Name: Murine Bioluminescent Leber Tumor-Modell (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-07-17T17:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 23 s
Description: Erfahren Sie eine chirurgische Methode zur Induktion orthotoper biolumineszenter Lebertumoren in Mäusen. Dieses Modell ermöglicht die nicht-invasive Überwachung von Tumorwachstum mittels Ganzkörper-Lumineszenzbildgebung für Onkologieforschung.

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Diese Arbeit wurde durch die Cork South Infirmary Victoria University Hospital Breast Fonds, die Irish Cancer Society (CRI07TAN) und Cork Krebsforschungszentrum finanziert. Lewis Lungenkrebs-Zelllinie stabil exprimieren Luciferase war eine Art Geschenk von Dr. Karin Jooss, Cell Genesys, Inc., San Francisco, USA.

Einführung Die Leber ist oft der erste Ort der Metastasen und kann der einzige Ort der Ausbreitung in nicht weniger als 30 40% der Patienten mit fortgeschrittener Erkrankung sein. Allerdings Optionen zur Behandlung von metastasierenden Tumoren der Leber sind nur wenige mit einer Minderheit der Patienten für Resektion und nur 23% größeren Responder Chemotherapeutika. Präklinische Forschung in diesem Bereich durch das Fehlen eines geeigneten Mausmodell zu isolieren Lebererkrankung Studie beschränkt. Wir beschreiben eine Split-Milz-Ansatz, mit dem zuverlässig einheitliche, diffuse Lebermetastasen werden kann. Resektion von dieser Hälfte der Milz verhindert die Folgen der Milztumor Wachstum und die andere Hälfte der Milz ist mit einem intakten Pfortaderkreislauf zur Milz Immunsystem schützenden Eigenschaften halten zurückgegeben. Das Modell, das wir beschreiben, ist ziemlich einfach durchzuführen und kann schnell durch einen einzigen Schnitt gemacht werden. Die Biolumineszenz Eigenschaften des Tumor-Zelllinie erlaubt eine genaue Quantifizierung Ansprechen auf die Behandlung ohne Tieropfer. Protokoll I. Cell Preparation <ol><li> Lewis Lungenkarzinom-Zellen sind Dulbecco Modified Essential Medium mit 10% fötalem Kälberserum bei 37 ergänzt ° C, 5% CO 2 angebaut und geerntet durch Trypsinierung bei sub-konfluenten. </li><li> Die Zellen wurden gezählt mit einem NucleoCounter (Chemo-metec, Dänemark) und eine einzelne Zelle Suspension von 1 x 10 6 Zellen in 200 ul wurde in serumfreien Medien vorbereitet. </li></ol> II. Maus Vorbereitung Hinweis: Alle Arbeiten wurden von der Ethikkommission des University College Cork genehmigt. In unserem Labor verwenden wir Injektionsnarkosemittel, um die Maus zu betäuben, alternativ kann man Inhalationsanästhetika zu verwenden, um denselben Effekt zu erzielen. Die Maus-Stamm verwendeten wir die haarlose MF1 nu / nu-Stamm von Harlan Laboratories (Oxfordshire, England) gewonnen. Weibliche MF1 nu / nu Mäuse mit einem Gewicht 16-22 g und von 6-8 Wochen alt waren in diesem Experiment einbezogen. Andere Stämme wie die C57-und Balb / c kann auch mit geeigneten Tumor-Zelllinien verwendet werden. <ol><li> Anästhesie wurde durch intraperitoneale Injektion von 100 ul von 1,5 mg Ketamin und 300 ug Xylazin geliefert. </li><li> Die Narkosetiefe wird anhand Zehen klemmen. Es sollte kein Rückzug Reflex mit toe Prise werden. </li><li> Die narkotisierten Maus richtig positioniert ist und mit Klebeband über ein Heizkissen. </li><li> Der Bauch ist mit einem 10% betadine Lösung vorbereitet. </li><li> Die Bauch-und OP-Gebiet sind in einer sterilen Mode drapiert. </li></ol> III. Bauchschnitt <ol><li> Eine kleine subkostalen Einschnitt in die Haut gemacht. </li><li> Der Schnitt wird um 2-3 cm verlängert. </li><li> Die Bauchwandmuskulatur wurden geteilt und Bauchhöhle getreten. </li></ol> IV. Belichtung und Division of Spleen <ol><li> Die Milz ist mobilisiert und sanft exteriorisierten auf einem vorgestanzten steriler Gaze. </li><li> Zwei 4-0 Vicryl Ligaturen um die Mitte des Körpers der Milz gebunden. </li><li> Milz ist zwischen den beiden Ligaturen die Schaffung von zwei hemi-Milzen unterteilt. </li></ol> V. Injektion von Zellen in die Hemi-Milz <ol><li> A 27 G wird benutzt, um eine 100-ul-Volumen von Zellen in einem Hemi-Milz zu injizieren. </li><li> Tumorzellen sind zulässig, um die Leber für 10 Minuten eine ausreichende Zeit für die Mehrheit der injizierten Zellen in die Leber gelangen abtropfen lassen. </li></ol> VI. Exzision von Hemi-Milz-, Viszeral-Verschluss und Wiederherstellung <ol><li> Die injizierten Hemi-Milz herausgeschnitten wird. </li><li> Die anderen Hemi-Milz ist in die Bauchhöhle zurück. </li><li> Die Muskelschicht ist mit 4-0 PDS Naht mit einem einfachen Laufstich geschlossen. </li><li> Die Bauchhaut wird mit 4-0 Prolene mit unterbrochenen Nähten verschlossen. </li><li> Fluid-Bolus verabreicht und postoperativen Analgesie, Carpofen (5 mg / kg) ist durch ip-Injektion für 24 h nach der Operation verabreicht wird. </li><li> Die Maus ist erlaubt, aus der Narkose erholen </li></ol> VII. IVIS Whole Body Imaging Bioluminescent <ol><li> Die Maus ist betäubt mit injizierbaren Betäubung. </li><li> Luciferin-Substrat wird durch intra-peritoneale Injektion 10 Minuten vor dem Imaging gegeben </li><li> Mäuse sind auf der Bühne platziert und bebildert für 3 min mit IVIS Ganzkörper-Imaging-System </li><li> Lumineszenz aus der Leber lassen sich mit einem region of interest-Tool werden </li></ol> VIII. Die Exposition von Mausleber <ol><li> Die Maus ist betäubt mit injizierbaren Betäubung. </li><li> Ein Dach Bauchschnitt ermöglicht die Visualisierung der diffuse Lebermetastasen in vivo. </li><li> Die Maus ist durch Genickbruch getötet und die Leber kann zur weiteren Analyse ausgeschnitten werden. </li></ol>_upload/1977/1977fig1.jpg "alt =" Bild 1 "/&gt; Abbildung 1. Frisch herausgeschnitten murine unbehandelt und Tumor-infiltrierte Leber. <img src="/files/ftp_upload/1977/1977fig2.jpg" alt="Abbildung 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Abbildung 2"> Abbildung 2. Kinetik der Leber Tumorwachstum durch IVIS Ganzkörperbildgebungssysteme belegt.

