0 Aufrufe • 3:48 Min. • April 30th, 2023
- Wenn sich injizierte Embryonen zu G0-Erwachsenen entwickeln, kreuzen Sie alle einzelnen Fliegen mit geeigneten Balancer-Stämmen, um potenzielle F1-CRISPR-editierte Linien zu erweitern und die Vererbung der genomischen Modifikation verfolgen zu können. Kreuzen Sie dann zufällig ausgewählte F1-Einzelmännchen mit geeigneten Balancer-Hündinnen, um Nachkommen wiederfinden zu können, wenn ein F1-Männchen positiv für die Mutation ist. Sobald die Kreuzung genommen wurde, übertragen Sie den F1-Stecker zum Screening in ein Röhrchen.
Um genomische DNA zu extrahieren, zerdrücken Sie die Fliege mit einer Pipettenspitze, die Extraktionspuffer enthält. Sobald das Gewebe abgebaut ist, stoßen Sie die Flüssigkeit aus. Der Extraktionspuffer enthält Proteinase K, ein Enzym, das Proteine in der Probe verdaut und durch hohe Hitze inaktiviert wird.
Jetzt, da die DNA zugänglich ist, fahren Sie mit dem PCR-Screening fort. Verwenden Sie z. B. Primer, die so konzipiert sind, dass sie einen Bereich amplifizieren, der die neue Sequenz enthält. Erst in Gegenwart der Modifikation bindet der zweite Primer und ein PCR-Produkt wird amplifiziert. In diesem Beispiel sehen wir, wie Fliegen gezüchtet und mittels PCR
Sehen Sie sich das vollständige Transkript an und erhalten Sie Zugang zu Tausenden wissenschaftlicher Videos