Malpighische Tubuli-Dissektion von einer adulten Fliege: Isolierung eines osmoregulatorischen und ausscheidenden Organs

- Beginnen Sie mit einer betäubten erwachsenen Fliege in einer Präparierschale. Halten Sie die Fliege mit einer Pinzette am Brustkorb fest und öffnen Sie das hintere Ende des Bauches mit einer zweiten Pinzette. Da erwachsene Fliegen zwei Paare von malpighischen Tubuli oder MTs haben, die über gemeinsame Harnleiter in den Darm konvergieren, ziehen Sie den Hinterdarm aus der Fliege, um die MTs freizusetzen. Das hintere Paar der MTs wird zuerst befreit, wenn es sich hinter dem Darm umschließt. Ziehen Sie weiter am Darm, um die vorderen MTs zu befreien, und kneifen Sie sie dann am Harnleiter ab, um sie von der Fliege zu trennen.

Um die Tubuli zu montieren, schieben Sie einen Glasstab unter den Harnleiter und übertragen Sie die MTs auf einen Poly-L-Lysin-beschichteten Objektträger. Befestigen Sie die präparierten Organe, indem Sie den Harnleiter nach unten drücken, und streichen Sie dann vorsichtig mit dem Stab über die MTs. Das Poly-L-Lysin auf dem Objektträger fördert die Anheftung, indem es die Anzahl der positiv geladenen Stellen erhöht, die den negativ geladenen Zellen der Tubuli zur Bindung zur Verfügung stehen. Im folgenden Protokoll werden wir MTs von einer adulten weiblichen Fl