<ol><li>Kasuya, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+subcutaneous+spleen+reservoir+for+multiple+portal+venous+injections+to+treat+liver+malignancies%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Mouse models of subcutaneous spleen reservoir for multiple portal venous injections to treat liver malignancies.</a> Cancer Res. 65, 3823-3827 (2005).</li>
<li>Liu, Q. Z., Tuo, C. W., Wang, B., Wu, B. Q., Zhang, Y. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liver+metastasis+models+of+human+colorectal+carcinoma+established+in+nude+mice+by+orthotopic+transplantation+and+their+biologic+characteristic%5BTitle%5D)+AND+%22World+J+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">Liver metastasis models of human colorectal carcinoma established in nude mice by orthotopic transplantation and their biologic characteristic.</a> World J Gastroenterol. 4, 409-411 (1998).</li>
<li>Li, Z. Y., Ni, S., Yang, X., Kiviat, N., Lieber, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Xenograft+models+for+liver+metastasis%3A+Relationship+between+tumor+morphology+and+adenovirus+vector+transduction%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">Xenograft models for liver metastasis: Relationship between tumor morphology and adenovirus vector transduction.</a> Mol Ther. 9, 650-657 (2004).</li>
<li>Cashman, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+gene+therapy+as+a+neoadjuvant+to+surgical+excision+to+control+metastatic+cancers%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Lett%22%5BJournal%5D)">Immune gene therapy as a neoadjuvant to surgical excision to control metastatic cancers.</a> Cancer Lett. , (2008).</li>
</ol>

