton mit Schlitzen und Ort dieses Fach in einem Ofen auf 100 ° F. </li><li> Nach mindestens 48 Stunden, überprüfen Sie jede Elektrode unter einem Präpariermikroskop microscope.Discard Elektroden, die nicht mit Epoxy hat zu füllen, haben eine zertrümmerte Spitze, haben mehr als eine Faser, etc.After Inspektion jede Elektrode, legen Sie sie wieder auf dem Karton Inhaber und zurück in den oven.Electrodes sind in der Regel gut für etwa 1 Monat nach der Herstellung. </li></ol> Teil 6: Schneiden Sie die Carbon Fiber <ol><li> Legen Sie Kohlefaser Elektrode vorsichtig auf einen Objektträger mit Teflonband. </li><li> Visualisieren Sie die Spitze unter einem Binokular. </li><li> Verwenden Sie ein sauberes Skalpell senkrecht quer durch die Kohlefaser eine ebene, saubere Oberfläche für die Platzierung der Kohlefaser gegen eine Zelle zu verlassen. </li></ol>

<ol><li>Mundorf, M. L., Wightman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amperometry+and+cyclic+voltammetry+with+carbon+fiber+microelectrodes+at+single+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protocols+in+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Amperometry and cyclic voltammetry with carbon fiber microelectrodes at single cells.</a> Curr Protocols in Neurosci. 6 (14), 1-6 (2002).</li>
<li>Machado, D. J., Montesinos, M. S., Borges, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Good+practices+in+single-cell+amperometry%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molec.+Biol%22%5BJournal%5D)">Good practices in single-cell amperometry.</a> Methods in Molec. Biol. 440, 297-313 (2008).</li>
</ol>

Dieses Protokoll beschreibt, wie zu generieren und zu schneiden amperometrischen Elektroden. Während amperometrische Aufnahmen, ist eine Kohlefaser-Elektrode gegen die Oberfläche eines sekretorischen Zelle platziert. Exozytotische Aktivität wird als amperometrische Spikes, die die elektrochemische Strom, der durch den Transfer von Elektronen nach der Oxidation der Katecholamine verursacht zeigt beobachtet. Mit etwas Übung machen und Schneiden amperometrischen Elektroden kann Geräuschpegel erheblich über viele der im Han...

<table><tbody><tr><td>Epoxy-Härter 1,3-Phenylendiamin-Flakes</td><td>Reagenz</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P23954-100G04 716AJ</td><td>Aliquote werden in einem Exsikkator aufbewahrt und sollten nicht dem Licht ausgesetzt werden.</td></tr><tr><td>Kohlenstofffasern</td><td>Material</td><td>Goodfellow</td><td>C005725</td><td></td></tr><tr><td>Mikro-Hämatokrit-Kapillarrohre</td><td>Material</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC9836768</td><td></td></tr><tr><td>Epoxyharz</td><td>Reagenz</td><td>Miller-Stephenson</td><td>Epon Resin 828</td><td></td></tr><tr><td>Präparationsmikroskop</td><td>Instrument</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Elektrodenzieher</td><td>Instrument</td><td>Narishige International</td><td>PP-830</td><td>1. Zug = 24,8 Grad C; 2. Zug = 62,7 Grad C</td></tr><tr><td>Ofen</td><td>Instrument</td><td></td><td></td><td>auf 100 Grad F eingestellt</td></tr><tr><td>Heizplatte</td><td>Instrument</td><td></td><td></td><td>auf 55 Grad C eingestellt</td></tr></tbody></table>

herstellung von amperometrische elektroden

Fabrication of Amperometric Electrodes

Carbon-Elektroden sind entscheidend für den Nachweis von Katecholamin Entlassung aus dem Vesikel in einzelnen Zellen für Amperometrie Messungen. Hier beschreiben wir die Techniken erforderlich, um geräuscharm (&lt;0,5 pA) Elektroden zu erzeugen. Die Techniken wurden aus veröffentlichten Beschreibungen wurden von früheren Forschern (1,2) modifiziert. Die Elektroden sind durch Herstellung von Kohlenstoff-Fasern und Einfädeln sie einzeln in jede Kapillare mit Hilfe eines Vakuums mit einem Filter, um die Faser absaugen gemacht. Anschließend wird die Kapillare mit Faser durch eine Elektrode Abziehers, wodurch zwei Hälften, die jeweils mit einer feinen Spitze. Die Elektroden werden in heißem, flüssigem Epoxidharz mit Härter gemischt, um ein Epoxid-Glas-Siegel erstellen getaucht. Schließlich sind die Elektroden in einen Ofen gelegt, um das Epoxidharz zu heilen. Sorgfältige Behandlung der Elektroden ist entscheidend, um sicherzustellen, dass sie gemacht werden konsequent und ohne Beschädigung. Dieses Protokoll zeigt, wie in der Herstellung und schneiden amperometrischen Elektroden für die Aufzeichnung von einzelnen Zellen.

