0 Aufrufe • 2:23 Min. • April 30th, 2023
- Legen Sie einen transgenen Wurm, der GCaMP exprimiert - ein kalziumempfindliches Protein - zusammen mit bakterieller Nahrung für den Wurm in eine Bildgebungskammer. Anschließend verschließen Sie die Schale mit dem Deckel und der Laborfolie, um ein Verdampfen zu verhindern. Betrachten Sie es unter einem zusammengesetzten Mikroskop, das für Weitfeld-Epifluoreszenz ausgestattet ist. Nehmen Sie Zeitrafferbilder der Würmer auf, um ihr Verhalten zu verfolgen und Fluoreszenz mit Hilfe von Bildgebungssoftware zu erfassen.
Transgene Würmer exprimieren ein GCaMP-Sensorprotein unter der Kontrolle eines Promotors, der die GCaMP-Expression in einem bestimmten Neuron steuert. Wenn dieses Neuron aktiviert wird, feuert es ein Aktionspotential ab, das die Plasmamembran depolarisiert. Bei der Depolarisation öffnen sich spannungsgesteuerte Kalziumkanäle in der Plasmamembran. Dies bewirkt einen Einstrom von Kalziumionen in die Zelle, was zu einer neuronalen Erregung führt.
GCaMP im angeregten Neuron bindet die Kalziumionen. Dies führt dazu, dass GCaMP fluoresziert, wenn die Würmer mit einem Fluoreszenzanregungslicht niedriger Intensität abgebildet werden. Im Beispielprotokoll werden wir Calcium-Imag
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