Nilrot-Färbung von C. elegans: Eine Methode zur Visualisierung von Lipidtröpfchen bei fixierten Tieren

- Bei der Visualisierung von Lipidtröpfchen, den intrazellulären Speicherorganellen für neutrale Lipide, beginnen Sie mit der Zugabe einer Waschmittellösung, z. B. einer mit Triton X-100, in die Probe. Dadurch werden die Zellen des Wurms permeabilisiert. Fixieren Sie anschließend die Probe in der entsprechenden Konzentration von Isopropanol, z. B. 40 %.

Geben Sie dann Nilrot in die Probe und schützen Sie sie vor Licht, da der Farbstoff lichtempfindlich ist. Die Fixierung ermöglicht es dem Farbstoff, auf Lipidtröpfchen im gesamten Tier zuzugreifen. Nilrot ist ein lipophiler Farbstoff, dessen Fluoreszenzemissionsspektrum von der Polarität der lokalen Lipidumgebung abhängt.

Bei Exposition gegenüber polaren Lipiden wie Phospholipiden liegt das Emissionsspektrum von Nilrot in den höheren, roten Wellenlängen. Wenn es neutralen Lipiden wie Triacylglycerinen und Sterolestern im neutralen Kern von Lipidtröpfchen ausgesetzt wird, verschiebt sich das Emissionsspektrum von Nilrot in die unteren Gelbgoldwellenlängen.

Verwenden Sie daher den grünen Kanal eines Fluoreszenzmikroskops, das die gelb-goldenen Wellenlängenemissionen sammelt, um die Nilrot-Färbung von Lipidtröpfchen im gesamten Tier si