Name: Heterotope und orthotopen Tracheal Transplantation in Mäuse als Modelle benutzt, um die Entwicklung von obliterans Airway Disease Study (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-01-20T18:15:00.000+00:00
Duration: 9 min 10 s
Description: Erfahren Sie die heterotope und orthotope Tracheatransplantation bei Mäusen zur Untersuchung von obliterativer Atemwegserkrankung. Diese Modelle ermöglichen wichtige Einblicke in Transplantationskomplikationen.

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Die Autoren danken Christiane Pahrmann (Lab Manager).

<ol><li> Männliche Balb / C Mäuse (8-12 Wochen) werden von Charles River Laboratories (Sulzfeld, Deutschland) erworben. Die Mäuse werden unter üblichen Bedingungen, gefüttert Standard Mäuse Futter und Wasser ad libitum untergebracht. </li><li> 2% Isofluran ist für Anästhesie eingesetzt. </li></ol> SPENDER VORBEREITUNG <ol><li> Shave der Bauch Haare und desinfizieren Sie die Fläche mit Betaisodona. </li><li> Unter mikroskopischer Sicht, führen Sie eine Mittellinie zervikale Inzision von der Höhe des Kehlkopfes bis zum Brustbein. </li><li> Entfernen Sie das subkutane Fett und die Halsmuskulatur zu einem klaren Blick auf die Luftröhre zu bekommen. </li><li> Präparieren Sie die Luftröhre von allen umliegenden Geweben, wie der Speiseröhre, Nerven, Arterien und des Bindegewebes. </li><li> Entfernen Sie die gesamte Trachea (vom Kehlkopf bis zur Bifurkation). </li><li> Spülen Sie die Transplantation mit kalter Kochsalzlösung und speichern das Transplantat bei 4 ° C. </li><li> Der Spender ist durch Genickbruch nach der Ernte der Luftröhre eingeschläfert. </li></ol> EMPFÄNGER: heterotope Transplantation <ol><li> Shave der Bauch Haare in einem breiten Rand um den Inzisionsstelle und desinfizieren Sie die Fläche, die dreimal mit Betaisodona (betadine) durch Alkohol. Die Augen sollten mit einer Augensalbe Produkt geschmiert werden, um die Hornhaut vor dem Austrocknen zu verhindern. </li><li> Führen Sie eine mediane Laparotomie und platzieren Sie den Darm in eine sterile, befeuchtet Handschuh. </li><li> Verbreiten Sie das große Netz sorgfältig. Legen Sie das Transplantat in den Mittelpunkt und fixieren es mit einem einzigen Naht mit 8-0 (Prolene, Ethicon, Deutschland). </li><li> Decken Sie die Transplantation mit dem Omentum majus und fixieren das Transplantat mit einer einzigen Naht 8-0 (Prolene, Ethicon, Deutschland). </li><li> Stellen Sie den Darm wieder in den Bauch und bündig mit warmer, steriler Kochsalzlösung vor der Schließung. </li><li> Close up in 2 Schichten - Bauchwand und Hautschicht mit kontinuierlicher Muster mit 7-0 Prolene für den Muskelaufbau und 7-0 Vicryl für die Haut. </li></ol> EMPFÄNGER: orthotopen Transplantation <ol><li> Shave der Bauch Haare in einem breiten Rand um den Inzisionsstelle und desinfizieren Sie die Fläche, die dreimal mit Betaisodona (betadine) durch Alkohol. Die Augen sollten mit einer Augensalbe Produkt geschmiert werden, um die Hornhaut vor dem Austrocknen zu verhindern. </li><li> Teilen Sie die Halsmuskulatur, die gesamte laryngotracheale komplexer visualisieren. </li><li> Sorgfältig sezieren die Luftröhre aus dem umgebenden Gewebe, kümmern sich um die laryngeus recurrens zu bewahren. </li><li> Teilen Sie die Luftröhre drei Ringe caudal aus dem Ringknorpel. Das Tier hält physiologische Atmung über die Tracheotomie. </li><li> Stellen Sie sicher, sauber tracheale Kanten in den Empfängerländern als auch