Die Entwicklung von In-vivo-Modelle für die Untersuchung von Lebermetastasen wird immer steigt mit dem Aufkommen von neuen therapeutischen Strategien wichtig. Für die genaue Untersuchung von neuen Strategien, Tiermodelle sollte relativ einfach durchzuführen, bilden eine bedeutende Anzahl von Metastasen, beinhalten alle Schritte der metastatischen Kaskade und ein Reporter-System, das Erfassen und Zählen von einer begrenzten Anzahl von metastatischen Zellen ermöglicht. Die Split-Milz-Ansatz wie beschrieben über e...

<table><tbody><tr><td>DMEM</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D6429</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D8537</td><td></td></tr><tr><td>Ketamin</td><td>V&amp;eacute;toquinol</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Xylazin</td><td>V&amp;eacute;toquinol</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Carprofen</td><td>V&amp;eacute;toquinol</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Videne</td><td>Ecolab</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Vicryl 4-0 Nahtmaterial</td><td>Ethicon Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PDS 4-0 Nahtmaterial</td><td>Ethicon Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Prolene 4-0 Nahtmaterial</td><td>Ethicon Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Firefly-Luciferin</td><td>Biosynth International, Inc</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

murine bioluminescent leber tumor-modell

Murine Bioluminescent Hepatic Tumour Model

Dieses Video beschreibt die Einrichtung von Lebermetastasen in einem Mausmodell, die anschließend durch Biolumineszenz Imaging analysiert werden können. Tumorzellen sind speziell auf die Leber, um eine lokalisierte Lebertumor induzieren, über die Mobilisierung der Milz und eine Aufspaltung in zwei, intakt gelassen den Gefäßstiel für jede Hälfte der Milz. Lewis Lungenkarzinom-Zellen, die konstitutiv das Luciferase-Gen (luc1) sind in einem Hemi-Milz, die dann reseziert wird 10 Minuten später geimpft. Die anderen Hemi-Milz ist intakt gelassen und kehrte auf den Bauch. Liver Tumorwachstum kann durch Biolumineszenz-Bildgebung mit dem IVIS Ganzkörperbildgebungssysteme System überwacht werden. Quantitative Bildgebung des Tumorwachstums mit IVIS bietet eine präzise Quantifizierung der vitalen Tumorzellen. Tumor Zelltod und Nekrose durch medikamentöse Behandlung ist eine frühzeitige durch eine Reduktion der Biolumineszenz-Signal angezeigt. Dieses Mausmodell ermöglicht die Untersuchung der zugrunde liegenden Mechanismen metastasierten Tumor-Zell-Überleben und Wachstum und kann für die Evaluierung von Therapeutika von Lebermetastasen eingesetzt werden.

Dieser Artikel beschreibt ein Verfahren zur Induktion der orthotopen Biolumineszenz Lebertumore bei Mäusen, und die anschließende Analyse des Tumorwachstums beschränkt sich auf die Leber mit Live-Ganzkörper-Lumineszenz-Imaging.

Murine Bioluminescent Leber Tumor-Modell

Dieses Video beschreibt die Etablierung von Lebermetastasen in einem Mausmodell, das anschließend mittels biolumineszentem Imaging analysiert werden kann. Tumorzellen werden ...

