Bearbeitung von Insektenbeinen für die Fluoreszenzmikroskopie: Eine Methode zur Konservierung neuromuskulärer Strukturen für die Bildgebung

- Tauchen Sie anästhesierte Insekten zunächst in 70%ige Ethanollösung, um die Hydrophobie der Nagelhaut zu verringern. Waschen und permeabilisieren Sie das Gewebe dann mindestens 30 Minuten lang mit phosphatgepufferter Kochsalzlösung, die ein Reinigungsmittel enthält, um das Eindringen des Gewebes während der Fixierung zu ermöglichen.

Als nächstes entfernen Sie den Kopf und den Bauch vom Brustkorb. Üben Sie mit einer Pinzette leichten Druck auf den Coxa-Thorax-Übergang aus und lösen Sie das Bein. Legen Sie die Beine über Nacht vorsichtig in eiskalte 4%ige Paraformaldehydlösung, damit diese in das Gewebe eindringen kann. Paraformaldehyd repariert Gewebe, indem es Proteine vernetzt.

Entfernen Sie dann die Fixierlösung und waschen Sie das Tuch mehrmals mit phosphatgepuffertem Kochsalzlösungsmittel, das Reinigungsmittel enthält. Legen Sie die Beine vor dem Aufsteigen mindestens einen Tag lang in reinen oder leicht verdünnten Einbettpuffer, damit der Puffer genügend Zeit hat, in das Gewebe einzudringen.

Montieren Sie zum Schluss die Beine in einem Tropfen Einbettmedium. Verwenden Sie einen Abstandshalter zwischen dem Objektträger und dem Deckglas, um eine Beschädigung der Probe zu verhi