Name: Maus Adrenal Chromaffin Zellisolation (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-01-05T00:00:00.000+00:00
Duration: 18 min 30 s
Description: Lernen Sie die Isolierung von Chromaffinzellen aus der Nebennierenmark der Maus. Diese Methode ermöglicht kontrollierte Studien zur Erregung-Sekretion-Kopplung in vitro.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Abkürzungen: ACC - Adrenal chromaffinen Zellen, E. Soln - Enzymlösung, E. DMEM - Enriched Dulbeccos Modified Eagle Medium <ol><li> Vorbereitung <ol><li> Add Papain auf die gewünschte Menge an E. Soln (40 Einheiten Papain / 1ml E. Soln.). </li><li> Aktivieren Papain mit Carbogen für etwa 15 Minuten auf dem Eis. Oxygenat Lockes Puffer auf Eis als auch. </li></ol></li><li> Zergliederung <ol><li> Verwenden Sie 8-10 Wochen Maus. </li><li> Vor Verdauung entfernen Sauerstoff Lockes Puffer und auf Eis stellen. </li><li> Siehe Video zum Präparieren Verfahren. </li><li> Einmal ausgeschnitten, mit Sauerstoff statt Drüsen in Lockes Puffer. </li></ol></li><li> Vorbereitung von Gland <ol><li> Entfernen Sie Fett aus Drüse. </li><li> Streifen Rinde ab Drüse. </li></ol></li><li> Enzymatische Verdauung <ol><li> Sterilfilter Sauerstoff Papain. </li><li> Machen Sie vier Pools des oxygenierten Papain auf eine Petrischale. <ol><li> 3 Pools sollte etwa 100uls werden. </li><li> 1 des Pools sollte etwa 400uls werden. </li></ol></li><li> Wash medullae durch Pools <ol><li> 1. bis der 3 100 ul-Pools. </li><li> Dann durch die 400ul Pool </li><li> Pippette 300ul E. Soln und Medulla Stücke aus 400ul Pool in Mikrozentrifugenröhrchen. </li><li> Qrap Parafilm auf Mikrozentrifugenröhrchen und in 37 ° C Wasserbad für 20min. </li><li> Denken Sie daran, mit Sauerstoff zu versorgen restlichen E. Soln mit Papain fortsetzen. </li><li> Nach 20 Minuten Sterilfilter mehr E. Soln. </li><li> Ersetzen Sie alte E. Soln Baden medullae mit neu gefiltert E. Soln. </li></ol></li></ol></li><li> Verreibungen <ol><li> Absaugen und entsorgen E. Soln. </li><li> Wash medullae in 1ml E. DMEM. </li><li> Absaugen und entsorgen E. DMEM. </li><li> Add 300ul E. DMEM und verreiben 20X mit 1ml Spitze. </li><li> Cut 200 &amp;mgr; l Spitze mit einer sterilen Rasierklinge. </li><li> Man reibt 5-10X mit Ausschnitt 200 &amp;mgr; l Spitze. </li><li> Discard E. DMEM Baden medullae Stücke. Medium enthält Schutt. </li><li> Add 300uls frischen E. DMEM in Stücke medullae. </li><li> Man reibt mit 200 &amp;mgr; l Spitze 20x </li><li> Pippette E. DMEM Mikrozentrifugenröhrchen withough medullae Stücke. Medium enthält freie ACC. </li><li> Add 300uls frischen E. DMEM in Stücke medullae. </li><li> Man reibt medullae mit einem 23,5 gauge Kanüle 20x. </li><li> Kombinieren E. DMEM aus beiden Verreibungen. Medullae Stücke sollten nicht anwesend sein und sollten nun eine federähnliche Aussehen. </li></ol></li><li> Plating <ol><li> Microfuge E. DMEM aus den letzten beiden Verreibung Schritte für 2,5 Minuten bei 3,7 g s. </li><li> Pellet in 50uls-200 E. DMEM, abhängig von nachfolgenden Experimenten. </li><li> Platte 10-30uls auf einem Deckglas. </li><li> Warten Sie 15 Minuten für die Zellen zu haften. </li><li> Add 750uls von E. DMEM. </li></ol></li></ol>

Die Autoren haben nichts offenzulegen.

maus adrenal chromaffin zellisolation

Mouse Adrenal Chromaffin Cell Isolation

Nebennierenmarks chromaffinen Zellkultur-Systeme sind äußerst nützlich für die Untersuchung der Anregungs-Sekretion Kopplung in einem in vitro-Einstellung. Dieses Protokoll stellt das Verfahren verwendet werden, um den Nebennieren zu sezieren und dann isolieren medulläre Region durch Abstreifen der Nebennierenrinde. Die Verdauung der Medulla in einzelne chromaffinen Zellen wird dann demonstriert.

Maus Adrenal Chromaffin Zellisolation

Kultursysteme aus chromaffinen Zellen des Nebennierenmarks sind äußerst nützlich für die Untersuchung der Erregungs-Sekretions-Kopplung in einem In-vitro-Setting. Dies ...

Hinweis: Dieses Video tut es nicht

Research

Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

Dieses Video demonstriert ein enzymfreies Protokoll zur Isolierung von Makrophagen aus dem Spinalganglion (DRG) der Maus unter Verwendung einer mechanischen Dissoziationstechnik. Nach der Homogenisierung des frisch entnommenen DRG-Gewebes werden Antikörper gegen die Zelloberflächenrezeptoren auf den Makrophagen verwendet, um die Zellen fluoreszierend zu markieren, gefolgt von einer Durchflusszytometrie, um das Vorhandensein von Makrophagen in der Probe zu bestätigen.

