Name: Live-Imaging von Gliazellen Migration in der Drosophila Eye Imaginalscheibe (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-07-09T00:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 12 s
Description: Erfahren Sie die Live-Imaging-Methode zur Untersuchung der Gliazellenmigration in der Drosophila Eye Imaginalscheibe. Dieses Protokoll ermöglicht Echtzeitbeobachtungen mit GFP-markierten Zellen.

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Patrick Cafferty wird durch ein Postdoc-Stipendium von der Multiple Sclerosis Society of Canada unterstützt.

Teil 1: Pre-Versuchsanordnung. <ol><li> Eine Woche im Voraus, fliegt Kumpel zur Larve zu generieren, die ausdrückliche GFP unter der Kontrolle eines Glia-spezifischen Promotors. Für unser Experiment haben wir visualisiert GFP mit einem Kernlokalisierungssequenz in Gliazellen mit umgekehrter Polarität (Repo)-Promotor (3, 4) zum Ausdruck markiert. </li><li> Bereiten Deckgläser mindestens einen Tag im Voraus durch Einweichen 18 mm runde Deckgläser für 10 Minuten in 1% Poly-L-Lysin-Lösung und in der Luft über Nacht trocknen. </li><li> Am Tag vor dem Experiment, sauber ein Chamlide magnetischen Kultur Kammer durch Einweichen über Nacht Komponenten in 70% Ethanol. </li><li> Am Tag des Experiments, bereiten Kulturmedium durch Zugabe von fötalem Rinderserum, Penicillin-Streptomycin-Lösung und Insulin zu 10 ml Insektenmedium Schneider unter aseptischen Bedingungen. Die Arbeitsgruppe Konzentrationen sind: 1X Rinderfötenserum; 100U/ml Penicillin; 0.1mg/ml Streptomycin und 0,2 mg / ml Insulin in Insektenmedium Schneider (modifiziert nach (5)). </li><li> Lassen Sie die Kultur Kammer an der Luft in einer Zellkultur Haube trocknen. Abwaschen Restethanol aus dem Kulturraum durch Spülen mit vorbereiteten Kulturmedium. </li></ol> Teil 2: Präparation des Drosophila Auge-Gehirn-Komplex. <ol><li> Wählen Sie einen dritten Larvenstadium wandernde Larven von der Seite eine Fliege Fläschchen und in einen Tropfen gekühlt Kulturmedium auf eine Petrischale auf Eis für mehrere Minuten. Chilling die Larve wird empfohlen, peristaltische Kontraktionen Körper für eine einfache Zerlegung langsam. </li><li> Legen Sie die gekühlte Larve in einen Tropfen Kulturmedium auf einem Sylgard beschichtet Gericht unter einem Dissektionsmikroskop. </li><li> Unter dem Dissektionsmikroskop, verwenden Sie ein Paar Dumont feinen Pinzette fest zu greifen die Larve etwa ein Drittel des Weges aus dem hinteren Ende. Warten Sie, bis die Larve dringt in ihren Mund Haken aus dem vorderen Ende. Fassen Sie den Mund Haken mit einer zweiten Pinzette auf volle Streckung. Um sezieren die Larve, langsam ziehen die zwei Pinzetten in entgegengesetzte Richtungen. Die Auge-Gehirn-Komplex, zusammen mit Speicheldrüsen, Fettkörper und imaginalen Gewebe, wird wegziehen aus dem larvalen Körper. Ziehen Sie nicht den Mund Haken zu schnell sonst werden sie abreißen des Auge-Gehirn-Komplex. </li><li> Trim entfernt Speicheldrüsen, Fettkörper und Imaginalscheiben mit ultrafeinen clipper Schere. Die beiden Hemisphären des Gehirns und der Augen-Discs, die Bauchmark und Mund Haken befestigt werden. </li><li> Ein 18 mm Deckglas auf einen Objektträger. Lassen Sie einen Rand des Deckglases hängen über den Rand der Folie, um später abholen Deckglas. Fügen Sie einen Tropfen Kulturmedium auf die 18 mm Deckglas. Übertragen Sie die Auge-Gehirn-Komplex in das Kulturmedium durch Erfassen des Mundhaken mit einer Pinzette. Greifen Sie nicht die Auge-Gehirn-Komplex direkt mit der Pinzette oder das Gewebe beschädigt wird. </li><li> Mit feinen Sezierung Schere, schneiden Sie den Mund Haken aus dem Auge-Hirn-komplex und zu verwerfen. Entfernung von der Mündung Haken ist für Live-Bildgebung wichtig wie die Mundhaken wird weiterhin in das Kulturmedium wodurch das Gewebe während der Mikroskopie zu bewegen Vertrag. </li><li> Um glialen Migration innerhalb des Auges Imaginalscheibe visualisieren, sorgfältig schneiden die optische Stengel, die dünnen Gewebe, Gehirn und Auge Scheibe verbindet und wegzuschieben oder zu verwerfen das Gehirn (siehe Abbildung 1A). Zur Visualisierung Glia innerhalb der optischen Stiel, verlassen das Gehirn, Optik Stiel und Auge Imaginalscheibe