Name: Murine Renal Transplantation (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-07-10T00:00:00.000+00:00
Duration: 18 min 48 s
Description: Lernen Sie die Nierentransplantation bei Mäusen für die Transplantationsbiologie. Diese Methode zeigt chirurgische Techniken, postoperative Betreuung und die Überwachung der Transplantatfunktion durch Kreatininmessungen.

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Diese Studien wurden zum Teil finanziert durch den NIH R01 AI36532 zu GAH unterstützt. Wir möchten die hervorragende Unterstützung in der Transplantationsmedizin Pathologie von Dr. Tibor Nadasdy vorgesehen anerkennen, und die wertvolle Anleitung und Weitsicht von dem verstorbenen Dr. Charles G. Orosz bei der Initiierung dieser Forschungsanstrengungen zur Verfügung gestellt.

Spenderorgan Ernte (2): <ol><li> Anesthetize des Spenders mit 65mg/kg Pentobarbital IP; Anästhesie wird durch Isofluran (2-3%) erhalten. </li><li> Machen Sie einen Medianschnitt vom Brustbein bis zum Schambein zum Spender Bauch geben und setzen die linke Niere, indem der Darm seitlich an der rechten Seite. </li><li> Isolieren Sie die linke Niere durch Unterbindung und Teilen der Nebennieren und Hoden-Schiffe mit einer 8-0 Seidenfaden. </li><li> Mobilisieren der Aorta oberhalb seiner Einmündung in die A. und V. renalis. </li><li> Mobilisieren Sie die untere Hohlvene (IVC) oberhalb und unterhalb der Kreuzung mit der renalen Arterie und Vene. </li><li> Ligieren der Aorta unterhalb der Nieren-Arterie und Vene mit einer 8-0 Seidenfaden, um Blutungen zu minimieren. </li><li> Präparieren Sie die linke Ureter aus dem Nierenhilus in die Blase. </li><li> Setzen Sie die ureterovesical Kreuzung mit kaudaler Einfahren auf die Blase Kuppel. </li><li> Excise eine kleine, elliptische Patch der Blase mit der linken ureterovesical Kreuzung für Harn-Rekonstruktion über eine Blase zu Blase Anastomose verwendet. Der rechte Ureter ist nicht mit der Blase enthalten. </li><li> Ligieren des IVC unterhalb der Nieren-Arterie und Vene mit einer 8-0 Seidenfaden. </li><li> Ligieren der Aorta oberhalb der Nierenarterie und Vene, und langsam perfuse das Transplantat in situ mit 0,2-0.4ml Kälte, heparinisierten Ringer-Laktat-Lösung über das infrarenalen Aorta. </li><li> Ligieren des IVC oberhalb der A. und V. renalis mit einem 8-0 Seidenfaden. </li><li> Transect der Nierenvene bei ihrem Zusammentreffen mit der IVC. </li><li> Teilen Sie die Aorta schräg, etwa 2mm unterhalb der Nierenarterie. </li><li> Entfernen der Niere und ihrer Gefäßversorgung mit Harnleiter an die Blase Patch en bloc. Shop in Lactat-Lösung Ringer auf dem Eis. </li><li> Euthanize des Spenders Maus durch Genickbruch unter Narkose. </li></ol> Empfänger Transplantation (2): <ol><li> Anesthetize der Empfänger mit 65 mg / kg Pentobarbital IP und Aufrechterhaltung der Narkose durch Isofluran (2-3%). </li><li> Machen Sie eine Mittellinienschnitt decken den Darm mit nassen Gaze und vorsichtig zieht es zur linken Seite. </li><li> Ligieren des rechten Ureters, Nieren-Arterie und Vene, und entfernen Sie die rechte Niere. </li><li> Sorgfältig zu isolieren und cross-clamp der infrarenalen Aorta und IVC mit zwei 4-mm microvasular Schellen nach Ligation der Lendenwirbelsäule Filialen. </li><li> Legen Sie eine 10-0 Nylonfaden durch eine vollständige Dicke der Aorta und zurückziehen, um eine elliptische aortaotomy durch einen einzigen Schnitt (etwa ein Fünftel des Durchmessers des Schiffes) zu machen. </li><li> Machen Sie eine longitudinale Venotomie durch Einstechen in die IVC mit einer 30-Gauge-Nadel und erweitern entsprechend mit Mikroschere. </li><li> Spülen sowohl die Aorta und IVC mit heparinisierten Kochsalzlösung auf intraluminale Blut oder