in das Transplantat. </li><li> Das Transplantat wird zwischen dem Empfänger Luftröhrendefekten und orientiert sich an anatomischen Polarität zu halten zwischengeschaltet. </li><li> Mit 8-0 (Prolene, Ethicon, Deutschland) anastomosieren die Spendertransplantat mit dem distalen (mediastinal) Luftröhre. Die hintere Seite der Anastomose ist in Dauerbetrieb Weise durchgeführt. Die Vorderseite ist dann abgeschlossen mit unterbrochenen Nähten. </li><li> Entfernen Sie alle Sekreten aus den Atemwegen. </li><li> Die proximale Anastomose wird dann in der gleichen Weise wie die distalen abgeschlossen. </li><li> Stellen Sie sicher, Integrität der Atemwege und eine adäquate Spontanatmung. </li><li> Stellen Sie den Gurt Muskeln und in der Nähe des subkutanen Gewebes und der Haut Schicht mit 6-0 Nähten (Vicryl, Ethicon, Deutschland) mit kontinuierlicher Muster. </li><li> Verwenden Sie Injektionsanästhesie für den Empfänger, damit das Tier physiologische Atmung durch die Luftröhre zu behalten. Eine Kombination aus 75/1/0.2 mg / kg Propofol, Medetomidin und Fentanyl ist jeweils für die IP-Narkose bei Mäusen verwendet. </li></ol><img src="/files/ftp_upload/1437/1437Fig1.jpg" alt="Abbildung 1" /> Abbildung 1: Donor Luftröhre. 1A: Donor Luftröhre in situ nach der Zubereitung. 1B: Abgeschnittene Spender Luftröhre. 1C: Donor Luftröhre nach Explantation. <img src="/files/ftp_upload/1437/1437Fig2.jpg" alt="Abbildung 2" /> Abbildung 2: Heterotope Modell. 2A: Das Transplantat wird in der Mitte des großen Netzes positioniert. 2B: Das Transplantat wird an beiden Enden mit einer einzigen Naht fixiert. 2C: Das Transplantat wird in das große Netz gewickelt und mit einer einzigen Naht. <img src="/files/ftp_upload/1437/1437Fig3.jpg" alt="Abbildung 3" /> Abbildung 3: orthotopen Modell. 3A: Das Transplantat wird zwischen dem Empfänger Luftröhrendefekten und die hintere Wand dazwischen ist in Dauerbetrieb Mode anastomosiert. 3B: Die vordere Wand ist fertig mit einer einzigen Naht. <img src="/files/ftp_upload/1437/1437Fig4.jpg" alt="Abbildung 4" /> Abbildung 4: Histologie. 4A: Zurückgewonnen heterotope Transplantation Luftröhre nach 28 Tagen in der H + E staining (15x). Beachten Sie die 100% luminalen Auslöschung. 4B: Zurückgewonnen orthotopen Transplantation Luftröhre nach 60 Tagen in der H + E-Färbung (15x). Maximal erreicht luminalen Auslöschung beträgt ca. 45%. <table border="1"><tbody><tr><td></td><td> Heterotope Tracheal Transplantation Modell </td><td> Orthotopen Transplantation Tracheal-Modell </td></tr><tr><td> Vorteile </td><td> + Leicht zu führen + Luminal Auslöschung alles Atemwege Okklusion nach 28 Tagen + Keine körperliche Zuwendung von Tieren durch OAD </td><td> + Physikalische Belüftung des Transplantats + Inhalative Drug Administration möglich + Starke immunologischen Reaktionen, wie alloreaktive IgM Antikörper-Produktion + Physiologische Thorax Milieu + Tracheal-tracheale Anastomose imitiert die klinischen </td></tr><tr><td> Nachteile </td><td> - Keine Belüftung von transplantierten Luftröhre - Keine Bewertung von inhalativen Erreger möglich - Hemmung der mukoziliäre Clearance und behielt Sekrete - Peritoneal Mikroumgebung statt Thorax Milieu </td><td> - Chirurgische Ausbildung notwendig - Luminal Auslöschung mit luminalen Okklusion App. 45% nach 60 Tagen - Tiere entwickeln können Symptome von OAD </td></tr></tbody></table> Tabelle 1: Vor-und Nachteile der heterotopen und orthotopen Tracheal Transplantation.