intakt (siehe Abbildung 1E). </li><li> Pick-up das Deckglas mit einer Pinzette und ziehen Sie einen Kreis unter der ganzen Gewebe von Interesse mit einem Permanent-Marker. Dieser Kreis wird bei der Ortung des Gewebes für die Mikroskopie in Teil 4 zu unterstützen. </li></ol> Teil 3: Anschluss des Auges Imaginalscheibe in einem magnetischen Kultur Kammer. <ol><li> Mit einer Pinzette fassen Sie den hängenden Rand des Deckglases. Übertragen Sie die Deckglas auf die Bodenplatte des Chamlide magnetische Kammer, ohne die Gewebe in der Kultur. </li><li> Setzen Sie den Silikon-O-Ring auf den Hauptteil der Chamlide Kammer. Installieren Sie den Hauptteil auf der Bodenplatte. </li><li> Langsam Kulturmedium in die Kammer. Fügen Sie nicht das Kulturmedium zu schnell oder das Gewebe von Interesse gestört werden. Nicht vollständig füllen die Kammer für den Gasaustausch unter dem Deckmantel ermöglichen. </li><li> Sanft statt der unsichtbaren Abdeckung auf der Oberseite des Chamlide Kammer. </li></ol> Teil 4: Visualisierung der Migration Gliazellen im Auge CD. <ol><li> Legen Sie die Kultur Kammer auf der Bühne eines konfokalen oder Fluoreszenzmikroskop. Suchen Sie das Beispiel mithilfe der Kreis auf dem Deckglas als Referenz auf geringer Vergrößerung. </li><li> Konzentrieren Sie sich auf der Probe mit einem 40x Objektiv. Lassen Sie das Gewebe auf das Deckglas zu begleichen. Machen Sie Bilder des Auges Disc oder optischen Stiel jede 10-15min über 3-4 Stunden. Das Gewebe kann zucken und bewegen out of focus. Manuelles Fokussieren des Gewebes vor der Aufnahme von Bildern wird zu lindern thist Problem. </li></ol> Teil 5: Repräsentative Ergebnisse: Korrekt ausgeführt, erlaubt unser Protokoll wir eine Reihe von Bildern von GFP-markierten Gliazellen, die von der Optik Stiel ins Auge Imaginalscheibe (Abbildung 1 BD) migriert zu sammeln. Während Live-Bildgebung für eine 60-Minuten-Zeitraum war ausreichend, um Veränderungen in den Positionen der Glia-Kerne in einem Wildtyp-Auge Imaginalscheibe beobachten Gliazellen Kerne in einer Mutante für ein Gen, die für Gliazellen Migration völlig versäumt, die Optik Stiel (Pfeile Ausfahrt Abbildung 1 FH). Wir haben kultivierten Auge-Hirn-Komplexe für die Zeiträume, solange 240 Minuten vor Beobachtung Verschlechterung der gezüchtetes Gewebe. Nach dem 240-Minuten-Punkt fangen wir an, GFP-positiven Zellen in das Kulturmedium umliegenden kultivierten Auge-Gehirn-Komplexe (Pfeil Abbildung 2 C) zu beobachten. Darüber hinaus GFP wird in diffuse Flecken in den Geweben was auf einen Abbau im Gewebe Integrität zu akkumulieren. <img src="/files/ftp_upload/1155/figure1.png" alt="" width="589" height="241" /> Abbildung 1: Live Darstellung von GFP-markierten Gliazellen Kerne in den Entwicklungsländern Wildtyp und Mutante visuellen Systemen. A, E) aufgenommene Bilder mit Differential-Interferenz-Kontrast (DIC) Mikroskopie von kultivierten Wildtyp und Mutante eye-Imaginalscheiben (ED). Im Wildtyp sind Gliazellen in geboren und wandern von der Optik Stiel (OS) in das Auge-Disc. Das Gehirn wurde entfernt, um Abflachung und Bildgebung des Auges Imaginalscheibe erleichtern. BD) Fluoreszenzmikroskopie des Wildtyp-kultivierten Auge Imaginalscheibe in (A) bei 0, zeigt 30, und 60 Minuten Zeitpunkten GFP-markierten Gliazellen Kerne innerhalb des Auges Scheibe wandern. FH) Fluoreszenzmikroskopie des mutierten Auge-Gehirn-Komplex in (E) bei 0, zeigt, 30 und 60 Minuten Zeit, die Punkte a Abwürgen des GFP-markierten Gliazellen Kerne innerhalb der optischen Stiel (Pfeil). Das Gehirn (BR) wurde links an der Optik Stengel Bildgebung von Glia innerhalb der Stiel zu erleichtern. <img src="/files/ftp_upload/1155/Figure_2.png" alt="" width="600" height="156" /> Abbildung 2: Live Darstellung von GFP-markierten Gliazellen Membranen in einem Wildtyp-Auge Imaginalscheibe. Wir haben erfolgreich Auge-Hirn-Komplexe für die 240-Minuten-Perioden kultiviert. Tissue kultivierten länger als 240 Minuten beginnt zu bröckeln. Das Kulturmedium rund um das Auge Imaginalscheibe (ED), Optik Stiel (OS), und das Gehirn Lappen (BR) auf 0 (A) und 150 Minuten (B), im Vergleich zu den 300 Minuten Zeit-Punkt (C), ist frei der GFP-positiven Zellen, die durch einen Pfeil.

