Warum ist die Membranfokussierung vor der Mikroinjektion entscheidend?

Die Fokussierung auf die Membran, die Follikel- und Pflegezellen trennt, gewährleistet eine genaue Nadelplatzierung und verhindert Schäden an umliegenden Strukturen während der Injektion.

Wie wirkt sich die Auswahl des Entwicklungsstadiums auf den Erfolg der Mikroinjektion aus?

Ei-Kammern im mittleren bis späten Entwicklungsstadium weisen große, sichtbare Pflegezellen und Eizell-Lezithin auf, was die Sichtbarkeit verbessert und eine genauere Injektion für eine konsistente Applikation von Sonden ermöglicht.

Welche Rolle spielt der Kompensationsdruck beim Mikroinjektionsverfahren?

Der Kompensationsdruck gewährleistet einen kontinuierlichen Lösungsfluss aus der Nadel, verhindert Verstopfungen und stellt reproduzierbare Injektionsvolumina während der Zufuhr molekularer Sonden sicher.

Warum wird die Nadelreinigung vor der Injektion durchgeführt?

Durch die Durchführung einer Reinigungsfunktion wird Luft aus der Nadelspitze entfernt, die den Durchfluss blockieren oder eine inkonsistente Abgabe der Molekularfunksondenlösung verursachen könnte.

Wie unterstützt das Wechseln des Objektivs nach der Injektion die Bildgebungsabläufe?

Das Wechseln zur gewünschten Vergrößerung nach der Injektion ermöglicht die optimierte Bildaufnahme transfizierter Pflegezellen, ohne die Probe zu stören.

Mikroinjektion von Drosophila-Ammenzellen: Eine Methode der intrazellulären Verabreichung

JoVE Encyclopedia of Experiments

Biologie

0 Ansichten • 3:32 Min. • April 30th, 2023

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

- Legen Sie ein Deckglas mit präparierten Eikammern auf den Mikroskoptisch. Suchen Sie eine Eikammer mit dem entsprechenden Entwicklungsstadium und der entsprechenden Ausrichtung für die Mikroinjektion. Die Eikammern im mittleren bis späten Stadium haben ein großes sichtbares Eigelb, und die Eizellen in der richtigen Ausrichtung sind mit ihrer anterior-posterioren Achse senkrecht zur Injektionsrichtung.

Drosophila-Nervenzellen sind eine Gruppe von 15 Zellen in der Eikammer, die für die Ablagerung von Nährstoffen und Biomolekülen aus der Mutter in der sich entwickelnden Eizelle verantwortlich sind. Richten Sie das Mikroinjektorsystem auf den entsprechenden Einspritz- und Kompensationsdruck ein, um ein gleichmäßiges Einspritzvolumen und einen gleichmäßigen Durchfluss nach außen zu gewährleisten. Bringen Sie eine zuvor geladene Kapillarnadel vorsichtig in das Sichtfeld, so dass sich die Zellen und die Nadel in derselben Brennebene befinden.

Stellen Sie sicher, dass keine Luft in der Spitze der Kapillare eingeschlossen ist und dass die Lösung kontinuierlich fließt. Passen Sie dann die Z-Position des Objektivs so an, dass der Fokus auf die Membran gelegt wird, die die Follikelzellen von den Ammenzellen trennt, führen Sie die Nadel in eine Ammenzelle ein und führen Sie die Injektion durch.

Das folgende Protokoll zeigt die Mikroinjektion von Drosophila-Ammenzellen mit fluoreszierenden Oligonukleotidsonden, sogenannten molekularen Beacons, gegen maternal beigesteuerte mRNA-Transkripte für die Lebendzellbildgebung.

- Wählen Sie für die Mikroinjektion mit molekularem Leuchtfeuer das 40-fach-Ölobjektiv und montieren Sie ein Deckglas mit der präparierten Eikammer auf den Mikroskoptisch. Lokalisieren Sie eine Eikammer in der mittleren bis späten Entwicklungsphase, die für die Mikroinjektion richtig ausgerichtet ist, und richten Sie dann einen Mikroinjektor mit dem entsprechenden Injektions- und Ausgleichsdruck ein.

Senken Sie mit dem Joystick des Mikromanipulators eine mit einem Mikroliter molekularer Beacon-Lösung beladene Nadel vorsichtig in den Öltropfen. Bringen Sie die Spitze in den Fokus in Richtung des Randes des Sichtfelds. Führen Sie eine Reinigungsfunktion aus, um die Luft von der Nadelspitze zu entfernen und sicherzustellen, dass die Nadel strömt, und bringen Sie die Nadel in die Ausgangsposition.

Fokussieren Sie sich auf die Eikammer, die mikroinjiziert werden soll, und bringen Sie die Nadel in der Nähe des Randes der Eikammer wieder in den Fokus. Führen Sie eine Feineinstellung der Z-Position des Objektivs durch, so dass die Membran, die die Follikelzellen von den Ammenzellen trennt, scharf ist. Führen Sie die Nadel in eine Ammenzelle ein, um die molekularen Beacons über einen Zeitraum von zwei bis fünf Sekunden zu injizieren.

Ähnliche Videos

0 Aufrufe

Zuletzt aktualisiert: 15 August 2026

Mikroinjektion von Drosophila-Ammenzellen: Eine Methode der intrazellulären Verabreichung

Übersicht

Wesentliche Studienkomponenten

Bereich der Wissenschaft

Hintergrund

Zweck der Studie

Verwendete Methoden

Hauptergebnisse

Schlussfolgerungen

Häufig gestellte Fragen

Ausführliche Bedeutung für die Industrie

Strategische Anwendungen in der Biopharma-Forschung und -Entwicklung

Frühe Entdeckung und Zielvalidierung

Screening und Assay-Entwicklung

Translationale und präklinische Forschung

Pipeline- und Workflow-Integration

Operative und unternehmerische Auswirkungen

Durchführungsaspekte

Biopharma-Häufige Fragen

Imaging Zellgröße Veränderung der Lebens- Drosophila Embryos

2D und 3D Chromosom Malerei in Malaria-Mücken

Studieren Mitochondrial Struktur und Funktion in Drosophila Ovarien

Mikroinjektion von Xenopus laevis Oozyten

Mikroinjektion Techniken zur Untersuchung Mitose in der Drosophila melanogaster Syncytial Embryo

Injektion von adulten Drosophila-Fliegen: Eine Methode der Verabreichung von Verbindungen oder Etiketten

Mikroinjektion von lebenden Drosophila-Embryonen: Frühzeitige Abgabe von Reagenzien an den sich entwickelnden Embryo

Mikroinjektion Wound Assay und In-vivo- Lokalisierung von Epidermal Wundreaktion Reporter in Drosophila Embryos.

Lieferung von Nukleinsäuren durch Embryomikroinjektion in der weltweiten Agrar Pest Insekt, Mittelmeerfruchtfliege

Visualisierung und Verfolgung endogenes mRNAs in Live Drosophila melanogaster Eierkammern