0 Aufrufe • 4:49 Min. • April 30th, 2023
- Beginnen Sie damit, eine saubere, betäubte Larve mit dem Kopf nach oben unter ein Glasdeckglas zu setzen. Legen Sie als Nächstes den interessierenden Bereich frei, indem Sie vorsichtig auf den Deckschirm drücken, um die Larve zu rollen und ihre Position anzupassen. Verwenden Sie die konfokale Bildgebung, um die Nervenzellen der Larve zu lokalisieren. Identifizieren Sie ein bestimmtes Axon auf einer der Zielnervenzellen als Verletzungsstelle.
Setzen Sie dann das Zielaxon einem Zwei-Photonen-Laser mit einer höheren Leistung aus, als sie für die Bildgebung verwendet wird, um Schäden zu verursachen. Ein Zwei-Photonen-Laser wird aufgrund seiner Fähigkeit verwendet, Schäden im lebenden Gewebe mit minimaler Schädigung des umgebenden Gewebes zu durchdringen und präzise zu lokalisieren.
Stoppen Sie die Laserbelichtung sofort, wenn das Zielneuron beschädigt wird, was zu einer Axotomie oder Durchtrennung des Axons führt. Stellen Sie sich schließlich das verletzte Neuron vor, um seine Degeneration und anschließende Regeneration zu den gewünschten Zeitpunkten zu sehen.
Im Beispielprotokoll werden wir eine Larve für die Mikroskopie montieren, Schäden an sensorischen Neuronen der Larven induzie
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