0 Aufrufe • 3:16 Min. • April 30th, 2023
- Um eine Larve für die Filetsektion auszurichten, legen Sie sie in eine silikonbeschichtete Schale mit kalter Kochsalzlösung und identifizieren Sie ihre Rücken- und Bauchseite. Trachealtuben, die entlang ihrer Länge verlaufen, markieren die dorsale Seite, während abdominale Dentikelgürtel die ventrale Seite kennzeichnen.
Dehnen Sie dann die Larve mit der Bauchseite nach oben vorsichtig und stecken Sie jedes Ende an den Boden der Schale. In dieser Position bleiben die dorsalen Cluster der sensorischen multidendritischen Neuronen und die zugehörigen Epidermiszellen während der Dissektion intakt.
Schneide mit einer Präparierschere entlang der ventralen Mittellinie der Larve. Stecken Sie die Nagelhaut an die Platte, um das Präparat abzuflachen und innere Strukturen zu entfernen, um das darunter liegende Muskelgewebe freizulegen. Entfernen Sie dann vorsichtig den entsprechenden Muskel, um die Epidermis freizulegen und Zugang zu zuvor verdeckten Neuronen zu erhalten, während ihre dendritische Morphologie erhalten bleibt.
Im Beispielprotokoll sehen wir eine detaillierte Demonstration der Larvenfiletvorbereitung und Muskelentfernung, um sensorische DNA-Neuronen und Epidermiszellen zu betrachten.
- Geben Sie zunächst so viel kalte Kochsalzlösung in eine Silikonelastomerschale, dass die Unterseite bedeckt ist. Geben Sie die Probandlarve in die Schale und legen Sie sie unter das Stereomikroskop, um auf die richtige Platzierung des Lichts zu achten. Positionieren Sie die Larve mit der Bauchseite nach oben, die an den Bauchzahngurten zu erkennen ist.
Strecken Sie die Larve in anterior-hinterer Richtung und stecken Sie den Kopf und den Schwanz mit Insektenstecknadeln an den Boden der Schale. Schneiden Sie mit einer feinen Präparierschere entlang der ventralen Mittellinie der Larve von einem Ende zum anderen. Spreizen Sie die Larve und stecken Sie das Nagelhautgewebe an den vier Ecken fest, sodass es flach aufliegt.
Entfernen Sie mit einer Pinzette die inneren Organe, einschließlich des ZNS, des Darms und der Luftröhre. Stellen Sie die Insektenstifte so ein, dass die Verrundung gespannt, aber nicht maximal gedehnt wird.
Lokalisieren Sie die dorsale Mittellinie der Larve, wo Muskelgewebe fehlt, und positionieren Sie dann eine Zange an der Innenseite dieser Grenze. Schieben Sie den Zacken zwischen Muskel und Epidermis und achten Sie darauf, den Kontakt mit der Epidermis zu minimieren.
- Um die Schädigung der Epidermis zu minimieren, präparieren Sie mit den flachsten Zinken. Und versuchen Sie es mit dem Präparieren in kalziumhaltiger Kochsalzlösung. Das könnte helfen, Platz zwischen dem Muskel und der Epidermis zu schaffen.
- Ziehen Sie anschließend die Pinzette nach oben, um die Befestigung des Muskels an der Körperwand an einem Ankerpunkt zu lösen. Wiederholen Sie diesen Vorgang für die verbleibenden Muskelsegmente, die Sie interessieren.
Stellen Sie die Insektenställe so ein, dass das Larvenfilet maximal in alle Richtungen gedehnt wird.