<ol><li>Adams, B., Berry, G., Huang, X., Shorthouse, R., Brazelton, T., Morris, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunosuppressive+therapies+for+the+prevention+and+treatment+of+obliterative+airway+disease+in+heterotopic+rat+trachea+allografts%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Immunosuppressive therapies for the prevention and treatment of obliterative airway disease in heterotopic rat trachea allografts.</a> Transplantation. 69, 2260-2266 Forthcoming.</li>
<li>Adams, B., Brazelton, T., Berry, G., Morris, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+respiratory+epithelium+in+a+rat+model+of+obliterative+airway+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">The role of respiratory epithelium in a rat model of obliterative airway disease.</a> Transplantation. 69, 661-665 Forthcoming.</li>
<li>Deuse, T., Schrepfer, S., Reichenspurner, H., Hoyt, G., Fischbein, M., Robbins, R., Pelletier, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Techniques+for+experimental+heterotopic+and+orthotopic+tracheal+transplantations+%26%23x2013%3B+when+to+use+which+model%3B+Transplant+Immunology+17%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Techniques for experimental heterotopic and orthotopic tracheal transplantations &#x2013; when to use which model; Transplant Immunology 17.</a> , 255-261 (2007).</li>
<li>Hele, D., Yacoub, M., Belvisi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+heterotopic+tracheal+allograft+as+an+animal+model+of+obliterative+bronchiolitis%5BTitle%5D)+AND+%22Respiratory+Research%22%5BJournal%5D)">The heterotopic tracheal allograft as an animal model of obliterative bronchiolitis.</a> Respiratory Research. 2, 169-183 Forthcoming.</li>
<li>Hertz, M., Jessurun, J., King, M., Savic, S., Murray, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reproduction+of+the+obliterative+bronchiolitis+lesion+after+heterotopic+transplantation+of+mouse+airways%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Reproduction of the obliterative bronchiolitis lesion after heterotopic transplantation of mouse airways.</a> American Journal of Pathology. 142, (1993).</li>
<li>McDyer, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+and+murine+obliterative+bronchiolitis+in+transplant%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+American+Thoracic+Society%22%5BJournal%5D)">Human and murine obliterative bronchiolitis in transplant.</a> Proceedings of the American Thoracic Society. 4, 37-43 Forthcoming.</li>
<li>Schrepfer, S., Deuse, T., Hoyt, G., Sheikh, A., Hoffmann, J., Reichenspurner, H., Robbins, R., Pelletier, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+orthotopic+tracheal+transplantation%3A+the+stanford+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Microsurgery%22%5BJournal%5D)">Experimental orthotopic tracheal transplantation: the stanford technique.</a> Microsurgery. 27, 187-189 (2007).</li>
</ol>

Sonja Schrepfer hat ein Forschungsstipendium der Deutschen Forschungsgemeinschaft (DFG) (SCHR992/3-1) erhalten haben.] Alle Tiere erhielten menschlicher Obhut in Übereinstimmung mit den Prinzipien des Laboratory Animal Care, wurden Experimente an Tieren in Übereinstimmung mit den Richtlinien und Vorschriften her von der Nationalen Gesellschaft für Medizinische Forschung und der Leitfaden für die Pflege und Verwendung von Labortieren durch die veröffentlichten durchgeführt National Institutes of Health (National Institutes of Health Veröffentlichung 85-23, revised 1985). Alle Tiere wurden von Charles River Laboratories (Sulzfeld, Deutschland) erhalten und wurden in der Tierpflege Einrichtungen des Universitätsklinikums Hamburg Eppendorf gepflegt. Die Tiere erhielten Standard-Futter und Wasser ad libitum.

Mäuse sind in verschiedenen transgeneic und Knock-out-Modell zur Verfügung, und daher geeignet, mechanistische Fragen im Zusammenhang mit OAD (4) zu studieren. Beide Modelle der Luftröhre Transplantation in diesem Video gezeigt kann als zuverlässige Modelle für das Studium OAD Entwicklung genutzt werden. Zeigt jedoch, jedes Modell Vor-und Nachteile. Die heterotopen Trachea-Transplantation ist einfach durchzuführen und erfordert keine spezielle chirurgische Ausb...

heterotope und orthotopen tracheal transplantation in mäuse als modelle benutzt, um die entwicklung von obliterans airway disease study

Heterotopic and Orthotopic Tracheal Transplantation in Mice used as Models to Study the Development of  Obliterative Airway Disease