Isolierung von Makrophagen aus dem Spinalganglion der Maus mittels mechanischer Dissoziation

Dieses Video zeigt eine Peritonealspülungsmethode zur Isolierung reifer Bindegewebs-Mastzellen aus der Bauchhöhle erwachsener Mäuse. Nach der Isolierung einer Mischung aus primären Immunzellen aus der Bauchhöhle erfolgt die selektive Proliferation von Mastzellen unter geeigneten Kulturbedingungen.

Eine Technik zur Isolierung primärer Mastzellen aus einer Peritonealhöhle der Maus

Ein Schlüssel zur erfolgreichen Untersuchung der Mikroglia-Biologie ist die Erhaltung der Immunfunktion Mikroglia ex vivo bei der Isolierung von ZNS-Gewebe. Trenn Mikroglia über Dreh Schütteln Ergebnisse in hochreiner und immunofunctional Zellkulturen durch Fluoreszenz-Bildgebung, Immunzytochemie, und ELISA folgenden Mikroglia-Aktivierung mit der proinflammatorische Stimuli Lipopolysaccharide (LPS) und Pam 3 4 CSK (Pam) bewertet.

Isolation kortikaler Mikroglia mit bewahrten Immunophänotyp und Funktionalität aus Murine Neugeborene

Polarisation-basierte Total Internal Reflection Fluorescence Microscopy (pTIRFM) ermöglicht die Echtzeit-Erkennung von Zellmembrandynamik. Dieser Artikel beschreibt die Umsetzung der pTIRFM für das Studium der Membran Umbau während regulierten Exozytose. Die Technik ist generalisierbar auf andere Prozesse in der Zellbiologie, die Veränderungen in Membranform, die direkt oder indirekt beteiligen.

Imaging Plasmamembran Verformungen Mit pTIRFM

Nach der Exozytose wird die fusionierte Plasmamembran durch einen Prozess gewonnen, der als Endozytose bekannt ist. Dieser Mechanismus reformiert neue synaptische Vesikel für die nächste Runde der Freisetzung. Einzelne endozytäre Ereignisse werden durch die Verwendung der zellgebundenen Kapazitätsaufzeichnungen in chromaffinen Nebennierenzellen der Maus erfasst und analysiert.

Methoden für die Cell-Attached-Kapazitätsmessungen in Maus-chromaffinen Nebennierenzell

Hier präsentieren wir eine Methode, um die Nebennieren von Mäusen zu isolieren, das Gewebe zu beheben, sie Abschnitt und durchführen Immunfluoreszenz-Färbung.

Isolierung, Fixierung und Immunfluoreszenz Imaging der Maus Nebennieren

Das Hormon der Nebennierenrinde sezerniert ist von entscheidender Bedeutung für die Tiere gegen Stress und Krankheiten. Hier präsentieren wir ein Protokoll zur Kultur der primären Ratte Nebenniere Zellen. Es könnte eine gute in-vitro-Plattform für die Untersuchung der Mechanismen des Reagens des Interesses an Nebennieren Steroidgenese und Lipid-Biosynthese.

Primärkultur von Ratte Nebennierenrindeninsuffizienz Zellen und Assays Steroidogenic Funktionen

Hier stellen wir ein mechanisches Dissoziationsprotokoll vor, um Makrophagen aus dem dorsalen Wurzelganglien für Phänotypisierung und funktionelle Analyse schnell zu isolieren.

Schnelle Isolierung von Dorsalwurzel Ganglion Makrophagen

Dieses Protokoll beschreibt ein konfokales Bildgebungsverfahren zum Nachweis von drei Fusionsmodi in rindischen Nebennierenchromaffinzellen. Diese Fusionsmodi umfassen 1) Close-Fusion (auch Kiss-and-Run genannt), bei der sich die Fusionspore öffnet und schließt, 2) Stay-Fusion, bei der die Fusionspore geöffnet und die geöffnete Pore erhalten bleibt, und 3) Shrink-Fusion, einschließlich der Schrumpfung der fusionierten Vesikel.

Konfokale Mikroskopie zur Messung von drei Modi der Fusionsporendynamik in Nebennierenchromaffinzellen

In dieser Studie wurde ein optimiertes Protokoll für die Isolierung von murinen Mesangialzellen (MCs) und deren ex vivo Zellkultur entwickelt. Diese Zellen können mehrfach passageiert, eingefroren, wiederbelebt und kultiviert werden, ohne das Zellwachstum oder die Proteinexpression zu beeinträchtigen.

Optimierung der Isolierung und Reinigung von murinen glomerulären Mesangialzellen

Ein robuster und reproduzierbarer Ansatz zur Etablierung von 2D-Primärkulturen von Zona-Glomerulosa- und Zona-Fasciculata-angereicherten Zellen wurde für den Nebennieren-Cortex der Maus entwickelt. Dieses System bewahrt wichtige molekulare und funktionelle Merkmale jeder Zone und ermöglicht so eine gezielte Untersuchung von Signalwegen, Hormonproduktion und dem Verhalten der Nebennierenkortikale Zellen ex vivo.

Etablierung von zonenangereicherten Primärkulturen aus dem Nebennierenkortex der Maus

Lernen Sie die Isolierung von Chromaffinzellen aus der Nebennierenmark der Maus. Diese Methode ermöglicht kontrollierte Studien zur Erregung-Sekretion-Kopplung in vitro.

Maus Adrenal Chromaffin Zellisolation

Weitere Videos entdecken