Fly Climbing Assay: Eine Methode zum Testen der allgemeinen Fortbewegung bei Drosophila melanogaster

-Besorgen Sie sich zunächst eine festgelegte Anzahl adulter Drosophila. Die Testkammer für den Kletterassay besteht aus zwei miteinander verklebten Fläschchen. Eine dieser Durchstechflaschen sollte mit einer Linie gekennzeichnet sein.

Ohne Kohlendioxid-Anästhesie, die das Steigverhalten beeinträchtigen kann, bringen Sie eine festgelegte Anzahl von Fliegen in die Prüfkammer. Lassen Sie die Fliegen sich für eine bestimmte Zeit erholen. Tippen Sie mit der markierten Seite der Kammer nach unten fest auf die Kammer auf ein Mauspad, das auf einer festen Oberfläche platziert ist. Dadurch werden die Fliegen auf den Boden der Kammer gedrückt. Der Kletterassay macht sich die natürliche Tendenz von Drosophila zunutze, gegen die Schwerkraft nach oben zu klettern, ein Verhalten, das als negative Geotaxis bezeichnet wird.

Während des Versuchs sollten die Fliegen nicht direktem Sonnenlicht ausgesetzt werden, da die Fliegen Phototaxi-Verhalten oder Bewegungen als Reaktion auf Lichtreize zeigen könnten. Notieren Sie die Anzahl der Fliegen, die die Linie erreichen oder passieren. Ermitteln Sie dann die prozentuale Erfolgsquote, indem Sie diese Zahl durch die Gesamtzahl der getesteten Fliegen dividieren. Lassen Sie die Fliegen sich erholen, bevor Sie den Versuch wiederholen. In diesem Beispiel sehen wir einen Fliegenkletter-Assay, der zur Beurteilung der motorischen Funktion von Drosophila nach chemischer Mutagenese verwendet wird.

-Sammeln Sie zunächst homozygote Fliegen aus Linien, die zur ENU-mutagenisierten Sammlung von Drosophila-Mutanten gehören, die auf dem zweiten Chromosom kartiert sind. Drehen Sie die Fliegen im Alter von 10 bis 12 Tagen ohne Betäubung in eine Testkammer, eine Linie nach der anderen, und lassen Sie sie fünf Minuten lang erholen.

Während die Fünf-Zentimeter-Linie mit der Seite nach unten markiert ist, klopfen Sie dreimal gewaltsam auf ein Mauspad auf einem Mauspad, das auf einer festen Oberfläche platziert ist, so dass alle Fliegen den Test unten beginnen. Beobachten Sie die Fortbewegung der Fliege über einen Zeitraum von 10 Sekunden. Notieren Sie die Anzahl der Fliegen, die innerhalb dieser Zeit die Fünf-Zentimeter-Linie erreichen oder passieren, sowie die Gesamtzahl der getesteten Fliegen. Warten Sie eine Minute, bevor Sie einen zweiten Versuch starten. Wiederholen Sie mindestens drei Testwiederholungen pro Zeile.