Hallo zusammen. Mein Name ist Simon Regenron. Ich bin einer der chirurgischen Assistenten im Karzinomforschungszentrum hier in Irland.Heute werde ich Ihnen eine chirurgische Technik zur Induktion von Lebermetastasen zeigen. In einem Tumormodell ist die Leber ein häufiger Ort für metastatische Streuung und eine wesentliche Ursache krebsbedingter Sterblichkeit. Nur ein kleiner Prozentsatz der Patienten mit fortgeschrittener Lebererkrankung eignet sich für eine chirurgische Resektion.Daher werden neuartige Therapeutika zur Behandlung dieses Zustands benötigt. Viele Tiermodelle für hepatische Metastasen führen nicht zu einer Erkrankung, die der klinischen Situation ähnelt. Das Modell, das ich Ihnen heute zeige, ist ein klinisch relevantes Modell, das relativ einfach zu erlernen ist und über sehr gute Erfolgsraten verfügt.Dieses Modell beinhaltet die Teilung der Milz in zwei Hälften. Eine Milzhälfte wird für die Inokulation von Tumorzellen verwendet. Diese Tumorzellen wandern über die Pfortader in die Leber.Die andere Hemi-Milz bleibt intakt und behält ihre immunologischen Eigenschaften. Die von mir verwendete Zelllinie exprimiert stabil Luciferase, was die biolumineszente Analyse des T

murine-bioluminescent-hepatic-tumour-model

Research

Forschung

JoVE Journal

Medicine

Medizin

Luciferase-modifizierten menschlichen Gehirns Tumorxenotransplantaten können intrakraniell in athymischen Mäusen festgestellt werden, mit anschließender Überwachung des Tumorwachstums und Ansprechen auf die Therapie mit Biolumineszenz-Bildgebung. In Kombination mit dem Überleben Analyse wird Biolumineszenz Überwachung ein wesentliches Recherche-Tool für die präklinische Prüfung von Therapien, zur Behandlung von Gehirntumoren betrachtet.

Gründung Intrakranielle Brain Tumor Xenografts mit anschließender Analyse des Tumorwachstums und Ansprechen auf die Therapie mit Biolumineszenz-Bildgebung

Biolumineszenz-Bildgebung des Hypoxie-induzierbaren Faktors-1α Aktivität wird angewandt, um intrakranielle Tumorhypoxie Entwicklung in einer Brustkrebs Hirnmetastasen Mausmodell zu überwachen.

In-vivo-Biolumineszenz-Bildgebung von Tumorhypoxie Dynamics of Breast Cancer Hirnmetastasen in einem Mausmodell

Dieses Video zeigt ein orthotopes Modell von Bauchspeicheldrüsenkrebs, das Matrigel für die lokalisierte Zellabgabe und in vivo Biolumineszenz-Bildgebung zur nicht-invasiven Überwachung der Tumorprogression verwendet. Das orthotope Modell eignet sich sowohl für syngene als auch für Xenotransplantatmodelle und könnte in präklinischen Studien verwendet werden, um den Einfluss neuartiger Krebstherapeutika auf das Wachstum des primären Pankreastumors und die Metastasierung zu untersuchen.

Biolumineszierendes orthotopes Pankreaskarzinom-Mausmodell: Eine nicht-invasive Technik zur Überwachung des Fortschreitens von Krebs bei Mäusen

Quelle:Marina Arantes Radicchi1, Victor Carlos Mello1,Victória Paz Machado1, Márcia Cristina Oliveira da Rocha1, Jaqueline Vaz de Oliveira1, Luana Cristina Camargo1,2, Luís Alexandre Muehlmann1, Ricardo Bentes Azevedo1, Sônia Nair Bao1, João Paulo Figueiró Longo11Institut für Biowissenschaften, Universität Brasília, 2Abteilung für grundlegende psychologische Prozesse, Institut für Psychologie, Universität BrasíliaDieses Video zeigt das Verfahren zur Verfolgung der Tumorprogression in vivo,...

Biolumineszierende Bildgebung der Progression von Brusttumoren in einem weiblichen Mausmodell

Quelle: Clark, A.J., et al. Biolumineszenz-Bildgebung eines immunkompetenten Tiermodells für Glioblastome. J. Vis. Exp. (2016)Dieses Video zeigt die Biolumineszenz-Bildgebung zur Verfolgung des Fortschreitens des Glioblastoms in einem immunkompetenten Mausmodell, wobei Luciferase-exprimierende Tumorzellen und Luciferin zur nicht-invasiven Quantifizierung des Tumorwachstums verwendet werden.

