0 Aufrufe • 2:56 Min. • April 30th, 2023
- Übertragen Sie gewaschene C. elegans in Flüssigkeit auf einen Objektträger, der zuvor mit Polylysin beschichtet war, einer Verbindung, die die Wurmhaut an der Glasoberfläche haften lässt. Drücken Sie einen anderen Objektträger vorsichtig gerade nach unten, wobei eine Kante über den unteren Objektträger hinausragt. Um die Würmer ohne Beschädigung ruhigzustellen, komprimieren Sie die Tiere und vermeiden Sie dabei seitliche Bewegungen. Legen Sie dann die Objektträger mit den eingeklemmten Würmern auf einen Metallblock in einen isolierten Laborbehälter, der mit einem Gefriermittel wie flüssigem Stickstoff oder Trockeneis gefüllt ist.
Metall ist ein effektiver Temperaturleiter, der sicherstellt, dass die Blockoberfläche kalt genug ist, um die Nagelhaut des Wurms schnell an beiden Glasoberflächen zu gefrieren. Sobald sie eingefroren sind, trenne die Objektträger schnell, um die Nagelhaut des Wurms auseinander zu ziehen oder aufzubrechen. Fahren Sie mit der Gewebefixierung und -färbung fort, da die Störung der Nagelhaut mit geringer Permeabilität chemischen Fixiermitteln und Färbeantikörpern den Zugang zum inneren Wurmgewebe ermöglicht. Im folgenden Protokoll sehen wir eine detaillierte
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