Blutgerinnsel klar. </li><li> Entfernen Sie die Spenderniere aus dem Eis und legen Sie sie intraabdominell in die rechte Flanke der Maus. Die Spenderniere wird feucht gehalten mit einem kalten Kochsalzlösung getränkten Gaze-Pad. </li><li> Legen Sie zwei Haltefäden am proximalen und distalen Spitze der Empfänger aortaotomy mit den Gebern Aorten-Manschette. </li><li> Machen Sie eine Ende-zu-Seit-Anastomose zwischen Spender Aorten-Manschette und die vordere Wand der Empfänger aortaotomy, mit 2 bis 3 kontinuierlich 10-0 Nylon Nähte in der Außenseite der Aorta. </li><li> Schalten Sie die Spenderniere Transplantat an der linken Flanke des Empfängers. Wiederholen Sie den vorherigen Verfahren zwischen den Donor-Aorten-Manschette und der hinteren Wand der Empfänger aortaotomy </li><li> Führen Sie eine Ende-zu-Seit-Anastomose zwischen Spender Nierenvene und die hintere Wand der Empfänger IVC, mit 4 bis 5 kontinuierlich 10-0 Nylon Nähte in der Innenseite des IVC. und dann die vordere Wand der IVC und Spendern Nierenvene mit 4 ~ 5 kontinuierliche Nähte außerhalb des IVC geschlossen. </li><li> Die Anastomose der beiden Vene und Arterie müssen innerhalb von 20 Minuten abgeschlossen sein. </li><li> Spülen Sie das Transplantat mit kalter Kochsalzlösung mehrmals Anastomose. </li><li> Teilen Sie die Kuppel des Empfängers Blase und Blutungen stoppen mit Kauter. </li><li> Machen Sie einen kleinen Schnitt an der Kuppel. </li><li> Legen Sie zwei Haltefäden von 10-0 Nylon an die Spender kleine Blase Patch mit den Empfängern Blase Kuppel anastomize. Jede Seite der Anastomose wird mit 8 ~ 10 ständige Stiche genäht. </li><li> Schließen Sie den Bauch in zwei Schichten mit kontinuierlicher 4-0 sterile, synthetischen resorbierbaren Vicryl Naht. </li><li> Geben Empfängermäuse 0.4ml warmen Kochsalzlösung während der Operation durch intermittierende Injektion IV. </li></ol> Post-operative Betreuung der Empfänger <ol><li> Nach dem Schließen der Bauch, ist eine einmalige intramuskuläre Injektion von Penicillin (500U/10g) verabreicht (2). </li><li> Darüber hinaus erhalten die Empfänger 0,05 mg / kg Buprenorphin intramuskulär am Tag 0 und Tag 1 nach der Operation zur Schmerzlinderung. Nach der Operation erhalten Transplantationspatienten Wasser mit sulfatrim (100mg/kg), bis das Experiment terminated. </li><li> Für die ersten 24 Stunden postoperativ Mäuse sind in einem temperierten Brutschrank gehalten. </li><li> Mäuse in der Regel aus der Narkose innerhalb von 1 Stunde der Operation erholen und erhalten regelmäßig Futter und Wasser ad libitum. </li><li> Hautnähte sind 2 Wochen nach der Operation entfernt. </li></ol> Empfänger Nephrektomie <ol><li> Anesthetize der Empfänger 4 ~ 7 Tage nach einer Nierentransplantation mit 65 mg / kg Pentobarbital IP; Anästhesie wird durch Isofluran (2-3%) erhalten. </li><li> Öffnen Sie den Bauch über eine Inzision in der Mittellinie. </li><li> Bedecken Sie den Darm mit Kochsalzlösung getränkten Gaze und vorsichtig zieht es zur rechten Seite. </li><li> Entfernen Sie die linke Niere nach Unterbindung der linken Harnleiter-, Nieren-Vene und Arterie. </li><li> Schließen Sie den Bauch in zwei Schichten mit kontinuierlicher 4-0 synthetischen resorbierbaren Vicryl Naht. </li></ol> Vollblut Kreatinin-Messungen <ol><li> -Bis zweiwöchigen Blutentnahme von weniger als 0,2 cc ist entweder submandibularly ohne Narkose oder retroorbital unter Isofluran-Narkose durchgeführt. </li><li> Quantitative ganze Blutkreatininspiegel werden mit Hilfe eines I-Stat Tragbare Clinical Analyzer (Heska Corp, Fort Collins, CO). </li><li> Konventionelle Einheiten (mg / dl) sind in SI-Einheiten von Mikromol / L durch Multiplikation des herkömmlichen Geräten um 88,4 umgewandelt. </li></ol>

