Messung der Muskelfläche von C. elegans: Eine standardisierte Methode zur Quantifizierung der Morphologie der quergestreiften Muskeln

- C. elegans haben zwei Arten von Muskeln. Zu den einzelnen Sarkomeren oder nicht quergestreiften Muskeln gehören die Muskeln im Rachen und in der Vulva. Die multiplen Sarkomere oder schräg quergestreiften Muskeln sind rautenförmige Körperwandmuskeln, die nach dem regelmäßigen quergestreiften Muster ihrer Myosinfasern benannt sind.

Sie sind in versetzten Paaren als vier Bündel längs ausgerichtet in den vier Quadranten des Wurmkörpers, im Querschnitt betrachtet, angeordnet. Jede Zelle hat viele gleichmäßig verteilte Befestigungspunkte an der Unterhaut und der Kutikula. Diese Anordnung hilft, Wellen von Muskelkontraktionen in eine reibungslose Fortbewegung zu übersetzen.

Um diese Muskeln sichtbar zu machen, werden immobilisierte Würmer mit transgenem GFP-markiertem Myosin durch konfokale Fluoreszenzmikroskopie abgebildet. Verwenden Sie eine Analysesoftware, um die Fläche einer quergestreiften Muskelzelle und alle Lücken im Fasermuster dieser Zelle zu messen. Lücken in der Muskelfaserorganisation könnten auf eine Störung durch Faserabbau oder die Ansammlung von Zelltrümmern hinweisen. Berechnen Sie das Verhältnis der Lückenfläche zur Gesamtfläche, um das Ausmaß der Störung zu definieren. Im Beispielprotokoll werden wir die Morphologie der Körperwandmuskulatur anhand von Fidschi quantitativ bewerten.

- Um die Fläche der Muskelzellen zu messen, öffnen Sie das Bild in der Fidschi-Software und verwenden Sie die Polygonauswahl, um eine einzelne schräge Muskelzelle vorsichtig zu verfolgen. Passen Sie die Linie des Polygons am Ende an, indem Sie den Ankerpunkt ziehen, um die Nachzeichnung zu verbessern. Navigieren Sie zur Registerkarte Analysieren oben in der Software und klicken Sie auf Messen, um den ausgewählten Bereich zu berechnen.

Bei Muskelzellen mit einem degenerierten oder fehlenden Bereich zeichnen Sie den fehlenden Bereich mit dem Polygonauswahlwerkzeug nach und klicken Sie erneut auf Messen. Wenn mehrere Lücken vorhanden sind, zeichnen Sie jede Lücke separat nach. Berechnen Sie das Verhältnis der Lückenfläche zur Fläche der gesamten Zelle. Ein hohes Verhältnis deutet auf ein höheres Ausmaß der Muskeldegeneration hin, und wenn keine Regionen fehlen, wird das Verhältnis als Null berechnet.