Drosophila Dissektion der männlichen akzessorischen Drüsen: Eine Methode zur Isolierung von Sekundärzellen

- Unter einem Präpariermikroskop und in mit Serum angereicherten Medien den Fortpflanzungstrakt von jeder Fliege mit einer Pinzette entfernen. Entfernen Sie zunächst Teile des Verdauungstrakts, die möglicherweise den Fortpflanzungstrakt begleitet haben. Um die akzessorischen Drüsen und den Ejakularotoriumsgang zu isolieren, entfernen Sie die Hoden, den Ejakulationskolben und die Terminalia. Waschen Sie das Taschentuch ein bis zwei Minuten lang in PBS, um das Serum zu entfernen. Übertragen Sie es dann in die Dissoziationslösung.

Um die Zellen in den Drüsen der Dissoziationslösung auszusetzen, halten Sie die Mitte jeder Drüse mit einer Pinzette fest und schneiden Sie mit einer scharfen Pinzette durch die Drüse. Entfernen Sie den proximalen Teil der Drüse und den Ejakulationsgang, um das distale Ende der Drüsen zu belassen, das die seltene sekundäre Zellpopulation enthält, die für die Sekretion von Proteinen verantwortlich ist, die an der Paarung beteiligt sind. Übertragen Sie abschließend die Zubehördrüsenspitzen in ein Mikrozentrifugenröhrchen, um den Aufschluss vorzubereiten. Im folgenden Protokoll werden wir die akzessorischen Drüsen präparieren, um Sekundärzellen für die Transkri