Dieses Protokoll beschreibt, wie Kohlefaser Elektroden zu erzeugen. Die Elektroden werden anschließend verwendet, um Katecholaminausschüttung von Vesikeln mit Kohlefaser Amperometrie erkennen.

Herstellung von amperometrische Elektroden

Kohlenstofffaserelektroden sind entscheidend für den Nachweis der Freisetzung von Katecholaminen aus Vesikeln in Einzelzellen für amperometrische Messungen. Hier ...

Dieses Protokoll beschreibt, wie man Kohlenstofffaserelektroden herstellt. Zunächst füllen wir die Glas-Kapillaren mit Kohlenstofffasern, bei denen die Sizing-Beschichtung entfernt wurde. Anschließend ziehen wir die Faser-Kapillar-Anordnung zu zwei Elektroden und schneiden die Faser ab.Dann bringen wir die Elektroden so an, dass sie in Epoxidharz eintauchen. Um die Faser in der Elektrode abzudichten, lagern wir die Faserelektroden auf einem Gestell in einem heißen Ofen. Diese Elektroden werden anschließend verwendet, um die Freisetzung von Katecholaminen aus Vesikeln in einzelnen Zellen mittels Kohlenstofffaser und Barometrie nachzuweisen.Erfolgreiche Aufnahmen zeigen ein geringes Rauschen und deutlich erkennbare nach oben gerichtete Spikes in der Aufnahmespur. Hallo, ich bin Carrie Pike aus dem Labor von Dr. Amy Harkins am Department für Pharmakologische und Physiologische Wissenschaften an der St. Louis University School of Medicine. Ich werde Ihnen ein Verfahren zur Herstellung von kohlenstofffasergestützten Elektroden mit geringem Rauschen vorstellen, die in der Pyrometrie zur Messung der Katecholaminfreisetzung aus einzelnen Zellen verwendet werden.Beginnen wir mit der Vorbere

Research

Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

Manipulieren von Flüssigkeiten und Schwebstoffe in der Mikro-und Nano-Maßstab wird immer mehr zu einer Realität als enabling technologies, wie AC Elektrokinetik, weiter zu entwickeln. Hier diskutieren wir die Physik hinter AC Elektrokinetik, wie man diese Geräte und wie man die experimentellen Beobachtungen zu interpretieren herzustellen.

AC elektrokinetischen Phänomenen von Mikroelektroden-Strukturen erzeugt

Dieser Artikel beschreibt den Bau eines Multiplex-Mikronadel-basierten Sensor. Das Gerät wird für die in situ Probenahme und elektrochemischen Analyse von mehreren Analyten in einer schnellen und selektiven Weise entwickelt. Wir haben die Vision der klinischen Medizin und der biomedizinischen Forschung verwendet für diese Mikronadel-basierte Sensoren.

Hohle Mikronadel-basierten Sensor für Multiplex Transdermale elektrochemische Nachweis

Dieser Artikel beschreibt eine biofabrication Ansatz: Abscheidung von stimulierbaren Polysacchariden in Gegenwart des vorgespannt Elektroden, biokompatible Folien, die mit Zellen oder Proteine ​​funktionalisiert werden können, zu schaffen. Wir zeigen eine Tisch-Strategie für die Generation der Filme sowie ihre grundlegenden Verwendungen für die Erstellung interaktiver Oberflächen biofunktionalisierten für Lab-on-a-Chip-Anwendungen.

Bridging the Bio-elektronische Schnittstelle mit Biofabrication

Die Studie zeigt , das Wachstum von Iridiumoxid-reduziertem Graphenoxid (IrO 2 -RGO) Nano - Hybrid - Dünnschichten auf unregelmäßige und grobe siebgedruckten Kohlenstoffsubstrat durch eine grüne elektrochemischen Synthese und deren Umsetzung als pH - Sensor mit einer gemusterten Papier-Fluidik - Plattform .

