Lokaler Wärmesonden-Assay: Eine Methode zur Beurteilung der Nozizeption hoher Temperaturen bei Drosophila-Larven

- Um Drosophila-Larven für einen Wärmesonden-Assay vorzubereiten, sammeln Sie Tiere des gewünschten Entwicklungsstadiums und übertragen Sie einzelne Larven auf eine Testplatte mit einem dünnen Wasserfilm. Das Wasser ermöglicht es den Larven, sich frei zu bewegen, ohne an der Plattenoberfläche zu kleben.

Drosophila-Larven erkennen schädliche thermische Reize über multidendritische sensorische Neuronen in ihrer Epidermis, die als Nozizeptoren bekannt sind. Diese zünden erst, wenn eine bestimmte sensorische Schwelle erreicht ist, wie z. B. potenziell schädliche hohe Temperaturen.

Stellen Sie den Wärmefühler auf eine Temperatur ein, die diese sensorische Schwelle überschreitet, und lassen Sie die Nozizeptoren zünden. Drücken Sie die Spitze der Sonde vorsichtig gegen die Larve, um Wärme anzuwenden. Die Larve reagiert auf die schädliche Temperatur mit thermo-nozizeptiven Verhaltensweisen und zieht sich von der Sonde zurück. Stoppen Sie, wenn die Larve eine 360-Grad-Rolle von der Wärmesonde entfernt zeigt oder wenn eine definierte Zeit abgelaufen ist. Notieren Sie die Reaktionszeit.

Im Beispielprotokoll sehen wir eine Demonstration eines lokalisierten Wärmesonden-Assays an Drosophila-Larv