Biolumineszenz-Bildgebung eines immunkompetenten Mausmodells für Glioblastom

Verbessertes Verständnis von Bauchspeicheldrüsenkrebs Biologie ist dringend erforderlich, um die Entwicklung von besseren therapeutischen Optionen zur Behandlung von Bauchspeicheldrüsenkrebs zu ermöglichen. Um diesen Bedarf zu demonstrieren wir eine orthotopic Modell von Bauchspeicheldrüsenkrebs, die nicht-invasive Überwachung der Tumorprogression ermöglicht...

Bioluminescent orthotopen Modell von Bauchspeicheldrüsenkrebs Progression

GL261 Gliomzellen stellen ein nützliches immunkompetentes Tiermodell des Glioblastoms dar. Die Ziele dieses Protokolls sind die Demonstration geeigneter Techniken zur Überwachung des intrakraniellen Tumorwachstums unter Verwendung von in vivo Biolumineszenz-Bildgebung und die Überprüfung des Nutzens von Luciferase-modifizierten GL261-Zellen für die Untersuchung der Tumorimmunologie und immuntherapeutischer Ansätze zur Behandlung von Glioblastomen.

Biolumineszenz-Bildgebung von einem immunkompetenten Tiermodell für Glioblastoma

Biolumineszenz-Bildgebung ist ein bekanntes Werkzeug für Tumoren und Metastasen zu lokalisieren, aber Quantifizierung dieser Bilder erfordert oft komplexe Berechnungen und bestimmte Instrumente. Wir beschreiben die einfach zu bedienende luminoscore-Methode, basierend auf genauen Aufnahmebedingungen, keine Berechnungen erfordern, und ermöglicht die Tumorlast und Ansprechen auf die Behandlung in Mausmodellen beobachtet werden.

Biolumineszenz-basierte Tumor Quantifizierung Verfahren zur Überwachung Tumorprogression und Therapieeffekte bei den Maus-Lymphom-Modelle

Die Fähigkeit metastasierender Klone, entfernte Stellen zu besiedeln, hängt von ihrer Proliferationskapazität und/oder ihrer Fähigkeit ab, in der Mikroumgebung des Wirts ohne signifikante Proliferation zu überleben. In dieser Arbeit stellen wir ein Tiermodell vor, das eine quantitative Visualisierung beider Arten der Leberbesiedlung durch metastasierende Klone ermöglicht.

Erweiterte Tiermodell für Colorectal Metastase in der Leber: Imaging-Techniken und Eigenschaften des metastasierten Clones

Wir führen einen murinen orthotopen Brust Krebs Modell und radikale Mastektomie Modell mit Biolumineszenz-Technologie, die Tumorlast um menschliche Muttermilch Tumorprogression imitieren zu quantifizieren.

Generieren eines murinen orthotopen metastasierendem Brustkrebs Krebs Modells und Durchführung von murinen radikale Mastektomie

Eine große Herausforderung bei der Entwicklung neuer Therapien für Lungenkrebs besteht darin, die Mikroumgebung des Tumors zu modellieren, wenn die regionale Erkrankung zu einer metastasierenden Erkrankung fortschreitet. Hier beschreiben wir eine einfache Methode zur Etablierung eines orthotopen syngenen Modells von Lungenkrebs, das eine In-vivo-Verfolgung der Krankheit im Zeitverlauf ermöglicht.

Eine minimalinvasive Methode zur Generierung eines syngenen orthotopen Mausmodells für Lungenkrebs

Erfahren Sie eine chirurgische Methode zur Induktion orthotoper biolumineszenter Lebertumoren in Mäusen. Dieses Modell ermöglicht die nicht-invasive Überwachung von Tumorwachstum mittels Ganzkörper-Lumineszenzbildgebung für Onkologieforschung.

Murine Bioluminescent Leber Tumor-Modell

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