Iridium-Oxid-reduziertem Graphenoxid Nanohybrid- Thin Film Modified Siebdruck Elektroden als Einweg-Elektro Papier Mikrofluidik pH-Sensoren

Dieser Artikel enthält eine detaillierte Beschreibung des Herstellungsprozesses eines hohen Kontaktdichte flache Schnittstelle Nervenelektrode (FINE). Diese Elektrode ist optimiert für die Aufzeichnung und die neuronale Aktivität selektiv innerhalb der peripheren Nerven zu stimulieren.

Die Herstellung von High-Kontakt-Dichte, Flach-Interface Nerve Elektroden für die Aufnahme und Stimulation Anwendungen

Dieses Protokoll beschreibt eine lösungsbasierte Fertigungsstrategie für hochleistungsfähige, flexible, transparente Elektroden mit voll eingebettetem, dickem Metallgewebe. Flexible transparente Elektroden, die durch dieses Verfahren hergestellt werden, zeigen unter den höchsten berichteten Leistungen, einschließlich des ultra-niedrigen Schichtwiderstandes, der hohen optischen Durchlässigkeit, der mechanischen Stabilität unter Biegung, der starken Substrathaftung, der Oberflächenglätte und der...

Skalierbare, lösungsverarbeitete Fertigungsstrategie für leistungsstarke, flexible, transparente Elektroden mit eingebettetem Metallgewebe

Ein einfaches Herstellungsverfahren für Elektroden unter Verwendung des Schüttguts Fe 4,5 Ni 4,5 S 8 wird vorgestellt. Dieses Verfahren stellt eine alternative Technik für die herkömmliche Elektrodenherstellung bereit und beschreibt die Voraussetzungen für unkonventionelle Elektrodenmaterialien, einschließlich eines direkten elektrokatalytischen Testverfahrens.

Einfache Methoden zur Herstellung von nicht edlen Metall-Bulk-Elektroden für elektrokatalytische Anwendungen

Vor-Ort-mikrobielle Bereicherung oder in Situ Anbautechniken können die Isolierung der mikrobiellen Taxa schwierig zu Kultur, vor allem von Low-Biomasse oder geochemisch extreme Umgebungen erleichtern. Hier beschreiben wir eine elektrochemische Einrichtung ohne eine externe Stromquelle, um mikrobielle Belastungen zu bereichern, die extrazelluläre Elektronentransport (EET) geeignet sind.

Selbststehende elektrochemischen Aufbau Anode atmender Bakterien vor Ort zu bereichern

Dieses Papier zielt darauf ab, eine Methode zur Bildung von glatten und gut kontrollierten Folien aus Silberchlorid (AgCl) mit einer bestimmten Abdeckung auf dünnen Silberelektroden zu präsentieren.

Herstellung von Dünnschichtsilber/Silberchloridelektroden mit fein kontrollierten einlagigen Silberchlorid

Wir beschreiben wässrige und organische Lösungsmittelsysteme zur Elektropolymerisation von Poly(3,4-ethylendioxythiophen), um dünne Schichten auf der Oberfläche von Goldmikroelektroden zu erzeugen, die zur Erfassung von Niedermolekulargewichtsanalyten verwendet werden.

Elektrochemische Herstellung von Poly(3,4-ethylendioxythiophen)-Schichten auf Gold-Mikroelektroden für Harnsäure-Sensoranwendungen

Unser Ziel war es, einen aktualisierten, leicht verständlichen Leitfaden für die Herstellung und Prüfung von epimysialen Elektromyographie-Elektroden bereitzustellen. Zu diesem Zweck bieten wir Anweisungen für die Materialbeschaffung und eine detaillierte Anleitung zum Herstellungs- und Prüfprozess.

Entwicklung einer kostengünstigen epimysialen Elektromyographie-Elektrode: Ein vereinfachter Arbeitsablauf für Herstellung und Prüfung

Lernen Sie die Herstellung von Kohlenstofffaserelektroden zur Detektion von Katecholaminfreisetzung aus Vesikeln in Einzelzellen. Diese Methode ermöglicht präzise neurochemische Messungen mit geringem Rauschen.

Herstellung von amperometrische Elektroden

Weitere Videos entdecken