Encyclopedia of Experiments: Biology
Ein Abonnement für JoVE ist erforderlich, um diesen Inhalt ansehen zu können. Melden Sie sich an oder starten Sie Ihre kostenlose Testversion.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- Till att börja med, ta bort huvudet från en bedövad vuxenfluga. Täck den halshuggna flugan med en lösning som innehåller fosfatbuffrad saltlösning, pbs, och bovint serumalbumin, eller BSA, för att undvika uttorkning.
När du är lossad, dra grödan bort från buken för att veckla ut tarmen. Dra av den bakre änden av flugan för att börja frigöra tarmen från bukhålan. Fortsätt dra tarmen för att dra hela vävnaden ur buken. När den har befriats, ta bort frambenet, malpighiska tubules, hindgut och äggstockar för att lämna bakom endast den dissekerade midguten, den primära platsen för matsmältningen i flugan.
I exempelprotokollet kommer vi att dissekera midguts från unga och gamla vuxna flugor som ska analyseras vidare via Fluorescence-Activated Cell Sorting, eller FACS.
- Innan dissekeringen påbörjas, bedöva en flaska med 40 flugor med koldioxid på en vanlig flugsäng. Använd sedan ett rakblad för att halshugga alla flugor och överför dem till en dissekeringsskål belagd med agarosgel. Häll sedan tillräckligt med kallt PBS plus BSA i skålen för att täcka agarosen. Flugorna kommer att flyta.
Sedan, för varje insekt, i sin tur, ta tag i en flug buk med ett par tångar och bröstkorgen med en annan. Separera bröstkorgen från buken. Tarmen kommer att vara synlig, och grödan kommer sannolikt fortfarande att vara ansluten till bröstkorgen.
Använd sedan en av tångarna för att ta tag i bukens bakre ände och den andra för att greppa kanten på den främre öppna nagelbandet.
När midgutsna isoleras, använd en glas Pasteur pipett för att periodiskt överföra flera av tarmvävnaderna åt gången till ett 1,5-milliliter mikrocentrifugrör som innehåller kall PBS plus BSA på is.
