Präparation von fixierten Drosophila-Eizellen für die Immunfärbung: eine Hochdurchsatzmethode zur Fixierung und Entfernung der äußeren Membran

- Beginnen Sie damit, betäubte Drosophila zusammen mit Puffer in einem Mixer zu pulsieren, um die Fliegen in kleine Stücke zu zerkleinern. Filtern Sie die Mischung durch ein Netz, um die großen Körperteile zu entfernen. Lassen Sie dann die Eier sinken, während die größeren Fragmente an der Oberfläche verbleiben und entfernt werden können.

Wiederholen Sie diesen Vorgang mit einem kleineren Netz, um zusätzlichen Schmutz zu entfernen. Sammeln Sie die Eier in einem Fläschchen, und wenn die Eier mit einem Medikament behandelt werden sollen, tun Sie dies an dieser Stelle. Entfernen Sie anschließend die Flüssigkeit und ersetzen Sie sie durch ein Fixiermittel. Füge Heptan hinzu, damit das Fixiermittel die Membran um das Ei herum durchdringen kann.

Waschen Sie dann das Fixiermittel mit PBS ab. Um die Eizellen zu färben, entfernen Sie die schützenden äußeren Membranen, um das Eindringen von Antikörpern zu ermöglichen. Pipettieren Sie die Eizellen auf den mattierten Teil eines Objektträgers. Legen Sie ein Deckglas über die Eier und rollen Sie das Deckglas vorsichtig in einer Hin- und Herbewegung, um die Chorion- und Vitellinmembran mechanisch vom Ei zu trennen. Die Eizellen sind nun bereit, g