<ol><li>Russell, P. S., Chase, C. M., Colvin, R. B., Plate, J. M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kidney+transplants+in+mice.+An+analysis+of+the+immune+status+of+mice+bearing+long-term%2C+H-2+incompatible+transplants%5BTitle%5D)+AND+%22JExpMed%22%5BJournal%5D)">Kidney transplants in mice. An analysis of the immune status of mice bearing long-term, H-2 incompatible transplants.</a> JExpMed. 147, 1449-1468 (1978).</li>
<li>Zhang, Z., Schlachta, C., Duff, J., Stiller, C., Grant, D., Zhong, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+techniques+for+kidney+transplantation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Microsurgery%22%5BJournal%5D)">Improved techniques for kidney transplantation in mice.</a> Microsurgery. 16 (2), 103-109 (1995).</li>
</ol>

Tierversuche wurden in Übereinstimmung mit den Richtlinien und Vorschriften her von der Ohio State University IACUC gesetzt durchgeführt.

Wir haben rund 1200 Fälle von Nierentransplantation bei Mäusen mit einer technischen Erfolgsrate von&gt; 90% durchgeführt. Im Vergleich zur Herztransplantation ist die Erfolgsrate von Nierentransplantationen in der Regel gering. Allerdings hat unser Labor eine hohe Erfolgsrate (&gt; 90%) von Nieren-Transplantation erhalten. Die wichtigsten Punkte für den Erfolg sind bis zur Reperfusion Verletzungen an beiden Spenderniere und Empfänger zu reduzieren und zu minimieren Blutungen und Thrombosen während des gesamten Verfahre...

<table><tbody><tr><td>i-STAT</td><td>Sonstiges</td><td>HESKA</td><td>Cat 5101</td><td></td></tr><tr><td>i-STAT-Kartusche</td><td>Sonstiges</td><td>HESKA</td><td>CAT 5110-CREA</td><td></td></tr><tr><td>Sulfatrim</td><td>Sonstiges</td><td>Actavis</td><td>R02109</td><td></td></tr><tr><td>Isofluran</td><td>Sonstiges</td><td>NOVAPLUS</td><td>CA-0474</td><td></td></tr><tr><td>10-0 Nahtmaterial</td><td>Chirurgie</td><td>Sharpoint</td><td>AK0100</td><td></td></tr></tbody></table>