<ol><li>Aigouy, B., Lepelletier, L., Giangrande, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glial+chain+migration+requires+pioneer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Glial chain migration requires pioneer cells.</a> J. Neurosci. 28, 11635-11641 (2008).</li>
<li>Silies, M., Yuva, Y., Engelen, D., Aho, A., Stork, T., Klambt, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glial+cell+migration+in+the+eye+disc%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Glial cell migration in the eye disc.</a> J. Neurosci. 27, 13130-13139 (2007).</li>
<li>Brand, A. H., Perrimon, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+gene+expression+as+a+means+of+altering+cell+fates+and+generating+dominant+phenotypes%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Targeted gene expression as a means of altering cell fates and generating dominant phenotypes.</a> Development. 118, 401-415 (1993).</li>
<li>Sepp, K. J., Auld, V. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conversion+of+lacZ+enhancer+trap+lines+to+GAL4+lines+using+targeted+transposition+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Conversion of lacZ enhancer trap lines to GAL4 lines using targeted transposition in Drosophila melanogaster.</a> Genetics. 151, 1093-1101 (1999).</li>
<li>Gibson, M. C., Patel, A. B., Nagpal, R., Perrimon, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+emergence+of+geometric+order+in+proliferating+metazoan+epitheia%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">The emergence of geometric order in proliferating metazoan epitheia.</a> Nature. 442, 1038-1041 (2006).</li>
<li>Lee, T., Luo, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mosaic+analysis+with+a+repressible+cell+marker+%28MARCM%29+for+Drosophila+neural+development%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Mosaic analysis with a repressible cell marker (MARCM) for Drosophila neural development.</a> Trends Neurosci. 24, 251-254 (2001).</li>
</ol>

Die Autoren haben keine Offenlegungen vorzunehmen.

In diesem Protokoll beschreiben wir Beobachtung von Gliazellen Migration in das Auge Imaginalscheibe mit Live-Mikroskopie. In unserem Wildtyp Beispiel (Abbildung 1 AD), verwendeten wir eine nukleare GFP Marker Gliazellen Bewegung in die Augen zu beobachten Disc im Laufe von einer Stunde. In einer Mutante für einen Kandidaten-Gen für Gliazellen Migration derzeit untersucht in unserem Labor erforderlich, beobachteten wir einen Stillstand der Glia-Zellkernen in der Optik Stiel während eines Zeitraums von einer Stu...

