Why is isolation of the ring gland important for target validation?

Isolating the ring gland enables direct study of endocrine organs that produce juvenile hormone and ecdysone, which are critical for validating targets in developmental and metabolic signaling pathways. This supports mechanistic de-risking by confirming target engagement in hormone biosynthesis pathways.

How does dissection of the larval ring gland fit into the discovery pipeline?

The dissection provides a reproducible method to isolate endocrine tissues early in the discovery workflow, enabling functional validation of hormone-related targets before assay development. It supports target confirmation by ensuring access to biologically relevant tissues for downstream analysis.

What quantitative measurements does immunostaining of the ring gland enable?

Immunostaining allows visualization and quantification of hormone-producing cells and protein expression levels within the corpus allatum, prothoracic gland, and corpus cardiacum. These measurements support comparative analysis across genetic or treatment conditions to assess pathway modulation.

Why are replication requirements important for cross-functional collaboration?

Standardized dissection and fixation timing (e.g., preparing larvae within 10 minutes) ensure consistent tissue quality across experiments, enabling reliable data sharing between discovery, screening, and preclinical teams. This reproducibility supports collaborative target validation efforts.

What statistical analysis capabilities are needed before implementing this protocol?

Basic quantitative image analysis capabilities are required to measure immunostaining intensity, localization, and frequency of hormone-positive cells in the ring gland structures. These analytics support statistical comparison of experimental conditions to evaluate target modulation.

Larvenringdrüsendissektion: Isolierung von entwicklungsbedingten endokrinen Organen aus Drosophila

JoVE Encyclopedia of Experiments

Biologie

0 Ansichten • 4:07 Min. • April 30th, 2023

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- Um die Ringdrüse zu präparieren, benötigen Sie ein Präpariermikroskop, zwei Pinzetten, eine feine Nadel, die als Präpariermesser dient, und eine gepufferte Lösung. Finde die Ringdrüse, indem du den Kopf der Larve identifizierst, der die Maulhaken enthält. Reisen Sie entlang der Larven, um das Gehirn zu finden, das sich zwischen dem Thorax und dem Bauchbereich befindet. Die Ringdrüse ist kleiner als das Gehirn und befindet sich oben.

Die Larvenringdrüse ist eine komplexe endokrine Struktur, die drei verschiedene endokrine Organe enthält. Das Corpus allatum sitzt in der Mitte der Ringdrüse und produziert das juvenile Hormon, das die Entwicklung und das Altern reguliert. Die Prothorakaldrüse umgibt das Corpus allatum und macht den Großteil der Struktur aus. Ecdyson, ein Hormon, das an der Mälzung von Insekten beteiligt ist, wird von dieser Drüse hergestellt. Unterhalb der Prothorakaldrüse befindet sich das Corpus cardiacum, das das adipokinetische Hormon, einen Nährstoffregulator, produziert.

In diesem Beispiel werden wir Larvengehirne und Ringdrüsen für die Immunhistochemie präparieren.

- Nach der Vorbereitung der Larven beginnen Sie die Verlaufsdissektion in einer drei Zentimeter großen, mit PBS gefüllten Schale unter einem Präpariermikroskop. Fassen Sie zuerst den Mundhaken mit einer Pinzette. Trennen Sie dann den Körper mit einer Mikroschere auf etwa einem Drittel der Länge von der vorderen Spitze ab. Halten Sie dann die vordere Länge mit einer Pinzette fest und schieben Sie mit einem zweiten Paar die Spitze des Kopfes sanft in den Körper, um den Larvenkörper schließlich auf links zu drehen.

Bereiten Sie auf diese Weise innerhalb von 10 Minuten bis zu 20 Larven vor und geben Sie sie dann in Fixierlösung. Waschen Sie die Präparate nach 30 Minuten und fahren Sie mit der Immunfärbung fort. Nach der Immunfärbung der Larven werden die Proben mit einer Einwegpipette in eine mit 0,3 % PBT gefüllte Schale überführt.

Fassen Sie unter einem Präpariermikroskop die Nagelhaut oder den Mundhaken mit einer Pinzette. Verwenden Sie dann eine 27-Gauge-Nadel, die wie ein Messer an einer Ein-Milliliter-Spritze befestigt ist, um den Gehirn-Ring-Drüsen-Augenscheiben-Komplex von der Körperkutikula zu entfernen, indem Sie die vordere Spitze der Speiseröhre und die Augenscheiben wegschneiden.

Trennen Sie anschließend mit einer Pinzette vorsichtig die Speiseröhre und den Darm vom Gehirn-Ring-Drüsen-Auge-Bandscheiben-Komplex. Ziehen Sie den Darm zur hinteren Seite heraus, da die Speiseröhre oberhalb des ventralen Nervenstrangs durch das Gehirn verläuft. Um schließlich den Hirnring-Drüsen-Komplex zu isolieren, schneiden Sie vorsichtig mit einem Nadelmesser die Verbindungen zwischen der Hirnbandscheibe, den Augenscheiben und den Beinscheiben durch.

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Zuletzt aktualisiert: 1 August 2026

Larvenringdrüsendissektion: Isolierung von entwicklungsbedingten endokrinen Organen aus Drosophila

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