murine renal transplantation

Murine Renal Transplantation Procedure

Renal orthotopen Transplantation bei Mäusen ist eine technisch anspruchsvolle Verfahren. Obwohl die erste Nierentransplantation in Mäuse wurden durch Russell et al vor über 30 Jahren (1) durchgeführt und verfeinert von Zhang et al Jahre später (2) haben nur wenige Menschen in der Welt dieses Verfahren beherrschen. In unserem Labor haben wir erfolgreich 1200 orthotopen Nierentransplantation mit&gt; 90% Überlebensrate durchgeführt. Die wichtigsten Punkte für den Erfolg sind strengere Kontrolle der Reperfusion, Blutungen und Thrombosen, sowohl während des Verfahrens und nach der Transplantation und die Verwendung von 10-0 anstelle von 11-0 Naht für Anastomosen. Post-operative Behandlung und Pflege des Empfängers ist extrem wichtig für den Erfolg und Einschätzung für eine Transplantation. Alle Nierentransplantats Empfänger erhalten Antibiotika in Form einer Injektion von Penicillin sofort nach der Transplantation und sulfatrim in das Trinkwasser ständig. Insgesamt Tiergesundheit ausgewertet wird täglich und Vollblut-Kreatinin-Analysen werden regelmäßig mit einem tragbaren I-STAT Maschine Organfunktion zu beurteilen durchgeführt.

Renal Transplantation bei Mäusen ist eine technisch anspruchsvolle Verfahren, dass eine sorgfältige postoperative Betreuung und Behandlung für den Erfolg benötigt.

Murine Renal Transplantation

Die renale orthotope Transplantation bei Mäusen ist ein technisch anspruchsvolles Verfahren. Obwohl die ersten Nierentransplantationen bei Mäusen von Russell durchgeführt wurden ...

Das Verfahren zur Nierentransplantation bei der Maus beginnt mit der Entnahme eines Spenderorgans, bei der die linke Niere von der Spendermaus entfernt und auf Eis gelagert wird. Die rechte Niere wird von der Empfängermaus entfernt, um Platz für die Spenderniere zu schaffen. Anschließend wird die Spenderniere vom Eis genommen und in die Empfängermaus transplantiert.Der Maus wird eine Erholungsphase von vier Tagen gewährt, bevor die verbleibende native Niere entfernt wird. Nach sieben Tagen werden die Kreatininwerte mithilfe eines I STAT tragbaren klinischen Analysators überwacht, um die Transplantatfunktion zu beurteilen. Hallo, ich bin Sarah Heimer aus dem Labor von Dr. Greg Hadley und der Abteilung für Transplantationschirurgie der Ohio State University.Heute werden wir Ihnen ein Verfahren zur Nierentransplantation bei der Maus zeigen. Die Nierentransplantationsoperation, die Sie heute sehen werden, wird von unserer erfahrenen Fachärztin für Neurochirurgie, Jing Wing, durchgeführt. Bitte verwenden Sie dieses Verfahren in unserem Labor, um die immunologischen Vorgänge der Transplantatabstoßung sowie Strategien zur Verhinderung einer Abstoßung zu untersuchen.Beginnen wir also. Um d

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Murine Nierentransplantations Technik

Wir bieten eine einfache und effiziente Methode, um 2'-Deoxyguanosin behandelt E18.5 Thymus in die Nierenkapsel einer Nacktmaus zu transplantieren. Diese Methode sollte bei der Untersuchung sowohl der Funktion der thymischen Epithelzellen als auch der Reifung von T-Zellen helfen.

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Eine modifizierte Operationstechnik zur Nierentransplantation bei Mäusen

Das orthotope Nierentransplantationsmodell der Ratte trägt dazu bei, den Mechanismus der renalen Allotransplantatabstoßung zu untersuchen. Das aktuelle Modell erhöht das Überleben der Empfänger ohne Beeinträchtigung der Blutversorgung und venösen Reflux des Unterkörpers unter Verwendung einer End-to-End-Anastomose der Nierenimplantation und einer End-to-Side-"Tunnel" -Methode der Harnleiter-Blasen-Anastomose.

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Heterotope Herztransplantation in Mäuse

Lernen Sie die Nierentransplantation bei Mäusen für die Transplantationsbiologie. Diese Methode zeigt chirurgische Techniken, postoperative Betreuung und die Überwachung der Transplantatfunktion durch Kreatininmessungen.

Murine Renal Transplantation

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