<table><tbody><tr><td>Poly-L-lysine</td><td>Reagenz</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P8920</td><td></td></tr><tr><td>Schneider&amp;rsquo;s Insect Media</td><td>Reagenz</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S0146</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin-Streptomycin</td><td>Reagenz</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P4458</td><td></td></tr><tr><td>Insulinlösung aus Rinderpankreas</td><td>Reagenz</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I0516</td><td></td></tr><tr><td>Chamlide Magnetkammer</td><td>Werkzeug</td><td>Live cell Instrument</td><td>CM-R-10</td><td>35-mm-Schale für 18-mm-Deckglas</td></tr><tr><td>Ultrascharfe Schneideschere</td><td>Werkzeug</td><td>Fine Science Tools</td><td>15200-00</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #5 Pinzette</td><td>Werkzeug</td><td>Fine Science Tools</td><td>11251-20</td><td></td></tr><tr><td>Fluoreszenzmikroskop</td><td>Mikroskop</td><td>Carl Zeiss, Inc.</td><td></td><td>Jedes Fluoreszenz-Bildgebungssystem, das die erforderlichen Filter und Anregung für GFP besitzt, kann verwendet werden.</td></tr></tbody></table>

live-imaging von gliazellen migration in der drosophila eye imaginalscheibe

Live Imaging of Glial Cell Migration in the Drosophila Eye Imaginal Disc

Gliazellen der Wirbeltiere und wirbellose Organismen müssen Endziel Regionen wandern, um umhüllen und Unterstützung verbunden Neuronen. Während die jüngsten Fortschritte gemacht worden, um die Live-Migration von Gliazellen in den Entwicklungsländern Puppenstadium Flügel (1), Studium der Beschreibung<em&gt; Drosophila</em&gt; Gliazelle Migration haben in der Regel die Untersuchung von fixiertem Gewebe beteiligt. Live-mikroskopische Analyse von beweglichen Zellen bietet die Möglichkeit, zelluläre Verhalten in der gesamten Migrationsprozess, einschließlich der Bestimmung der Geschwindigkeit und Veränderung in Richtung des Wachstums zu untersuchen. Gepaart mit der Nutzung der genetischen Werkzeugen können Live-Aufnahmen verwendet werden, um genauere Rollen für bestimmte Gene in den Prozess der Entwicklung zu bestimmen. Frühere Arbeiten von Silies<em&gt; Et al.</em&gt; (2) hat die Migration von Glia aus der Optik Stiel, eine Struktur, die den Entwicklungsländern Auge und Gehirn verbindet beschrieben, in das Auge Imaginalscheibe in fixiertem Gewebe. Hier skizzieren wir ein Protokoll für die Prüfung der Live-Migration von Gliazellen in den<em&gt; Drosophila</em&gt; Auge Imaginalscheibe. Wir nutzen eine Drosophila Linie, die GFP zum Ausdruck in der Entwicklung Glia zu Gliazellen Progression in Wildtyp und Mutante in Tieren zu folgen.

Hier beschreiben wir ein Protokoll, um die Migration von Gliazellen in den Entwicklungsländern Drosophila Auge mit Live-mikroskopische Analyse mit GFP markierten Gliazellen gepaart untersuchen.

Live-Imaging von Gliazellen Migration in der Drosophila Eye Imaginalscheibe

Gliazellen sowohl von Wirbeltier- als auch von wirbellosen Organismen müssen in ihre endgültigen Zielregionen migrieren, um die zugehörigen Neuronen zu umhüllen und zu unterstützen. Während ...

