0 Aufrufe • 3:08 Min. • April 30th, 2023
- Beginnen Sie damit, eine dritte Larve, die größte der Larvenformen, aus dem Nährmedium auszuwählen und sie mit Wasser zu waschen, um jegliche Nahrung zu entfernen. Da sich die Larvenaugen oder Bolwig-Organe an der oberen Vorderseite der Larve befinden, platzieren Sie die Larve in der Mitte einer Agarplatte, wobei die Lichtquelle über dem Tier liegt. Schalten Sie das Raumlicht aus und lassen Sie die Larve sich an die Dunkelheit gewöhnen.
Da die Larve in einem Lichtfleck durch sichtbares Licht kaum zu erkennen ist, schalten Sie Infrarot-LED-Leuchten ein, um das Tier für die Kamera zu beleuchten. Warte, bis das Tier anfängt, geradeaus zu kriechen, um seinen Weg zu kontrollieren. Und dann drehen Sie die Platte so, dass die Larve direkt auf den Lichtfleck zukriecht. Nehmen Sie auf, wie das Tier ins Licht kriecht und dann vom Lichtfleck weg ist. Diese Taktik der Lichtvermeidung hilft den Larven, Fressfeinden auszuweichen, indem sie sich in die Nahrung eingraben.
Im folgenden Beispiel werden wir den Lichtflecken-Assay durchführen, um die Fähigkeit verschiedener genetischer Stämme von Drosophila-Larven zu testen, dem Licht zu entkommen.
- Bevor Sie die Larve in die Bildgebung einführen, nehmen Sie ein kurzes Video der Lichtposition auf und nennen Sie das ungefilterte Kontrollhintergrundvideo "lightarea1". Setzen Sie den Filter wieder auf das Kameraobjektiv und schalten Sie ein Licht ein, das weit vom Versuchsgerät entfernt ist, so niedrig wie möglich, während die Larven immer noch deutlich beobachtet werden können. Entfernen Sie mit einem Löffel einige Larven aus dem Nährmedium und wählen Sie vorsichtig eine dritte Larve im Stadium aus.
Waschen Sie die Larve in destilliertem Wasser und legen Sie die Larve in die Mitte der Agarplatte. Entfernen Sie vorsichtig überschüssiges Wasser von der Larve und schalten Sie das Raumlicht aus. Lassen Sie die Larve zwei Minuten lang in der dunklen Umgebung akklimatisieren, bevor Sie das Infrarot-LED-Licht einschalten. Das folgende Experiment zum Lichtvermeidungsverhalten muss im Dunkeln durchgeführt werden. Um die Demonstration zu erleichtern, haben wir bei hellem Licht gefilmt.
Bürsten Sie die Larve vorsichtig bis zur Mitte des Tellers. Wenn die Larve anfängt, gerade zu kriechen, drehen Sie die Platte, so dass die Larve auf den Lichtfleck zusteuert. Klicken Sie auf "Aufnehmen", "Setup" und "Videoaufnahme", um den Speicherpfad auszuwählen. Und klicken Sie auf Aufnahme starten, um aufzunehmen. Lassen Sie die Lava auf den Lichtfleck zukriechen, ihn betreten und verlassen, bis er fast außerhalb des Sichtfelds ist, und klicken Sie dann auf "Aufzeichnung stoppen".
Bewegen Sie den Filter von der Kamera weg und nehmen Sie ein kurzes Video der Position des Lichtflecks auf. Benennen Sie den Beitrag dann als ungefiltertes Video, "lightarea2", und vergleichen Sie dieses Video mit dem "lightarea1"-Video, um sicherzustellen, dass die Position des Lichtflecks nicht verändert wird.