Encyclopedia of Experiments: Biology
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- Um zu beginnen, entfernen Sie den Kopf von einer anästhesierten erwachsenen Fliege. Bedecken Sie die enthauptete Fliege mit einer Lösung, die Phosphat-Gepufferte Kochsalzlösung oder PBS enthält, und Bovine Serum Albumin, oder BSA, um Austrocknung zu vermeiden. Halten Sie die Fliege durch den Thorax mit Zange, und ziehen Sie dann den Bauch mit einem zweiten Paar Zange, um den Darm zu belichten. Da die Ernte oder der Lebensmittellagersack, wird an der Brust befestigt werden, ziehen Sie den Darm sanft weg von der Brust.
Nach der Losgelöstheit, ziehen Sie die Ernte weg aus dem Bauch, um den Darm zu entfalten. Ziehen Sie das hintere Ende der Fliege, um den Darm aus der Bauchhöhle zu befreien beginnen. Ziehen Sie den Darm weiter, um das gesamte Gewebe aus dem Bauch zu ziehen. Sobald sie befreit sind, entfernen Sie das Vorgut, Malpighian Tubules, Hindgut und Eierstöcke, um nur das dissezierte Midgut, die primäre Stelle der Verdauung, zu hinterlassen.
Im Beispielprotokoll werden wir Midguts von jungen und alten erwachsenen Fliegen sezieren, die über Fluoreszenz-aktivierte Zellsortierung (FACS) weiter analysiert werden.
- Bevor Sie mit der Zerlegung beginnen, befeuchten Sie eine Durchstechflasche mit 40 Fliegen mit Kohlendioxid auf einem Standard-Fliegenbett. Dann verwenden Sie eine Rasierklinge, um alle Fliegen zu enthaupten und übertragen Sie sie auf eine Mitbandschale mit Agarose-Gel beschichtet. Gießen Sie genug kalte PBS plus BSA in die Schale, um die Agarose zu bedecken.
Dann, für jedes Insekt, wiederum, greifen Sie einen Fliegenbauch mit einem Paar Zange, und der Thorax mit einem anderen. Trennen Sie den Thorax aus dem Bauch. Der Darm wird sichtbar sein, und die Ernte wird höchstwahrscheinlich noch mit dem Thorax verbunden sein. Schnappen Sie sich den Darm und ziehen Sie ihn aus dem Thorax. Dann greifen Sie die Ernte und ziehen Sie den Darm leicht vorderweg vom Bauch weg, um ihn zu entfalten.
Als nächstes verwenden Sie eine der Zangen, um das hintere Ende des Bauches zu greifen, und die andere, um die Kante der vorderen offenen Nagelhaut zu greifen. Ziehen Sie das hintere Ende weg, um die Nagelhaut zu brechen, und ziehen Sie weiter nachträglich sehr sanft, bis der gesamte Darm aus der Bauchhöhle gezogen wurde. Entfernen Sie das Vorgut, Malpighian Rohre, Hindgut, und Eierstöcke, die
Da die Mittelguts isoliert sind, verwenden Sie eine gläserne Pasteurpipette, um periodisch mehrere der Darmgewebe gleichzeitig auf ein 1,5-Milliliter-Mikrozentrifugenrohr mit kaltem PBS plus BSA auf Eis zu übertragen.