Wir sezieren die Larven, indem wir das hintere und vordere Ende greifen und die Pinzette in entgegengesetzte Richtungen ziehen. Überschüssiges Gewebe wird mit einer feinen Schere abgetrennt. Dadurch werden die beiden Hälften der larvalen Gehirnaugen-Imaginalanlagen sichtbar.Das ventrale Nervenband und die Mundhaken. Der larvale Augen-Gehirn-Komplex wird in eine Kulturschale überführt. Wir trennen das Gehirnläppchen vom optischen Stiel, um die Migration von Gliazellen innerhalb einer Wildtyp-Augen-Imaginalanlage sichtbar zu machen.Um gestoppte Gliazellen im Optikstiel eines Mutanten zu beobachten, lassen wir den Gehirnlappen am Optikstiel angeheftet. Ich bin Patrick Cafferty aus dem Labor von Vanessa Als am Fachbereich Zoologie der University of British Columbia. Hallo, ich bin Rin.Sie auch. Heute zeigen wir Ihnen ein Verfahren zur Visualisierung wandernder Gliazellen im sich entwickelnden Drosophila-Auge. Wir verwenden dieses Verfahren in unserem Labor, um die Entwicklung von Gliazellen zu untersuchen. Beginnen wir also.Eine Woche vor Beginn des Experiments werden Fliegen gekreuzt, um Larven zu erzeugen, die GFP unter Kontrolle eines glialen spezifischen Promotors exprimieren. Dieses Experiment beinhaltet die Visualisierung von GFP, das mit einer nukleären Lokalisierungssequenz markiert ist und in Gliazellen exprimiert wird. Unter Verwendung des umgekehrten Polaritäts-Promotors bereiten Sie 18 Millimeter runde Deckgläser mindestens einen Tag im Voraus vor, indem Sie sie 10 Minuten lang in einer 1 %igen Poly-L-Lysin-Lösung einweichen und anschließend am Vortag des Experiments über Nacht lufttrocknen lassen.Reinigen Sie eine magnetische Kulturkammer mit Kette, indem Sie ihre Bestandteile am Tag des Experiments über Nacht in 70 % Ethanol einweichen. Bereiten Sie das Kulturmedium unter aseptischen Bedingungen vor. Geben Sie fetalen Kälberserum, Penicillin-Streptomycin-Lösung und Insulin zu 10 Milliliter Schneiders Insektenmedium hinzu.Lassen Sie die saubere, magnetische Kulturschale in einer Zellkulturschutzschleuse an der Luft trocknen, bevor Sie restliches Ethanol durch Spülen mit vorbereitetem Kulturmedium abwaschen. Sobald diese Vorbereitungen abgeschlossen sind, kann die Dissektion des Drosophila-Augen-Gehirn-Komplexes beginnen. Wählen Sie zu Beginn dieses Verfahrens eine Larve im dritten Larvenstadium von der Seite eines Fläschchens und legen Sie sie für mehrere Minuten zur Abkühlung in einen Tropfen gekühltes Kulturmedium auf eine Petrischale auf Eis.Es wird empfohlen, die Larven abzukühlen, um die peristaltischen Körperkontraktionen zu verlangsamen und die Dissektion zu erleichtern. Anschließend wird die gekühlte Larve in einen Tropfen Kulturmedium auf einer Sard-beschichteten Schale unter dem Dissektionsmikroskop gegeben. Mit einem Paar feiner Dumont-Forceps wird die Larve festgehalten. Ungefähr ein Drittel vom hinteren Ende entfernt wartet man, bis die Larve ihre Mundhaken am vorderen Ende hervorstülpt; sobald die Mundhaken vollständig ausgefahren sind, werden sie mit einem zweiten Paar Forceps ergriffen.Um die Larven zu sezieren, ziehen Sie langsam die beiden Pinzettenpaare in entgegengesetzte Richtungen. Der Augen-Gehirn-Komplex zusammen mit Speicheldrüsen, Fettkörpern und imaginärem Gewebe löst sich vom Larvenkörper. Ziehen Sie nicht zu schnell an den Mundhaken, da sie sonst vom iBrain-Komplex abreißen können.Entfernen Sie Speicheldrüsen, Fettkörper und Imaginalanlagen. Mit feinsten Scheren bleiben die beiden Gehirnhälften sowie die Augenanlagen am ventralen Nervenstrang und den Mundhaken befestigt. Legen Sie danach ein 18 Millimeter großes Deckglas auf einen Objektträger, wobei eine Kante des Deckglases über die Kante