Obliterans Atemwegserkrankung (OAD) ist die wichtigste Komplikation nach Lungentransplantationen, dass das langfristige Überleben (1-7) Grenzen. Zur Untersuchung der Pathophysiologie, Behandlung und Prävention von OAD, verschiedenen Tiermodellen der Tracheal-Transplantation bei Nagetieren entwickelt (1-7). Hier verwenden wir zwei etablierte Modelle der Luftröhre Transplantation, die heterotopen und orthotopen Modell und zeigen ihre Vor-und Nachteile. Für die heterotopen Modell wird der Spender Luftröhre in das große Netz des Empfängers gewickelt, während die Spender Luftröhre wird durch End-to-End-Anastomose in der orthotopen Modell anastomosiert. In beiden Modellen ist die Entwicklung von obliterative Läsionen histologischen ähnlich klinischen OAD nachgewiesen (1-7). Dieses Video zeigt, wie beide ausführen, vergleicht die heterotopen sowie orthotopen Transplantation Tracheal-Technik bei Mäusen, und der zeitliche Verlauf der OAD Entwicklung in beiden Modellen mit der Histologie.

Dieses Video zeigt und vergleicht zwei experimentellen Modellen zur Entwicklung von obliterative Atemwegserkrankung (OAD) bei Mäusen, die heterotopen und orthotopen Transplantation Tracheal-Modell zu studieren.

Heterotope und orthotopen Tracheal Transplantation in Mäuse als Modelle benutzt, um die Entwicklung von obliterans Airway Disease Study

Die obliterierende Atemwegserkrankung (Obliterative Airway Disease, OAD) ist die Hauptkomplikation nach Lungentransplantationen, welche das Langzeitüberleben einschränkt (1-7).
Um die ... zu untersuchen

Sowohl die heterotopische als auch die orthotopische Tracheatransplantation beginnen mit der Entnahme der Spendertrachea für die heterotopische Transplantation. Beim Empfänger wird ein Bauchschnitt angelegt und die Därme auf einen Handschuh gelegt. Für die orthotopische Transplantation wird die Spendertrachea in die Mitte des großen Netzes gelegt und mit zwei Stichen fixiert.Nachdem beim Empfänger ein Halschnitt angelegt wurde, wird die Luftröhre vom umgebenden Gewebe freigelegt und durchtrennt. Anschließend wird die Spenderluftröhre zwischen die beiden Enden der Empfängerluftröhre eingesetzt und die Luftröhren werden zusammengenäht. Hallo, ich bin Sonya Refa.Ich bin Professor für Immunologie und Herzchirurgie an der Abteilung für Herz- und Gefäßchirurgie im UniversitätsHerzZentrum Hamburg. Mein Labor konzentriert sich auf die Transplantationsimmunologie und die immunbiologischen Aspekte von Stammzellen. Heute stellen wir Ihnen das Moon-Auto-Thema und das Transplantationsmodell des Zweigs hier vor.Hallo, ich komme aus dem TSI-Labor. Wir verwenden das ebenfalls relevante Thema und die heterotopische Tracheatransplantations-Mausmodelle, um die Mechanismen hinter der Entstehung obstru

heterotopic-orthotopic-tracheal-transplantation-mice-used-as-models

Research

Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

Bronchiolitis obliterans ist der Schlüssel Hindernis für die langfristige Überleben der Lunge Transplantatempfänger und das Fehlen einer robusten präklinischen Modell schließt die Prüfung Bronchiolitis obliterans Immunpathogenese. Im Gegensatz zu anderen Organtransplantationen hat vaskularisierten Maus Lungentransplantation erst vor kurzem entwickelt worden. Hier zeigen wir unser eigenständig entwickeltes Modell Bronchiolitis obliterans nach murinen orthotopen Single-Lungen-Transplantation.

Entwicklung einer Bronchiolitis obliterans in einem Mausmodell der orthotopen Lungentransplantation

Wir haben eine einfache, zuverlässige und relativ kostengünstiges Verfahren zur Intubation bei Mäusen durch direkte Laryngoskopie mit einem Otoskop mit einem 2,0-mm-Spekulum entwickelt. Diese Technik ist atraumatisch und für wiederholte Messungen bei chronischen Experimente eingesetzt werden. Wir finden es besser als zuvor berichtet, Tracheostoma oder chirurgischen Techniken.

Intubation bei Mäusen<em&gt; Über</em&gt; Direkte Laryngoskopie Mit einem Otoskop

Die Verwendung eines Modells, das den Zustand von Lungenerkrankungen in Menschen nachahmt, ist für die Untersuchung der Pathophysiologie und / oder Ätiologie von bestimmten Krankheiten und für die Entwicklung von therapeutischen Eingriff. Hier eine nicht-invasive Methode, die intratracheale Intubation direkt liefern kann exogene Materialien Maus Lunge wird vorgestellt.

