0 Aufrufe • 3:10 Min. • April 30th, 2023
- Beginnen Sie mit pelletierten Eiern, die durch das Bleichen trächtiger adulter Würmer isoliert wurden. Stellen Sie sicher, dass jeder Schritt dieses Verfahrens steril durchgeführt wird, um eine Kontamination der kultivierten Zellen zu vermeiden. Suspendieren Sie das Pellet in einer Chitinase-Lösung, einem Enzym, das Chitin abbaut - ein großes Polysaccharid, das ein struktureller Bestandteil der Eierschale ist.
Nach einer angemessenen Verdauungsphase zentrifugieren Sie die Eier vorsichtig und ersetzen Sie den Überstand durch Zellkulturmedium, um die Verdauung zu stoppen. Führen Sie dann die Embryonen durch eine 18-Gauge-Nadel, um einzelne Zellen mechanisch zu trennen. Als nächstes filterst du die Lösung, um Ablagerungen von der Eierschale oder ungetrennten Zellklumpen zu entfernen. Verteilen Sie die Zellen in einer Kulturschale auf einem gläsernen Deckglas, das mit Erdnussagglutinin beschichtet ist - einem Lektin, das den Zellen hilft, sich an das Deckglas zu binden, indem es Kohlenhydrate an der Zelloberfläche bindet.
Im Beispielprotokoll bereiten wir embryonale Zellen für die in vitro morphologische Differenzierung und Analyse vor.
- Während Sie unter einer Laminar-Flow-Haube ar
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