des Objektträgers hinausragen soll. Um das Deckglas später leicht aufnehmen zu können, geben Sie einen Tropfen Kulturmedium auf das Deckglas.Greifen Sie mit einer Pinzette die Mundhaken und übertragen Sie den iBrain-Komplex in das Kulturmedium auf dem Deckglas. Sobald der Augen-Gehirn-Komplex auf das Deckglas übertragen wurde, verwenden Sie eine feine Präzisionsschere, um die Mundhaken vom Augen-Gehirn-Komplex abzuschneiden.Die Entfernung der Mundhaken ist für die Live-Bildgebung wichtig, da die Mundhaken in dem Kulturmedium weiterhin kontrahieren und dadurch das Gewebe während der Mikroskopie bewegen würden. Um die GL im Optikstiel sichtbar zu machen, lassen Sie den Gehirn-Optikstiel und die Augen-Imaginalscheibe intakt. Um die gliale Migration innerhalb der Augen-Imaginalscheibe zu visualisieren, schneiden Sie vorsichtig den Optikstiel, das dünne Gewebe, das das Gehirn und die Augenscheibe verbindet, durch und schieben Sie das Gehirn beiseite oder entsorgen Sie es.Heben Sie schließlich den Deckglaser mit einer Pinzette auf und zeichnen Sie mit einem Permanentstift einen Kreis unterhalb des gewünschten Gewebes. Dieser Kreis erleichtert später die Lokalisierung des Gewebes für die Mikroskopie. Nun ist die Augen-Imaginalplatte bereit, in einer magnetischen Kulturkammer montiert zu werden.Um die Augen-Imaginalanlage in einer magnetischen Kulturkammer zu montieren, greifen Sie mit einer Pinzette die hängende Kante der Deckglasplatte und übertragen diese vorsichtig auf die Bodenplatte der magnetischen Kammern der Chain-Line-Reihe, ohne das im Kulturmedium befindliche Gewebe zu stören. Danach setzen Sie den Silikon-O-Ring auf den Hauptkörper der Chain-Line-Kammer. Bringen Sie den Hauptkörper langsam auf der Bodenplatte an.Geben Sie Kulturmedium in die Kammer. Fügen Sie das Kulturmedium nicht zu schnell hinzu, da das Gewebe sonst gestört wird, um den Gasaustausch unter der Abdeckung zu ermöglichen. Füllen Sie die Kammer nicht vollständig, sondern legen Sie vorsichtig die unsichtbare Abdeckung auf die Kammer mit der gestrichelten Linie.Um wandernde Gliazellen zu visualisieren, stellen Sie die Kulturkammer auf den Objekttisch eines konfokalen oder Fluoreszenzmikroskops. Suchen Sie die Probe unter niedriger Vergr&ouml;&szlig;erung mithilfe des Kreises auf dem Deckglas als Referenz. Fokussieren Sie die Probe mit einem 40-fachen Objektiv.Lassen Sie das Gewebe absetzen und nehmen Sie alle 10 bis 15 Minuten über einen Zeitraum von drei bis vier Stunden hinweg Bilder der Augenscheibe oder der Optikasehne auf, sofern das Verfahren korrekt durchgeführt wurde. Dieses Protokoll führt zu einer Bildserie, auf der GFP-markierte Gliazellen zu sehen sind, die aus der Optikasehne in die imaginale Augenscheibe wandern. Während eine Live-Bildgebung über einen Zeitraum von 60 Minuten ausreichte, um Positionsveränderungen der Gliazellkerne bei einer wildtypischen imaginale Augenscheibe zu beobachten, verließen die Gliazellkerne bei einem Mutanten für ein für die Gliazellmigration notwendiges Gen die Optikasehne vollständig nicht.Wir haben Augen-Gehirn-Komplexe bis zu 240 Minuten lang kultiviert, bevor wir eine Schädigung des kultivierten Gewebes beobachteten. Ab dem Zeitpunkt von 240 Minuten beginnen wir, GFP-positive Zellen im Kulturmedium um die kultivierten Augen-Gehirn-Komplexe herum zu beobachten. Zudem sammelt sich GFP in diffusen Flecken im gesamten Gewebe an, was auf eine Beeinträchtigung der Gewebeintegrität hindeutet.Wir haben Ihnen gerade gezeigt, wie man Imaginalanlagen kultiviert, um die Migration von Gliazellen zu untersuchen. Vielen Dank fürs Zuschauen und viel Erfolg bei Ihren Experimenten.

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