Nichtinvasive Intratracheale Intubation, die Pathologie und Physiologie der Maus Lung Study

Um die kombinierte Allotransplantation von soliden Organen und vaskularisierten Kompositen zu untersuchen, beschreiben wir ein neuartiges heterotopes En-bloc-Modell für Brustwand-, Thymus- und Herztransplantationen bei Mäusen unter Verwendung einer zervikalen Non-Sewure-Manschettentechnik.

A Novel Mikromodell für Heterotope, En Bloc Brustwand, Thymus und Herz-Transplantation bei Mäusen

Dieser Artikel stellt eine schnelle und einfache Methode zur Bleomycin direkt in die Luftröhre Maus über Intubation verabreicht wird. Die wichtigsten Vorteile dieser Methode sind, dass sie in hohem Maße reproduzierbar, leicht zu beherrschen ist, und nicht spezialisierte Ausrüstung oder langwierige Wiederherstellungszeiten erfordern.

Ein verbessertes Verfahren zur schnellen Intubation der Luftröhre in Mice

Transplantat Stenose stellt eine kritische Hindernis Gewebezüchtungen Atemwege Ersatz. Um zellulären Mechanismen, die Stenose zu untersuchen, verwenden wir ein Mausmodell entwickelt trachealen Gewebeersatz mit kernigen Knochenmark mononukleären Zellen (BM-MNC). Hier zeigen wir unsere Protokoll, einschließlich Gerüst Herstellung, BM-MNC Isolierung Transplantat Aussaat und Implantation.

Aussaat und Implantation von einem biosynthetischen Tissue-Engineering trachealen Transplantat in einem Mausmodell

Das Ziel dieses Artikels ist es, eine verfeinerte Methode der Intubation der Labormaus zu beschreiben. Die Methode ist nichtinvasiv und daher ideal für Studien, die eine serielle Überwachung der Atemfunktion und/oder die Instillation von Behandlungen in die Lunge erfordern.

Wiederholte orotracheale Intubation bei Mäusen

Verschiedene Tiermodelle der angeborenen zwerchmatischen Hernie und fetalen Trachealverschluss stellen Vor- und Nachteile in Bezug auf ethische Fragen, Kosten, chirurgische Schwierigkeiten, Größe, Überlebensraten und Verfügbarkeit genetischer Werkzeuge dar. Dieses Modell bietet ein neues Werkzeug, um die Auswirkungen von Trachealokklusion und erhöhtem Luminaldruck auf die Lungenentwicklung zu untersuchen.

Transuterine Fetal Tracheal Okklusion Modell bei Mäusen

Das Ziel dieses Manuskripts ist es, die mikrochirurgischen Schritte zu beschreiben, die erforderlich sind, um eine heterotope Kehlkopftransplantation bei Mäusen durchzuführen. Die Vorteile dieses Mausmodells im Vergleich zu anderen Tiermodellen der Kehlkopftransplantation sind seine Kosteneffizienz und die Verfügbarkeit immunologischer Assays und Daten.

Ein heterotopisches Mausmodell zur Untersuchung der Kehlkopftransplantation

Das Modell der intrapulmonalen Trachealtransplantation (IPTT) ist wertvoll für die Untersuchung der obliterativen Atemwegserkrankung (OAD) nach Lungentransplantation. Es bietet Einblicke in das lungenspezifische immunologische und angiogene Verhalten bei der Atemwegsobliteration nach Allotransplantation mit hoher Reproduzierbarkeit. Hier beschreiben wir das IPTT-Verfahren und die zu erwartenden Ergebnisse.

Intrapulmonale Trachealtransplantation bei Mäusen: Ein Modell zur Untersuchung obliterativer Atemwegserkrankungen nach Lungentransplantation

Erfahren Sie die heterotope und orthotope Tracheatransplantation bei Mäusen zur Untersuchung von obliterativer Atemwegserkrankung. Diese Modelle ermöglichen wichtige Einblicke in Transplantationskomplikationen.

Heterotope und orthotopen Tracheal Transplantation in Mäuse als Modelle benutzt, um die Entwicklung von obliterans Airway Disease Study (Video) | JoVE Journal

Heterotope und orthotopen Tracheal Transplantation in Mäuse als Modelle benutzt, um die Entwicklung von obliterans Airway Disease Study

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