$$\rightleftharpoonup{xx}$$
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- C. elegans bewegt sich auf der Seite, indem er sinusförmige Wellen entlang seines Körpers erzeugt. Das Tier bewegt sich in Vorwärtsrichtung, wenn sich die Wellen vom Kopf zum Schwanz ausbreiten. Umgekehrt, wenn sich die sinusförmigen Wellen vom Schwanz zum Kopf ausbreiten, bewegt sich der Wurm rückwärts.
Die Rückwärtsbewegung, die sogenannten Umkehrungen, ist kurz und erfolgt entweder spontan oder wird durch einen sensorischen Reiz ausgelöst, zum Beispiel eine sanfte Berührung der Vorderseite des Wurms. Um den Gewöhnungstest für die anteriore Berührung durchzuführen, isolieren Sie zuvor synchronisierte Würmer des gewünschten Entwicklungsstadiums auf nicht besiedelten NGM-Platten.
Berühren Sie mit einem sterilisierten feinen Haar sanft den vorderen Teil des Körpers. Dies löst eine Escape-Reaktion aus, bei der der Wurm eine Umkehrung durchführt. Warten Sie ein 10-Sekunden-Interstimulus-Intervall, damit sich der Wurm erholen kann, und wiederholen Sie die Berührung. Um die Gewöhnung, die eine Form des nicht-assoziativen Lernens ist, zu beurteilen, notieren Sie die Anzahl der Berührungen, bis keine Umkehrung mehr beobachtet wird.
Im Beispielprotokoll sehen wir eine Demonstration des Assays zur Gewöhnung an die vordere Berührung.
- Erstens: Verwendung eines feuersterilisierten 30-Gauge-Platindrahtpickels, um etwa 10 synchronisierte junge adulte Würmer auf neue, nicht ausgesäte NGM-Platten zu übertragen. Lassen Sie die Würmer fünf Minuten lang ungestört, damit sie Zeit haben, sich an die neue Platte zu gewöhnen. Sterilisieren Sie dann ein Augenbrauenhaar, das am Ende eines Holzspießes oder Zahnstochers befestigt ist, indem Sie es in 70%iges Ethanol tauchen.
Wischen Sie mit einem sauberen, fusselfreien Tuch ab und warten Sie eine Minute, bis das Ethanol verdampft ist. Berühren Sie den Wurm sanft mit den Augenbrauenhaaren auf dem Kopf. Wiederhole die Berührungen und lasse zwischen den Berührungen 10 Sekunden liegen, damit sich der Wurm erholen kann.
Berühren Sie weiter und lassen Sie 10-Sekunden-Interstimulus-Intervalle ein, bis sich der Wurm nicht mehr rückwärts bewegt. Notieren Sie die Anzahl der Berührungen, die für diese Gewöhnung erforderlich sind.
- Es ist wichtig, ein Intervall von 10 Sekunden zwischen den Berührungen einzulegen, da dies dem Tier Erholungszeit ermöglicht und dabei hilft, konsistente Gewöhnungsverhaltenstests zu erhalten.